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【摘要】 目的探索病理HE切片常见的质量问题,并提出相应的预防和处理方法,提高HE切片质量。方法 回顾性地复习一定时期内本科所有的病理HE玻片,按照病理HE玻片中出现的质量问题进行总结、分析和分类,然后归纳。结果 病理HE切片常见的质量问题基本上都是由于病理技术员经验不足、操作不当 、责任心不强所造成。结论 应加强从业病理技术员的系统而严格的工作培训,病理技术员要积极主动认真地工作,积累工作经验,端正工作态度,寻找出现质量问题的根源,提高HE切片的质量水平。
【关键词】HE;切片质量;处理方法; 预防; 回顾性
【Abstract】 Objective To investigate the common quality problems on HE seetiong, and propose prevention and managements to improve the quality of HE stainings. Methods A retrospective review of all HE slides at a certain period of time were done to sum up, analysis and classify the quality problem in accordance with slides.Results The most common problems on quality are basically due to the inexperience of pathology technicians, improper operation,and poor responsibility. Conclusion Pathology technician practitioners should be trained strictly andsystemically. Theyshould take the initiative to work seriously, accumulate work experience, correct work attitude, look for the root causes of quality problems to improve the quality of HE sections.
【Key words】HE sections;Quality;Management;Prevention; Retrospect
苏木精(Hatmatoxylin)伊红(Eosin)染色法,简称HE染色法,是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法[1]。HE染色法是病理组织制片工作中一项最基本、最常用的技术方法,广泛应用于临床病理诊断、教学和科研工作中。由于一些病理技术人员未经过严格而系统的工作培训,工作中经验不足,操作不当,常出现切片脱落、染色不均匀,模糊不清、皱褶及细胞核浆对比不明显等现象而影响诊断[2]。容易造成误诊或漏诊,甚至酿成医疗事故。因此,HE切片质量的好坏直接影响病理诊断、教学和科研的准确性。在HE制片的过程中,要不断地总结、分析病理HE切片常见的质量问题,积累工作经验,端正工作态度,提高HE切片的质量水平,为病理诊断、教学和科研的准确性提供可靠的科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料 随机选择2007年1月至2009年1月我病理科存档的HE玻片1500张,包括有全省各地医院的会诊玻片。其中包含人体所有的器官和组织。
1.2 采用双盲法 由5个有经验的病理医生和病理技术员按肉眼观察和镜下观察二种方法随机单独阅片,将1500张玻片中每一张所出现的质量问题进行列举,然后统一分类、总结和归纳。
2 结果和处理办法
2.1 肉眼观察结果 ①切片脱落、重叠或有皱褶;②中性树胶溢出或中性树胶不够形成空泡;③跳刀有波浪样或搓衣板样改变; ④组织残缺不全或有刮划痕迹; ⑤组织龟裂或有异物污染。
