[白藜芦醇对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用]打博莱霉素后肺纤维化

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  【摘要】目的:探讨白藜芦醇(Res)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化(PF)的治疗作用。方法:复制小鼠博莱霉素致PF模型,采用光镜观察组织学改变,测定肺组织羟脯氨酸(HyP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以反映肺细胞损伤及PF的程度。结果:Res能显著降低实验性PF小鼠肺组织中Hyp、MDA的含量,显著提高小鼠肺组织的SOD活力。病理组织学检查亦表明,Res能明显改善肺泡炎症程度和PF程度。结论:Res对实验性小鼠PF具有一定的治疗作用。
  【关键词】白藜芦醇;肺纤维化;羟脯氨酸;丙二醛;超氧化物歧化酶
  文章编号:1009-5519(2008)24-3643-03 中图分类号:R5 文献标识码:A
  
  肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)是多种原因引起的急慢性间质性肺疾病(Interstitial lung disease,ILD)的共同结局,病因复杂,1713年首次描述,认为发生原因是有机抗原的吸入。现认为可能与遗传易感性[1]、病毒感染、免疫功能异常[2]、环境污染、药物及化学品、放射线等有关;发病机制不明,病理特点是肺部炎症导致肺泡持续性损伤及细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的过度沉积;临床主要表现为进行性呼吸困难,干咳、疲乏,最终发生低氧血症和呼吸衰竭。特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)约占所有ILD的一半[3],病情呈进行性发展,患病率约为7~20/10万人[4],并随年龄的增长而增加,5年生存率70%[5],确诊后中位生存期3年,或出现症状后5年。其病理改变以出现片状、不均一、分布多变的间质改变为特征。目前拥有的治疗肺纤维化的手段只能减轻患者的症状,并没有使患者的生存率有所改善[6]。
  白藜芦醇(Resveratrol,Res)是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物, 化学名为3,4",5-三羟基反均二苯代乙烯,于1940年首次从毛叶藜芦的根部分离得到,到目前为止发现其广泛存在于葡萄、虎杖、花生、桑椹、松树、买麻藤、朝鲜槐等12科、31个属的72种植物中。研究发现它具有多方面有益于人类健康的重要生物药理活性,包括抗菌消炎、抗氧化、生长抑制活性、抗血小板聚集、激素调节和抗肿瘤活性等,深受国内外生物医学界的重视[7]。近年来越来越多的资料表明Res对肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、急性肺损伤、肺癌、肺动脉高压等具有防治作用[8],但其对肺纤维化是否也有防治作用还不清楚。本实验通过制备BLM诱导的小鼠肺纤维化模型,观察Res对BLM致小鼠肺纤维化模型肺组织的病理学改变,研究Res对肺纤维化动物模型的治疗作用,从而为Res治疗PF提供实验依据和理论依据。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 实验动物:清洁级健康昆明种小鼠120只,体重18~22 g,由苏州大学医学院实验动物中心提供,适应性喂养3天后用于实验。
  1.2 实验药物与仪器:Res购自西安天一生物技术有限公司,化学纯度为98%以上;醋酸泼尼松片购自天津药业焦作有限公司生产;注射用BLM由日本化药株式会社生产。羟脯氨酸(HyP)含量测定、超氧化物歧化酶(SOD)活力测定、丙二醛(MDA)含量测定、谷胱甘肽含量测定和总蛋白测定等试剂盒购自南京建成生物工程公司。OLYMPUS CX31光学显微镜;722型分光光度计。
  1.3 实验方法
  1.3.1 动物造模方法:用4%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.1 ml/10g体重),小鼠仰卧固定于鼠台上,颈部酒精消毒后逐层分离并暴露气管,注射器经气管软骨环间隙朝向心端刺入气管,然后缓慢注入0.05 ml BLM生理盐水溶液(5 mg/kg)或生理盐水溶液,注后立即将动物直立并左右旋转,使药液在肺内均匀分布。实验期间,小鼠自由饮水和进食。
  1.3.2 动物分组与处理方法:昆明种小鼠随机分为4组:假手术组、模型组、Res治疗组和阳性药物组(醋酸泼尼松片),每组30只。昆明种小鼠造模后第二天,分别给各组小鼠生理盐水,醋酸泼尼松和Res。Res治疗组于造模第二天起给Res 100 mg/kg灌胃,泼尼松组给泼尼松6.67 mg/kg灌胃,假手术组和模型组给予等容积的生理盐水灌胃。假手术组、模型组、Res治疗组和阳性药物组分别于给药后7天、14天和28天颈椎脱臼处死,分离出双肺,取右肺置于4%甲醛溶液中固定,常规石蜡切片,HE染色;部分肺组织在冰浴条件下制成5%匀浆并冷冻保存,用于生化指标测定;部分肺组织冷冻保存,用于羟脯氨酸含量测定。
  1.3.3 组织病理学观察:取右肺,4%甲醛溶液固定,常规病理学方法脱水、包埋 、切片、HE染色。根据Szapiel等方法评价肺泡炎症和肺纤维化程度。肺泡炎症及纤维化的判断:0级:无肺泡炎或纤维化;1级:病变范围占全肺的20%以下;2级:病变范围占全肺的20%~50%;3级:病变范围超过全肺的50%。
  1.3.4 肺组织HyP含量测定:肺组织HyP含量按HyP含量测定试剂盒说明书采用样本碱水解法进行。
  1.3.5 肺组织SOD、MDA含量的测定:肺组织SOD、MDA含量按照南京建成的相关测定试剂盒进行测定。
  1.3.6 统计分析:实验数据采用统计软件SPSS11.0进行单因素方差分析,实验结果采用(x±s)表示,P   氧自由基的大量产生在BLM所致的PF形成中起重要作用。BLM与组织中的亚铁离子结合形成复合物,该复合物能为氧分子提供电子,催化Res的生成。Res可以通过多种方式损伤肺组织,最终促进肺纤维化的形成。SOD是体内重要的清除氧自由基的酶,对机体的氧化/抗氧化平衡起着至关重要的作用,可以保护肺组织细胞免受损伤。其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力。氧自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸,形成脂质过氧化物,主要是MDA,其含量的高低可以反映机体内脂质过氧化的程度,间接反映出细胞损伤程度。因此,SOD与MDA常同时测定来评价抗氧自由基的价值。Res是一个有效的羟基、超氧化物和金属诱导基团的清除剂,并对活性氧Res引起的细胞膜脂质过氧化和DNA损伤具有保护作用。本实验研究发现BLM能造成小鼠体内抗氧化酶系SOD活性的降低,MDA的含量增加,反映出脂质过氧化物生成量的增加,而Res通过升高肺组织SOD活力,降低肺组织MDA的含量,清除体内过多的氧自由基而抑制细胞外基质的异常重构所致的纤维化。
  本实验研究结果表明BLM诱导的PF小鼠体内的SOD活力降低,MDA水平升高,产生过多的氧自由基,引发细胞和组织受到损伤,这可能是诱发PF的病因之一。
  
