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【摘要】 目的 建立茯苓多糖的分离、纯化以及含量测定方法。对茯苓块、茯苓片和茯苓粉的不同时间的水煎液中多糖、总糖含量进行测定和比较。方法 采用苯酚-硫酸比色法于490 nm处测定茯苓多糖、总糖的含量。结果 不同时间的水煎液中，茯苓块和茯苓片的多糖、总糖含量明显低于茯苓粉。结论 该法快速、准确，便于实际应用，并为茯苓饮片加工与规范化炮制提供部分参考数据。
【关键词】 茯苓； 饮片 ；多糖； 含量测定
茯苓（Poria cocos wolf）为多孔菌科植物干燥菌核。其性甘、淡、平。归心、肺、脾、肾经。具有健脾宁心，利水渗湿等功效。用于治疗水肿尿少，脾虚食少，便溏泻泄，惊悸失眠等症。主要含有β-茯苓聚糖即茯苓多糖、茯苓糖，茯苓酸等化学成分。具有抗菌抗肿瘤，提高免疫功能的作用，并且对血液系统也有一定的影响。长期以来，茯苓的炮制方法都是将其切制成块或厚片，市场上销售的茯苓块最厚可达2 cm，茯苓片的厚度也接近2 cm。为了考察饮片规格对水煎液中所含多糖、总糖的影响[1]，对不同规格的饮片，在不同煎煮时间的水煎液中的有效成分进行分析。
1 实验材料与试剂
UV-2201型分光光度计（岛津）；METTLER AE240电子分析天平（瑞士）；
茯苓（河南省药材公司购买，产地：云南）；葡萄糖对照品（基准）；其他试剂均为分析纯。
2 方法
2．1 粗糖的提取 将茯苓药材分为片，块和粉（粉碎得到），其中片分为0.2 cm和0．4 cm两种；块分为0．8 cm、1．4 cm两种；茯苓粉分为过10目和过50目两种。分别取上述药材各10 g，置烧杯中，加水100 ml，称重，浸泡20 min，分别煎煮20、40、60 min,随时加水至近似原体积，检查浸透情况，可以看出，茯苓粉的浸透情况要明显好于茯苓片和茯苓块。放凉后称重，补充水分至原重，过滤，滤液备用。
2．2 供试液的制备
2．2．1 多糖 精密吸取不同规格茯苓水煎液10 ml，水浴蒸干，加水2 ml溶解，再加无水乙醇10 ml，放置4 h，过滤，沉淀用85%乙醇适量洗涤２次，残渣用热水溶解并转移到100ml量瓶中，冷却，加水定容。
2．2．2 总糖 精密吸取不同规格茯苓水煎液10 ml，置100 ml量瓶中，加水定容，取出1．0 ml置10ml量瓶中，加水定容。
2．3 实验条件的选择
2．3．1 测定波长的选择 精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0 ml和供试品溶液1．0 ml，加入5%苯酚1．0ml，然后加入5．0 ml浓硫酸，摇匀，放至室温后测定波长在400～520 nm之间的吸收度，结果表明两者均在490 nm处有最大吸收。
2．3．2 苯酚用量的选择 精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0 ml，依次加入不等量的5%苯酚，再加入浓硫酸5．0 ml，放至室温后测定吸收度，结果表明5%苯酚用量为1．0 ml时吸收度最大。
2．3．3 浓硫酸用量的选择 精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0 ml，加苯酚1．0 ml，依次加入不等量的浓硫酸，放至室温后测定吸收度，结果表明浓硫酸用量为5．0 ml时吸收度最大。
2．3．4 标准曲线的绘制 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0．1 000 g，加蒸馏水溶解，定容至1 000 ml，制成标准溶液。分别精密吸取该溶液1．0、2．0 、 3．0 、 4．0 、 5．0 ml，置10 ml容量瓶中，加水定容，从中精密吸取1．0 ml，加入5%苯酚1．0 ml，浓硫酸5．0 ml，放至室温，同时做空白，于490 nm处测定吸收度，以吸收度A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程如下：Y=11．624 8 X+0．016 9 (r2=0．999 0)，结果表明线性关系良好。
2．3．5 重复性试验 按最佳条件制备5份样品，测定其吸收度，得RSD=1．2%，结果表明重复性良好。
2．3．6 稳定性试验 按最佳条件制备5份样品，测定其吸收度，得RSD=1．3%，结果表明稳定性良好。
2．3．7 精密度试验 精密吸取供试液1 ml，按含量测定项下操作，平行操作5份，同时吸取1 ml葡萄糖对照品溶液同法操作，测定其吸收度，得RSD=2．01%。结果表明精密度良好。
3 含量测定结果
3．1 多糖：分别取多糖供试液1．0 ml，加入5%苯酚1．0 ml，后加入浓硫酸5．0 ml，同时做空白，测定吸收度。结果见表1。
01
3．2 总糖：分别取总糖供试液1．0 ml，加入5%苯酚1．0 ml，后加入浓硫酸5．0 ml，同时做空白，测定吸收度。结果见表2。
4 讨论
4．1 多糖在强酸作用下水解生成单糖，并迅速脱水生成糠醛，糠醛与酚性物质如苯酚缩合成有色化合物，反应迅速、完整，有色物质稳定，并且有色物质生成量与多糖浓度存在定量关系[2]，这样用分光光度法在适当波长处可以得到多糖含量，本法简便快捷，适用，是测定多糖含量较为经典的方法之一。
4．2 实验结果表明，茯苓块和茯苓片，在不同的煎煮时间中多糖、总糖的含量明显低于茯苓粉，特别是茯苓块煎出含量最少。但茯苓粉在过滤时比较困难，并且在煎煮时不好控制。因此，茯苓临床入药做汤剂时最好粉碎一下或切制成薄片，这样会减少药材的用量而提高有效成分的煎出量。
参考文献
1 丰朝霞，张鸿.分光光度法测定茯苓中多糖含量.时珍国医国药，2000，11（2）：109.
2 潘琦，金文.茯苓多糖的含量测定分析.云南中医药杂志，1999，20（1）：33.