2.1.1 预防和处理办法 ①由于新购买的玻片的洁净度不够或玻片表面有油脂,切片粘贴不牢;烤片时间不足、烤片温度过低或切片过厚造成切片脱落而重叠或有皱褶。因此,新购买的玻片最好能用硫酸清洁液浸泡一晚,然后流水冲洗干净;在适宜的温度下烤片时间宁长勿短,保证有充足的烤片时间和温度;切片刀要锋利,才能切出厚薄适宜的切片,保证切片不会因为过厚而脱落,造成重叠或有皱褶,影响病理医生的观察,造成造成误诊或漏诊,甚至酿成医疗事故;②中性树胶浓度要适宜,树胶过浓,封片时容易出现空泡或树胶不能覆盖整张切片而组织切片干涸,影响病理医生的观察,造成造成误诊或漏诊,甚至酿成医疗事故;树胶过稀,封片时树胶外溢,影响外观。其次,干涸的组织细胞核透明不良,细胞核变黑;③出现跳刀有波浪样或搓衣板样改变的现象一般都是由于组织太硬或切片刀不够锋利造成的;也可能是由于切片机的零件松动造成的。因此,切片前要把切片机的有关螺旋拧紧,没有拧紧或包埋的蜡块过硬时就会出现跳刀,形成波浪样或搓衣板样改变的现象。同时,调整刀锋与蜡块的适宜角度,也可以防止跳刀的现象出现;④组织残缺不全是由于切片时修整蜡块时深度都不够、组织没有全部暴露于切面;切片的刮划痕迹是由于切片刀的刀锋有缺口或者是包埋的组织有异物、钙化组织、骨组织及包埋石蜡有沙粒造成的。因此,切片时必须在修整蜡块时保证组织块全部暴露于切面;保证切片刀的锋利没刀口;同时在组织取材时去除手术异物和钙化组织;骨组织要完全脱钙。这样可以保证切片的完整和平整美观;⑤组织龟裂是由于烤片时温度过高,切片急速受热切片过度伸张引起的;由于展片用的水有异物而污染切片。因此,贴片用的水要勤换,防止异物污染;同时,切片在空气中略干燥后烤片,烤箱温度为65℃为宜,烤切片时间15～30 min为宜。对于脑组织切片必须待切片完全晾干后才能烤片。
2.2 镜下观察结果 ①脱蜡不干净,可见片状或点状发白;③染色失效,细胞核与细胞浆对比不清;③切片过厚,细胞核模糊不清;④透明不够或有水份,切片模糊不清;⑤切片伸展不平,出现地图纹或鸡爪纹;⑥切片有异物污染或苏木素沉渣污染。
2.2.2 预防和处理办法 ①石蜡切片必须经过脱蜡才能染色,脱蜡的好坏取决切片的温度和二甲苯的温度,当温度低于25℃以下时,必须将切片放置温箱加热到切片的石蜡融化后立即入二甲苯中脱蜡,或者将二甲苯稍加热脱蜡,这样可以脱蜡更加完全,更加彻底,然后经过梯度的泡洗,把二甲苯洗干净才能染色,否则,由于切片中石蜡或二甲苯的�留,染色剂与细胞不能有效接触而不着色,导致切片出现片状或点状发白;②由于苏木素染液和伊红染液多次使用而变得�旧,细胞核与细胞浆不易上色而导致染色失败,细胞核与细胞浆对比不清,所以苏木素染液和伊红染液要经常更换,保持染液有效。同时切片经苏木素染液染色时间不能太长,染色后在水中停留太长时间会使染色质变蓝,即使用盐酸酒精分化都不能把蓝色除去,切片会变得一片蓝,细胞核与细胞浆模糊不清,对比不明显。因此,苏木素染色时间要适宜,一般浸染5 min左右,染色后水洗时间要短。分化用的盐酸酒精液要经常更换,保持分化液的有效浓度和成分;③由于切片刀不够锋利或者组织脱水不理想、包埋石蜡熔点过低、组织块冰冻不够以及切片机准确度不高都会导致组织切片过厚,切片经染色后细胞重叠,细胞核模糊不清,镜下难以聚焦,难以观察细胞核,影响镜下观察,容易造成误诊或漏诊,甚至酿成医疗事故,直接影响病理诊断、教学和科研的准确性。因此,操作的病理技术员必须加强责任心,切片前选择锋利的切片刀,勤磨刀和勤换刀口,保持切片刀的锋利;勤换组织脱水的溶液,保持溶液的有效浓度和成分;切片机要勤保养,保持切片机的最佳状态;多比较和选择适宜的包埋石蜡,选择最佳熔点的包埋石蜡。争取切出厚薄均匀的切片;④由于脱水透明的溶液的有效浓度和成分减弱,溶液的含水量增加,溶液的脱水透明能力减弱,导致切片脱水透明不够或有水份,切片模糊不清。所以脱水透明用的溶液要勤换,保证切片的透明;同时封片时不要对着切片呵气和说话,避免呵出的气流中的水蒸气模糊切片;⑤贴片用的水如果温度过低,切片在水中伸展不开,则切片经染色后出现地图纹或鸡爪纹;如果水温过高,切片在水中由于温度太高来不及伸展,切片的石蜡已经融化,切片的皱褶伸展不开也会出现图纹或鸡爪纹,因此,贴片用的水温要控制在50℃左右,可以避免切片要皱褶出现; ⑥为了避免切片有异物污染或苏木素沉渣污染,染苏木素前必须把苏木素液表面的氧化膜去除,苏木素液表面的氧化膜污染的切片,经分化液和乙醇、水都不能把它洗去;切片浸入苏木素液时动作要轻,避免苏木素沉淀物浮起污染的切片;同时贴片用的水要经常更换,以保持贴片用的水的干净,防止贴片用的水中异物污染。
3 讨论
病理制片技术是病理学的一项重要组成部分,它广泛地应用于临床病理诊断、教学和科研工作;要想制作出高质量的HE病理切片首先要求病理技术员有熟练的制片技术和精湛的专业技术素养,同时还要具备高度的责任心和同情心,只有这样才能制作出高质量的HE病理切片。关键还是技术员的技术水平,只有刻苦钻研业务技术,不断探索,对技术精益求精,才能为病理学科的诊断、教学和科研工作制作出高质量的玻片[3]。影响HE染色质量的因素是多方面的,只有认真对待,科学处理,精益求精才能制作出高质量的切片。
参 考 文 献
[1] 王伯沅,李玉松,等.病理学技术.人民卫生出版社,2000,6:128.
[2] 黄亚凤,强欣,王玉荣.石蜡切片HE染色体会.内蒙古民族大学学报(自然科学版),2004,19(4):436.
[3] 凌启波,梁英杰.HE制片质控要求.临床与病理学杂志,2000,16(4):333.
