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【摘要】目的:建立快速、简便的RP-HPLC法测定人血浆中美托洛尔浓度。方法:采用高效液相色谱法,用Hypersil ODS C18柱 (150mm×4.6mm, 5μm);流动相:乙腈-磷酸氢二铵缓冲液(30:70 v/v); 柱温:室温; 荧光检测,流速1.0ml/min。结果:美托洛尔在1.25～160ng/ml浓度范围线性良好( r=0.9989),日内及日间精密度均小于10%,回收率>88%。结论:本方法快速、灵敏,可靠,可较好应用于临床血药浓度检测。
【关键词】美托洛尔;高效液相色谱法;血药浓度
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】1006-1959(2009)09-0254-01
美托洛尔(Metoprolol)属于2A类即无部分激动活性的β1-受体阻断药(心脏选择性β-受体阻断药)。 它对β1-受体有选择性阻断作用,无部分激动活性,无膜稳定作用。其阻断β-受体的作用约与普萘洛尔(PP)相等,对β1 -受体的选择性稍逊于阿替洛尔。美托洛尔对心脏的作用如减慢心率、抑制心收缩力、降低自律性和延缓房室传导时间等与普萘洛尔、阿替洛尔(AT)相似,其降低运动试验时升高的血压和心率的作用也与PP、AT相似。其对血管和支气管平滑肌的收缩作用较PP为弱,因此对呼吸道的影响也较小,但仍强于AT。美托洛尔也能降低血浆肾素活性,临床应用多年,能有效治疗高血压、心绞痛、心肌梗死、慢性心力衰竭和心律失常等心血管疾病。美托洛尔口服吸收迅速完全,吸收率大于90%,但肝脏代谢率达95%,首过效应为25%～60%,故生物利用度(F)仅为40%～75%。食物可增加口服本品的血药浓度达空腹时的1倍。口服血浆浓度高峰时间一般在1.5h,最大作用时间为1～2h。血压的降低与血药浓度不平行,而心率的降低则与血药浓度呈直线关系,由于该药物药理作用与血药浓度存在紧密的相关性,因此,本试验参照相关文献[1,2],建立了一种快速检测人血浆中美托洛尔的方法,使其更好更广泛适用于临床上美托洛尔血药浓度的检测。
1 仪器与试药
1.1 仪器:日本岛津LC-10AT泵, RF-10AXL型荧光检测器, 7725i型手动进样器,N2000色谱工作站;XW-80A旋涡混匀器;Anke大容量多管离心机,乐百氏纯净水,恒温水浴锅。
1.2 试药:酒石酸美托洛尔(倍他乐克),阿斯利康制药有限公司生产,50mg/片;美托洛尔对照品,含量大于99.8%,购自中国药品生物制品检定所。乙腈,正己烷,异丙醇为色谱纯;其余试剂均为市售分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测条件:色谱条件:流动相:乙腈-0.01mol/L磷酸氢二铵缓冲液 (30:70 v/v);流速1.0ml/min,色谱柱Hypersil ODS C18柱(150×4.6mm,5μm);检测波长为275nm/305nm ( Ex/ Em);柱温:室温。
2.2 血浆样品的处理:取血浆样品1ml,加入内标液(400ng/L比索洛尔) 10μl和1mol/L NaOH 溶液200μl旋涡震荡混匀,再加入正己烷(含5%异丙醇)5ml旋涡振荡5min后, 4000r/min离心10min,取上清液4ml于50℃ 水浴挥干,残渣用100μl甲醇溶解,取40μl进样。
2.3 标准曲线:分别取空白血浆1ml,精密加入美托洛尔标准贮备液,使其含美托洛尔分别为1.25、2.5、5、10、20、40、80、160ng/ml血样,按“2.2”项下操作,浓度(C)对峰面积比(R)作线性回归,得:C=0.00204R+0.0013, r = 0.9987。最低定量下限为1.25ng/ml。
2.4 方法专属性:在本实验条件下, 美托洛尔有较大的响应,并与血浆中内源性杂峰有良好的分离度,不干扰样品峰的测定,基线噪音小, 美托洛尔与内标的保留时间分别为3.5、5.8min,本方法具有较高的专属性,在此条件下所测得的结果能代表美托洛尔浓度。
2.5 精密度与方法回收率:取空白血浆1ml,配制含美托洛尔浓度分别为2.5、10、80ng/ml的血浆样品各5份, 按“2.2”项下处理后进样分析,每日测定5份,连续测定3d,以每1d内测得的各浓度计算日内RSD,不同日内测定的各浓度计算日间RSD,结果表明日内、日间RSD均
