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摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定复方毛冬青注射液中尿苷、腺苷的含量。方法：使用waters XTerra RP18柱(250mm×4.6mm，5.0μm)，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(98：2)为流动相，流速lmL/min；检测波长为262nm。结果：此方法线性关系良好，腺苷平均回收率为95.32%，RSD为1.0%(n=6)，尿苷平均回收率为99.87%，RSD为0.18%(n=6)。结论：本方法可用于复方毛冬青注射液的质量控制。
关键词：复方毛冬青注射液；尿苷；腺苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)06-032-02
复方毛冬青注射液是由毛冬青、南板蓝根、鱼腥草、大青叶四味药材经一定的工艺提取制成的注射液。该注射液由广州市儿童医院自行研制，具有消炎解毒的功效，可用于儿童扁桃体炎、淋巴结炎、腮腺炎、肺炎及病毒感染引起的各种疾病，临床疗效显著[1]，其中南板蓝根、大青叶中所含有丰富的腺苷、尿苷，本文采用高效液相色谱法对复方毛冬青注射液中所含功效成分腺苷、尿苷进行了定性和定量方法的研究。该法灵敏、准确和重现性好，可作为本品的质量控制方法。
1 仪器与试药
Waters 1525系列高效液相色谱仪，waters 2487紫外检测器，Breeze色谱工作站。
尿苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号887-200001，含量测定用)，腺苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号879-200001，含量测定用)。
乙腈为色谱纯(美国B&J公司)，水为重蒸水，其余为分析纯。样品由广州市儿童医院提供。
2 实验方法与结果
2.1 测定波长的选择
取尿苷、腺苷适量，加水制成对照品溶液，用紫外分光光度计记录其紫外吸收光谱，结果显示，腺苷的最大吸收波长为260 nm，尿苷最大吸收波长254 nm，在260 nm也有较大吸收，且该波长附近吸收值稳定范围较宽。因此，选择260 nm作测定波长。
2.2 色谱条件和系统适应性试验
色谱柱：waters XTerra RP18(250nm×4.6nm，5μm)；流动相：0.02%磷酸二氢钾-乙腈(98：2)；检测波长：262nm；流速：1.0mL/min，进样量为10μL 。理论塔板数按尿苷峰计算不低于2500。在此条件下尿苷、腺苷与其它组分峰能达到很好分离。
2.3 对照品、供试品溶液和空白溶液的制备
2.3.1 对照品溶液制备
取经P2O5减压干燥24h的尿苷、腺苷对照品适量，精密称定，加水制成每lmL分别含58.6μg、40.2μg的溶液。
尿苷对照品
腺苷对照品
图1 尿苷、腺苷对照品色谱
2.3.2 供试品溶液的制备
直接取复方毛冬青注射液测定。
图2 复方毛东青注射液色谱
2.3.3 空白溶液的制备
按处方量取毛冬青、鱼腥草的同法制成空白对照溶液。
图3 空白溶液色谱
2.4 测定方法
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪，测得色谱峰面积，计算样品含量。
2.5 专属性试验
取空白溶液同法测定，在尿苷、腺苷对照品峰相应的位置未出现色谱峰，说明空白溶液对尿苷、腺苷的测定无干扰。
2.6 线性关系考察
2.6.1 线性关系试验
精密称取10mg的尿苷、腺苷对照品，精确至0.00001g，用水溶解并定容至100mL，浓度为100μg/mL，作为母液。将腺苷稀释成0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/mL水溶液；将尿苷稀释成0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0μg/mL水溶液。按确定好的分离条件分别进样，根据对照品的浓度和峰面积，经化学工作站或用Excel软件计算，得线性回归方程和相关系数。
2.6.2 2种核苷类物质的线性关系
根据仪器分析结果，2种核苷类物质的峰面积(Y)对浓度(y)作图，并得到相应的回归方程分别为：腺苷Y=63.5970X+1.3829，相关系数为0.9999；尿苷Y=742.8820X-0.3838；相关系数为1，说明上述两种物质在所选的浓度范围内有极好的线性关系。
2.7 精密度试验
取10.0μg/mL的腺苷品，3天内不同时间多次进样，峰面积分别为：8334、8238、8355、8249、8268、8256、8262、8371、8314、8365，平均峰面积为8300.8，RSD为0.62%(n=10)取10.0μg/mL尿苷对照品，3天内不同时间多次进样，尿苷峰面积为：10700、10460、10712、10647、10639、10730、10679、10465、10763、10659，平均峰面积为10645.4，RSD为0.97%(n=10)。以上结果说明：腺苷、尿苷样品稳定，供试仪器稳定且精密度高。
2.8 回收试验
精密量取已知含量的复方毛冬青注射液精密加入对照品，按照供试品溶液测定，计算腺苷回收率分别为：94.85、94.54、96.30、96.59、94.20和95.45%。其平均回收率为95.32%，RSD为1.0%(n=6)，尿苷回收率分别为：99.71、100.08、99.52、99.29、100.22、100.41%。其平均回收率为99.87%，RSD为0.18%(n=6)
2.9 进样精密度试验
取供试品溶液，按以上色谱条件，重复进样6次，测定尿苷的峰面积，结果RSD为0.37%(n=6)，腺苷的峰面积，结果RSD为0.85%(n=6)。
2.10 样品重复性试验
取同一批复方毛冬青注射液按供试品溶液方法经多次测定，其尿苷含量的RSD=0.59%(n=6)，腺苷含量的RSD=1.3%(n=6)。
2.11 样品测定
按拟定方法测定3批样品，结果见表1。
3 讨论
3.1 色谱条件和系统适应性试验
色谱柱比较了waters symmetry Cl8、Zorbax SB C18、waters XTerra RPl8和waters XTerra MS C18 柱，均可得到较好的分离。
3.2 HPLC分析测定了复方毛冬青注射液中的尿苷、腺苷
二种核苷类活性成分 结果表明：该方法操作简便，具有峰形好，灵敏度高，重复性好，回收率高等优点，适用同时定量分析复方毛冬青注射液中核苷类成分，可用于复方毛冬青注射液产品的质量控制和综合评价。
参考文献：
[1] 黄定群.复方毛冬青注射液治疗上呼吸道感染160例观察[J].实用医学，1997，13(6)：387.
(责任编辑：王尚勇)