  参考文献:
  [1] Marney A,Lane KB,Phillips JA,et al.Idiopathic pulmonary fibrosis can be an autosomal dominant trait in some families[J].Chest,2001,120(1):565.
  [2] Winkler MK,Fowlkes JL. Metalloproteinase and growth factor inter-actions:do they play a role in pulmonary fibrosis?[J]. AmJPhysiol Lung Cell Mol Physiol,2002,283(1):11.
  [3] Li-kun Gong,Xiang-hong Li,Hui Wang,et al. EffectofFeitai on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats[J]. Journal of Ethno-pharmacology,2005,96:537.
  [4] Coultas DB,Zumwalt RE,Black WC,et al. The epidemiology of in-terstitial lung diseases[J].Am J Respir Crit Care Med,1994,150:967.
  [5] Perez A,Rogers RM,Dauber JH.The prognosis of idiopathic pulmo-nary fibrosis[J]. Am J Respir Cell Mol Biol,2003,29(3 Suppl):S19.
  [6] Collard HR,Ryu JH,Douglas WW,et al.Combined corticosteroid and cyclophosphamide therapy does not alter survival in idiopathic pul-monary fibrosis[J].Chest,2004,125:2169.
  [7] Mohammad A,Jung HB,Xiuwei T,et al.Resveratrol:a review of pre-clinical studies for human cancer prevention[J].Toxicology and Aplied Pharmacology,2007,224:274.
  [8] 包海荣,刘继新,刘晓菊.白藜芦醇抗肺部疾病作用的研究进展[J].国际呼吸杂志,2007,27(9):681.
  [9] Nakagome K,Dohi M,Okunishi K,et al.In vivo IL-10 gene delivery attenuates bleomycin induced pulmonary fibrosis by inhibiting the production and activation of TGF-β in the lung[J].Thorax,2006,61:886.
  收稿日期:2008-08-07

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本文来源:http://www.zhangdahai.com/gerenwendang/changyongwenshu/2019/0303/3292.html

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