【www.zhangdahai.com--护士个人工作总结】
【摘要】据人体病理分析,不少化学性肝损伤是由外源性化学物质或其活性代谢产物与生物体中的核酸、蛋白质、脂质等生物大分子的共价结合所致。本文通过对以人乙型肝炎病毒感染的大猩猩模型等可以对药物的作用机理进行深入的研究,丝素抗菌肽分解物对肝损伤具有明显的辅助保护作用。
【关键词】丝素抗菌肽;化学性肝损伤;毒性试验
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】1006-1959(2009)08-0268-02
近几十年来人们发现许多化学毒物可被代谢酶转化为比原毒物毒性更大的自由基。某些毒物也可使机体内某些成分(主要是生物大分子)、分子态氧与水等形成自由基。当人体接触到化学有害物质后,出于自我保护,肝细胞会加强代谢。当一些化学物质(如乙醇等)进入肝脏后,通过尼可酰胺脱氢酶(辅酶Ⅰ)的帮助进行氧化分解。当肝细胞代谢旺盛时,肝内糖元易陷入贫乏状态。
1研究的目的和意义
90%慢性病毒性肝炎为持续感染的乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)所致。相当部分的慢性肝炎可进展为肝硬化和肿癌,预后较差,虽然经过多年的不懈研究,但对慢性肝炎的治疗并不十分满意。病毒性疾病的发生,即取决于病毒,还取决于人的个体因素。机体自身的免疫应答在病毒性肝炎的发展机制中具有非常重要的意义。乙型肝炎病毒对肝细胞的损伤主要是由免疫反应引起的,同时肝炎病毒感染诱导的肝细胞凋亡或坏死都伴有DNA片断化或是弥漫性降解的损伤现象,故除抗病毒外,促进损伤肝细胞的修复以及寻找针对性较强的免疫调节药物,也将是该类疾病治疗药物研究的方向之一。
乙型肝炎,由肝炎病毒具有可嵌合入人肝细胞中的DNA、RNA等生物遗传性物质,利用宿主细胞的遗传物质进行复制,导致抗病毒方剂的寻找是当今世界面临的一个难题。肝脏是产生细胞因子的主要器官,又是细胞因子的主要靶器官之一,近年来研究最为广泛的转录调控因子是调节前炎性细胞因子、细胞表面受体和粘附因子表达的最重要的转录调控因子。在肝脏的炎症损伤方面,通过调控前炎性细胞因子、趋化因子和细胞粘附因子的转录直接参与肝脏的急性和慢性炎症。达到抑制HBV的复制,促使HBeAg的转阴,HBV DNA密度降低。
以人乙型肝炎病毒感染的大猩猩模型等可以对药物的作用机理进行深入的研究。以小鼠免疫性肝损伤的模型建立,观察蚕茧提取物丝素抗菌肽对免疫性肝损伤小鼠血清酶学和病理组织学的影响,对免疫肝损伤关键炎性介质和编码基因转录调控环节的影响,探讨免疫性肝损伤过程中,丝素抗菌肽护肝作用的分子作用机理。
2 国内外肝炎治疗情况
我国每年因患乙型肝炎转变为肝癌而致死者达16万人,加上因急性肝功能衰竭及肝硬变而致死者则更多。因此,慢性肝炎的治疗便成为一个迫切需要解决的重大问题。
目前的治疗措施主要有:①抗病毒药物:干扰素和核苷类类似物,并各具优缺点,前者疗效肯定,血清转换率较高,有确切的治疗终点,但使用不方便,副作用较大。后者疗效可靠,但需要长期用药,治疗终点不确切,易耐药。②免疫调节治疗:胸腺肽、治疗性疫苗等,前者调节免疫,增强机体的免疫清除能力,从而实现抑制甚至清除病毒的作用,联合核苷类或干扰素进行治疗颇有争议。目前尚无可供临床使用的治疗HBV感染的治疗性疫苗。③护肝降酶药物:联苯双酯、五味子制剂及中草药,这类药物对降低血清转氨酶,退黄疽有些效果,其中联苯双酯效果优,但停药后会反弹,副作用少,可用于肝炎的辅助性治疗。④基因治疗:是指采用一定的技术和手段,将目的基因导入体内以纠正基因构和功能异常的一种治疗疾病的方法。黄芪、贯众、大黄等几百种具有抑制乙型肝炎病毒表面抗原活性的中草药,为乙型肝炎的临床治疗提供了依据。在韩国,也有学者从大量草药中筛选了很多具有抑制乙型肝炎病毒表面抗原和HBV―DNA聚合酶作用的草药,如地榆、诃子、掌叶大黄、丁香等,而且研究发现具有HBV―DNA聚合酶抑制作用的草药还有刺激产生肿瘤坏死因子的作用。
3 丝素抗菌肽的特性
丝素抗菌肽是蚕丝蛋白经酶水解精制后所得到的蛋白抗生物肽类,它能够参与人体代谢,特别是心脑血管系统的代谢,可使沉积在心脑血管壁的脂质沉积重新参与代谢,使血管得到软化;并可快速降低血液中多余的胆固醇及脂类物质,并通过软化血管达到一定程度的降低血压作用。丝素抗菌肽含有60n以上的人体必须氨基酸,还富含多种营养素,具有补充机体营养、促进生长发育、抗疲劳、抗衰老、提高人体免疫力等多种功能。丝素抗菌肽延缓人体机能衰老、增强免疫力;还具有益气养血、滋阴助阳、缓解疲劳的功效,同时可增强人体的体质、增进食欲、改善睡眠。从理论上研究,丝素抗菌肽对抗免疫肝损伤血清酶及病理组织学的影响非常必要。
