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[摘要] 目的 重组构建hING4(人ING4)氨基酸序列。方法 运用定点突变技术,在鼠ING4的基础上,设计两对突变引物P1、P2和P3、P4及全长ING4上下游引物P5、P6,通过四轮PCR,将mING4基因序列进行人源化改造,获得了编码hING4氨基酸的基因序列。将获得酶切目的基因片段,连接到转移载体pAdTrack-CMV上,形成重组转移载体pAdTrack -CMV-ING4。重组转移载体经PmeI酶切后与pAdEasy-1腺病毒载体在BJ5183大肠杆菌中同源重组,得到重组腺病毒载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-ING4,经PacI酶切后脂质体转染QBI-293A包装细胞,获得重组腺病毒Ad-ING4。结果 测序和RT-PCR结果表明hING4基因构建成功。结论 hING4基因重组腺病毒载体构建成功。
[关键词] ING4基因;点突变;腺病毒;载体;基因治疗
[中图分类号] R34[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2009)32-18-03
