[HPLC法测定茵栀黄注射液中绿原酸的含量] 金银花绿原酸含量测定

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  【摘要】目的:建立HPLC法测定茵栀黄注射液中绿原酸的含量。方法:采用C18柱,以甲醇-3%冰醋酸(13∶87)为流动相,流速为1.0 ml・min-1;检测波长为327 nm,柱温为30℃。结果:绿原酸在0.384~1.92 μg与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.85%,RSD为0.90%(n=5)。结论:该方法简便,结果准确,可作为本品质量和含量测定控制方法。
  【关键词】HPLC;茵栀黄注射液;绿原酸
  文章编号:1009-5519(2008)17-2553-02 中图分类号:R28 文献标识码:A
  
  茵栀黄注射液是由茵陈、栀子、黄芩苷、金银花4味中药制成的注射液, 具有清热, 解毒, 利湿, 退黄之功效。临床上用于肝胆湿热, 面目悉黄, 胸胁胀痛等。其收载于《卫生部药品标准》第十四册, 其质量标准中无绿原酸含量测定项[1]。茵陈、金银花均为方中主药,绿原酸为金银花中主要有效成分。为了有效地控制产品质量[2,3],采用高效液相色谱法(HPLC)测定茵栀黄注射液中绿原酸的含量,方法灵敏度高、专属性强、重现性好、结果准确。
  
  1 仪器与试药
  
  Waters-2695型液相色谱仪,Waters-2996型紫外检测器,Empower色谱工作站;色谱柱:Phenomenex C18柱Gemini(250×4.6 mm,5 u);绿原酸对照品(中国药品生物制品检验所,批号:110753-200413);甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为纯化水。茵栀黄注射液为市售3批(批号:060124、060326、0706181)。
  
  2 方法与结果
  
  2.1 色谱条件:流动相为甲醇-3%冰醋酸(13∶87),流速:1.0 ml・min-1,检测波长:327 nm,流量:1.0 ml
  ・min-1,柱温:30 ℃,进样体积:20 μl。
  2.2 对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品19.20 mg,置500 ml量瓶中,加纯化水稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
  2.3 样品溶液的制备:取样品5支混匀,精密量取5 ml置50 ml容量瓶中,加纯化水稀释至刻度,摇匀,超声5分钟,用0.45 μm水溶性滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
  2.4 标准曲线的制备:取绿原酸对照品溶液分别进样10 μl、15 μl、20 μl、30 μl、50 μl,即得含绿原酸0.384、0.576、0.768、1.152、1.920 μg的对照品溶液,测定峰面积,以绿原酸质量(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标,进行线性回归,得出回归方程以及线性范围。Y=2.82×106X+60.3,r=0.9999,绿原酸进样量在线性范围0.384~1.920 μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。
  2.5 进样精密度试验:在上述色谱条件下,取绿原酸对照品溶液重复进样6次20 μl,记录峰面积,RSD为0.6%。
  2.6 重复性试验:精密称取同一批号的样品(批号0706181)5份,按照样品测定的方法操作,测得绿原酸平均含量为0.1172 mg/ml, RSD为0.8%。
  2.7 加样回收试验:精密称取已知含量的样品5份,每份加入精密称量的对照品溶液适量混匀,然后用流动相定容到50 ml量瓶中,照样品含量方法操作,计算回收率见表1。
  2.8 稳定性实验:取样品(批号0706181)新配的供试品溶液分别在0,1,3,5,8 h进样20 μl,测定绿原酸的峰面积,结果RSD为1.7%,表明供试品溶液在8h稳定。
  
  2.9 样品的含量测定:取3批样品,按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,依上述色谱条件测定含量,分别进样20 μl,记录色谱图,外标法计算,结果见表2,图1。
  
  
  3 讨论
  
  3.1 检测波长:绿原酸在327 nm的波长处均有最大吸收,采用327 nm作为检测波长,绿原酸的吸收强度适宜,而其它组分响应相对比较小。
  3.2 流动相及色谱柱选择:参考有关绿原酸含量测定[3,4]的方法,分别选用乙腈:0.2%磷酸水溶液(10∶90),甲醇:3%醋酸溶液(13∶87)等多种流动相分别在长短两根色谱柱比较,得出结论。由于样品溶液中成分复杂,使用长的色谱柱分析效果较佳,而且可以延长其保留时间,获得理想的分离效果。用甲醇:3%醋酸溶液(13∶87)做流动相分离效果最好,在此流动相下样品中黄芩苷洗脱不掉,因此在做完实验过程中,用纯甲醇要多冲洗色谱柱。有利于色谱柱保养。
  
  3.3 绿原酸为茵栀黄注射液的主要活性成分之一,对绿原酸含量的测定能直接反应药品的质量,确保其疗效,控制好产品的质量。
  
  参考文献:
  [1] 中华人民共和国卫生部药品标准. 中药成方制剂[S]. 第十四册,1990.94.
  [2] 何绍萍.HPLC测定茵栀黄注射液中栀子苷的含量[J].海峡药学,2006,18(3):55.
  [3] 郑建津,倪伟磊.HPLC法测定银黄片中绿原酸含量[J].西北药学杂志,2007,22(5):236.
  [4] 尤淑贤,陈庆辉.HPLC法测定金牡感冒片中绿原酸的含量[J]. 海峡药学,2007,19(10):72.
  收稿日期:2008-04-30

本文来源:http://www.zhangdahai.com/2019/xuexilanhuixindetihui_0302/103.html

注射液 含量 法测定 HPLC
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