丝素抗菌肽有效杀灭寄生虫,如痢疾、疟疾、利什曼病的原虫等。丝素抗菌肽对流感病毒、疱疹病毒和乙型肝炎病毒等也有抑制作用。
4 研究方法
通过小鼠购于广东医学院,动物适应性喂养三天后,随机分成5组,除正常健康组为8只外,其余每组16只。动物丝素抗菌肽治疗实验结束后,分别于眼眶取血,2000rpm/min离心10分钟,制备血清,并贮存于-20℃冰箱于次日检测。之后处死小鼠,迅速取小鼠肝组织浸于液氮中速冻,留作检测;并取肝组织浸入10%中性福尔巴林固定,留做病理组织学及免疫组化检测。检验用10%中性福尔马林,苏木精lg、硫酸铝8.8g,无水乙醇10ml、蒸馏水200ml溶液,煮沸1分钟,稍冷却,慢慢加入碘酸钠0.1g,染液变为紫红色,每100ml加冰乙酸5ml。伊红1g,溶入95%酒精200m1中备用,得检组织经10%中性缓冲福尔马林固定,常规包埋,石蜡切片厚5um,二甲苯两缸脱蜡6min,无水乙醇洗脱二甲苯、自来水纯水漂洗,反复数遍,检测结果统计。
4.1 健康对照组:每日灌胃同等体积生理盐水,每日一次,连续7d。
4.2 免疫肝损伤模型组:每日灌胃同等体积无菌生理盐水,每日一次,连续7d,于第7d灌胃后半小时尾静脉注射乙肝病毒人血清2.5ml/kg以造成感染模型。
4.3 丝素抗菌肽治疗大剂量组:将丝素抗菌肽按每日2ml/10g灌胃小鼠,给药剂量为9.2g/kg,连续灌胃7d,于第7d灌胃后半小时尾静脉注射乙肝病毒人血清25mg/kg。
4.4 丝素抗菌肽治疗小剂量组:将丝素抗菌肽按每日0.2ml/10s灌胃小鼠,给药剂量为4.1g/g,连续灌胃7d,于第7d灌胃后半小时静脉注射乙肝病毒人血清25mg/kg。给药期间,小鼠精神状态及活动情况良好,造模后,模型组及小剂量组无小鼠死亡,8d各组动物无死亡。
5 结论与讨论
当人体接触到化学有害物质后,出于自我保护,肝细胞会加强代谢。当一些化学物质(如乙醇等)进入肝脏后,通过尼可酰胺脱氢酶(辅酶Ⅰ)的帮助进行氧化分解。当肝细胞代谢旺盛时,肝内糖元易陷入贫乏状态。需要不断补充糖元供NADH的再生。减少糖元对肝脏发挥解毒功能不利。而在氨基酸中,丙氨酸异生成糖的作用最强。肝脏从血浆中大量获得丙氨酸来异生成糖供肝脏的代谢活动,加快肝脏中化学物质的分解。
此外,丙氨酸可促进TCA循环等代谢过程及苹果酸穿梭系统的活化,加快分解化学有害物质。脂肪酸是肝的主要能源,借助三羧酸循环的降解如受到干扰,易诱导脂肪肝的形成。维生素具有保护肝脏中的酶系统,增加肝细胞的抵抗力,促进肝糖原的形成和促进肝细胞的再生,改善肝功能。
丝素中含有大量的丙氨酸和甘氨酸,对促进肝细胞的解毒排毒具有积极的作用,而当有其它氨基酸、维生素共存时,其解毒、排毒效果更为明显。
本研究结果表明,丝素抗菌肽分子通过其两性Q―螺旋上的正电荷与细菌细胞质膜磷脂分子上负电荷之间的静电吸引而结合在质膜上,紧接着丝素抗菌肽分子的疏水端借助于分子中AGP连接的柔性插入到质膜中,然后丝素抗菌肽分子两性Q―螺旋也插入到质膜中,这样就破坏了脂质双分子层原有的有序结构,由于a―螺旋的两亲性使丝素抗菌肽分子通过膜内分子间的位移而相互聚集在一起,从而在膜上形成离子通道,细菌最终不能保持正常渗透压而致死。对部分真菌,对原虫、病毒、肿瘤细胞及癌实体瘤有杀伤作用,不损伤健康细胞。另外,丝素抗菌肽具有很强的热稳定性、能够杀灭氨苄青霉素抗性菌、对酸碱盐、人造胃酸有一定的耐受性,抗菌谱广,能够杀灭革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。抗菌肽的C―老端酰胺化有利于增强抗菌肽的抗菌活性。
因此,从理论上研究,丝素抗菌肽对抗免疫肝损伤血清酶及病理组织学的影响非常必要。
参考文献
[1] 家蚕丝素蛋白肽生物制备技术[J]. 技术与市场,2003,(05)
[2] 刘阳,于勇,刘素清,范文今,谢韬. 生命核酸口服液对化学性肝损伤辅助保护作用的研究[J]. 中国比较医学杂志 , 2002,(06)
[3] 朱正华,朱良均,陆旋. 丝素蛋白粉制备工艺研究[J]. 氨基酸和生物资源 , 2003,(03)
[4] 刘朝良. 丝素的食用研究[J]. 安徽农业大学学报 , 1995,(02)
[5] 吴卫成,钟伯雄. 家蚕蛋白质组研究[J]. 蚕桑通报 , 2004,(02)
作者单位:524008 广东省湛江市港区人民医院
