罗氏生化分析仪8000 [G6PD试剂盒在Roche modulor 010自动化分析仪上的应用及评价]

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  【摘要】目的:评价G6PD试剂盒在Roche modulor 010自动化分析仪的应用情况。方法:通过重复测定检测系统的精密度,按EP6-A文件稀释并检测线性,同时检测质控物评价其稳定性。另外,检测疑似HbH病人的G6PD活性。结果:MHb-RT高值和低值标本批内、批间CV分别是4%、3%和2%、8%;G6PD/6PGD比值的决定系数R2分别为0.999;质控物CV值为2%。3例疑似HbH病人标本检测结果正常。结论:此试剂盒的精密度和线性较好,能够满足临床常规检验需要。
  【关键词】G6PD;精密度;线性关系;Roche modulor 010自动化分析仪
  文章编号:1009-5519(2008)16-2387-03 中图分类号:R446 文献标识码:A
  
  葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症是基因突变引起的一种X连锁不完全显性遗传性疾病。G6PD是磷酸戊糖旁路代谢中产生还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的关键酶,其缺陷可导致蚕豆病、药物性溶血、新生儿溶血、感染性溶血及非球形细胞溶血性贫血等,在世界范围内约有4亿人受累,中国主要是广东、广西、海南、云贵等地区。多年来,G6PD的检测方法在不断更新,目前主要有:四氮唑蓝纸片定性法、变性珠蛋白小体生成试验、高铁血红蛋白还原试验(MHb-RT)、荧光斑点法(FST)、G6PD活性测定,以及基因检测等[1]。其中,通过全自动生化分析仪检测G6PD活性是临床常规检验发展的趋势。本文在Roche modulor 010自动化分析仪上对米基公司G6PD检测试剂盒的精密度和线性等进行初步评价。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 试剂:G6PD测定试剂及配套质控物由广州市米基医疗器械有限公司提供,批号GS070720-08。
  1.2 方法
  1.2.1 原理:人红细胞(RBC)戊糖代谢的关键酶G6PD催化G6P(6-磷酸葡萄糖)转化成6PG(6-磷酸葡萄糖酸)时,伴有将NADP(氧化型辅酶II)转化为NADPH的作用。因此NADPH的量可以反映G6PD活性。但是,单独检测G6PD活性不能排除因其他原因对G6PD活性的影响,如:贫血、标本溶血、凝血、陈旧以及污染等。因为,一般RBC戊糖代谢的另一同工酶6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGD)活性稳定,所以,可以同时测定6-PGD的活性将其作为内标物避免加样的误差,计算G6PD/6PGD比值来判断G6PD活性是否缺乏。
  1.2.2 参数设置:实验仪器为Roche modulor 010自动化分析仪,检测方法为速率法,主要按照厂家提供的检测参数进行设置。
  1.2.3 标本预处理时间的确定:取MHb-RT正常标本按说明书要求配成血红蛋白液(全血20 μl+1.2 ml蒸馏水),分别在10、20、30和40分钟(min)时上机检测。
  1.2.4 精密度测定[2]
  1.2.4.1 批内精密度测定:取MHb-RT检测结果为98.5%和12.4%的高值(H)、低值(L)标本,重复20次测定,计算高值、低值标本均值(x)、标准差(S)及变异系数(CV%)。实验在30min内完成。
  1.2.4.2 天间精密度测定:标本同1.2.4.1部分。将2 ml全血分装到5支试管,4 ℃保存,每2 d用1支,吸样后迅速保存于4 ℃,在Roche modulor 010上连续测定10 d。计算高值、低值标本均值(x)、标准差(S)及变异系数(CV%)。
  1.2.4.3 线性测定:按EP6-A文件进行标本浓度稀释。取一个MHb-RT检测的高值标本(H)和一个低值标本(L),按照3(H):1(L),1(H):1(L),1(H):3(L),配成3个中间浓度水平,加上原先两个水平,共5个水平,每个水平测2次,取均值作线性回归分析。
  1.2.5 质控物稳定性的评价:取质控品每天测试1次,连续测试10 d,分析其稳定性。
  1.2.6 疑似HbH病标本的检测 对3例Hb电泳出现可疑条带,高度怀疑为HbH病的标本进行MHb-RT试验,同时进行G6PD活性测定。
  1.3 统计方法:用SPSS10统计软件和Microsoft Excel进行数据分析。
  
  2 结果
  
  2.1 上机时间对检测结果的影响。试剂盒说明书要求试验在标本前处理后20min内上机检测。为满足实验室临床实际操作的要求,本文分析了不同上机时间对检测结果的影响,发现在标本预处理后40min内进行检测,结果不会出现明显变化,见表1。
  
  2.2 精密度实验
  2.2.1 批内精密度:分别对MHb-RT实验结果高值(H)、低值(L)标本,进行20次重复测定,结果见表2。
  
  2.2.2 天间精密度测定:分别对MHb-RT实验结果高值(H)、低值(L)标本,连续重复测定10 d,结果见表3。
  
  2.3 线性测定:本文按照EP6-A文件进行样品线性分析。由图1可见,6PGD活性随稀释比例变化不大,回归线近水平;但G6PD检测则出现明显的斜线线性。G6PD/6PGD比值的R2为0.999,说明线性良好。结果见表4、图1、图2。
  
  2.4 质控物检测结果:连续10天检测厂家质控品结果见表5。
  
  
  3 讨论
  
  检测原理上,米基公司试剂盒采用双试剂法检测,从一定程度上能够减少血脂等干扰,但是,比值法的检测是在假设内标物6PGD活性正常的情况下进行的,有资料显示个别病人出现6PGD缺乏的情况[3],所以在检测过程中需要引起重视。
  按厂家提供的参数设置检测时间点16~31,实验发现,连续监测曲线的第十六点正好在2试剂加入点附近,因此我们将检测点由16~31修改为18~31。检测曲线为线型,不影响检测结果。
  在精密度试验方面,单独测G6PD活性的批内精密度尚可,比值CV%都<5。但天间CV%值较大(>10),低值(L)标本G6PD/6PGD比值CV%值<10,估计与标本保存条件等有关。
  质控物的性质是评价试剂盒优劣的一个重要指标。本文通过连续10d检测发现G6PD、6PGD的CV%较大,接近20%,可能与质控物在第五天后出现溶血有关;但G6PD/6PGD比值CV%却很小,为2%。说明G6PD/6PGD比值不受溶血的影响。这也就是该试剂盒采用(比值法)进行G6PD活性高低判断的优点所在。但是,由于厂家提供的质控品的使用期较短,频繁的更换质控物不利于建立westgard质控图,对检测进行长期的监控,是该试剂盒亟待解决的一个问题。
  HbH病的RBC脆性减低,在蒸馏水中不能完全溶血,所以会使MHb-RT结果偏低,造成假阳性。遇到这样的标本,采用MHb-RT法就要先离心,再比色。本试验以比值法检测了3例HbH病的标本,发现该法不受RBC脆性减低的干扰。
  
  参考文献:
  [1] 叶应妩,王毓三,申子瑜,等.全国临床检验操作规程[M].第三版.南京:东南大学出版社,2006.1.
  [2] National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices,Approved guide-line[S]. NCCLS,Document EP5-A,1999.1.
  [3] Caprari P,Caforio MP,Cianciulli P,et al.6-Phosphogluconate dehy-drogenase deficiency in an Italian family[J]. Ann Hematol,2001,80(1):41.
  收稿日期:2008-05-05

本文来源:http://www.zhangdahai.com/2019/guanhougan_0302/336.html

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