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【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚注射液的有关物质。方法：采用Alltima C18色谱柱，流动相为0.05 mol・L-1醋酸铵溶液-甲醇（85∶15），检测波长245 nm。结果：对乙酰氨基酚与其杂质能完全分离，已知杂质对氨基酚在2.40～191.84 ng线性关系良好（r＝0.9999），平均回收率为99.8％，RSD＝0.91％（n＝6）。结论：所用方法简便、快速、准确，可用于对乙酰氨基酚注射液的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法；对乙酰氨基酚注射液；有关物质
文章编号：1009-5519（2008）17-2556-02 中图分类号：R9 文献标识码：A
对乙酰氨基酚注射液为一种常见的解热镇痛药，对氨基酚为对乙酰氨基酚注射液生产过程中的中间体和储存过程中的水解产物，虽也有解热镇痛作用，但其毒性较大，应予以控制。现行质量标准未对其有关物质进行控制，为此，我们采用HPLC法测定对乙酰氨基酚注射液中有关物质[1，2]，方法准确，简便，快速。
1 实验部分
1.1 仪器与试药：Waters 2695系列高效液相色谱仪，Waters 2996 DAD检测器；色谱柱为Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）。对氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号100802-200501）；对乙酰氨基酚注射液（苏州长征-欣凯制药有限公司，051116，040914，050627）；甲醇为色谱纯；水为Millipore-Q超纯水系统制得超纯水；其余试剂均为分析纯。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件与系统适应性试验：色谱柱为Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.05 mol/L醋酸铵溶液-甲醇（85∶15），柱温：35 ℃，Waters 2996 DAD检测器，流速1.0 ml/min，取供试品溶液及对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000，对乙酰氨基酚峰与对氨基酚峰的分离度应符合要求。
1.2.2 测定方法：取本品，加流动相制成每1 ml中含1.25 mg的溶液作为供试品溶液（临用新制）；精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另精密称取对氨基酚对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 ml中含2.5 μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相测定法(中国药典2005年版二部附录ⅤD)测定，用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；0.05 mol/L醋酸铵溶液-甲醇（85∶15）为流动相；检测波长为245 nm。理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000，对乙酰氨基酚峰与对氨基酚峰的分离度应符合要求。精密量取对照溶液10 μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成份色谱峰的峰高约为满量程的10%；再准确量取供试品溶液，对照溶液和对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，按外标法以峰面积计算（按对乙酰氨基酚标示量计算）。
1.2.3 测定波长的选择：本品经破坏实验的样品经二级管阵列检测器测定，通过等高图分析，在245 nm处已知杂质对氨基酚吸收值较大，其余杂质也检出较多，EP 5也采用245 nm测定，综上所述本方法选择245nm作为检测波长。
1.2.4 专属性考察：精密量取空白辅料溶液，空白溶剂，供试品溶液及对照溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。空白辅料溶液，空白溶剂均无干扰。
取本品1 ml，置100 ml量瓶加流动相稀释至刻度，摇匀，置强光（照射度为4500±500LX）下照射72小时，作为光解样品；取本品1 ml，加入5 mol/L的盐酸溶液5ml，电炉上缓缓加热置沸多次，冷却后用5 mol/L氢氧化钠溶液中和后，转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为酸解样品；取本品1 ml，加入5 mol/L的氢氧化钠溶液5 ml，电炉上缓缓加热置沸多次，冷却后用5 mol/L盐酸溶液中和后，转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为碱解样品；取本品1 ml，加入过氧化氢溶液20 ml，在室温放置8小时，转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为氧化降解样品；取本品1 ml，100 ℃水浴加热8小时，冷却后转移至100 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，作为热解样品。
按“1.2.2”项制备供试品溶液并测定。该法能有效检测出各破坏性试验产生的降解物，且降解产物峰均能与主成分峰达到基线分离，专属性较好。
1.2.5 对氨基酚的线性范围及检测限：精密称取对氨基酚对照品11.99 mg 置50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，精密量取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，精密量取1 μl，2 μl，5 μl，10 μl，20 μl，40 μl，80 μl进样，记录色谱图并进行线形回归处理。结果线性方程为y＝1112.5862x-1087.5862，相关系数r＝0.9999。结果表明对氨基酚在2.398～191.84 ng范围内呈良好的线性关系，最低检测限1 ng（S/N=3）。
1.2.6 回收率试验：精密称取对氨基酚12.54 mg置50 ml量瓶中，加流动相定容，精密量取样品1 ml，置100 ml量瓶中，再分别加入上述对照品溶液0.8 ml，1.0 ml，1.2 ml加流动相定容，分别进样10 μl，每个浓度各3次。平均回收率为99.8%，RSD=0.91%。
1.2.7 重复性试验：按“1.2.2”项方法平行制备对氨基酚对照品溶液及供试品溶液6份，分别进样10 μl，以对氨基酚峰面积进行精密度考察，结果对氨基酚对照品溶液的RSD=0.48%，供试品溶液中对氨基酚峰的RSD=0.52%。
1.2.8 精密度考察：取供试品溶液连续进样6次，分别记录对氨基酚峰面积，结果RSD=0.39%，表明仪器精密度良好。
1.2.9 样品的测定：按“1.2.2”项方法，对3批样品进行有关物质的检查，对氨基酚的量分别为0.10％，0.11％，0.18％；面积归一化法计算其他杂质总量分别为0.02％，0.02％，0.03％。
2 讨论
对氨基酚为对乙酰氨基酚的降解产物，有一定不良反应，在制剂的影响因素试验，稳定性考察及质量研究中，应将其作为特殊杂质进行检查。实验对对乙酰氨基酚注射液中有关物质检查的条件进行了选择和方法学验证。结果表明文中方法专属性强，稳定性好，操作简便，能有效检出对乙酰氨基酚注射液中的相关杂质，为对乙酰氨基酚注射液的质量控制提供了实验依据。
参考文献：
[1] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005.172.
[2] 李 平，李 敏．HPLC法测定复方对乙酰氨基酚注射液的含量[J]．中国药师，2002，5（1）：33.
收稿日期：2008-05-04 修回日期：2008-06-04
