炮制方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响|松脂素二葡萄糖苷

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  摘 要:目的:研究不同炮制方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响。方法:采用HPLC法测定杜仲生品及6种不同炮制品中松脂醇二葡萄糖苷的含量。结果:不同炮制方法松脂醇二葡萄糖苷的含量不同,其中:盐制砂炒Ⅱ>盐蒸制>盐制砂炒Ⅰ>盐炒制Ⅱ>盐炒制Ⅰ>清炒>生品。结论:炮制方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量有显著影响,且以传统的杜仲盐制砂炒方法较为理想。
  关键词:杜仲;炮制方法;松脂醇二葡萄糖苷
  中图分类号:R283.3文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)02-0049-02
  
  杜仲为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的干燥树皮,为我国名贵药材,始载于《神农本草经》,列为上品,具有补肝肾、强筋骨、安胎[1]之功效。杜仲皮含有多种活性成分[2],其中松脂醇二葡萄糖苷(Pinores inoldiglucoside,PDG)和绿原酸(Chlorogenic Acid)有降压作用 [3,4]。盐制杜仲为2005版药典收载的炮制品,本篇以松脂醇二葡萄糖苷含量为指标,比较不同炮制方法对其含量的影响,为临床盐制杜仲提供科学依据。
  
  1 仪器与试药
  
  1.1 仪器
  Sartorius BP211D型电子分析天平(德国),FW177型中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司),Waters2690高效液相色谱仪,Waters996二极管阵列检测器,Millennium32色谱工作站,H66025T型超声清洗仪。
  1.2 试药
  杜仲原药材购自西安市药材市场,经生药教研室王继涛教授鉴定为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的干燥树皮。松脂醇二葡萄糖苷对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号111537-200501)。流动相所用甲醇为色谱纯,水为重蒸水(实验室自制),盐水均为2%的食盐水溶液,磷酸等其它试剂均为分析纯。
  
  2 方法与结果
  
  2.1 不同炮制品的制备
  杜仲生品的制备:将杜仲除去粗皮,洗净润透,用切药刀切成3~4�的横丝(垂直于胶丝的生长方向)。
  不同炮制品的制备(所用盐水均为2%的食盐水溶液):
  (1)清炒法:取100g杜仲丝置炒制容器内,中火炒至颜色加深,有焦斑,丝易断时,取出晾凉。
  (2)盐炒制Ⅰ:取100g杜仲丝,置容器内加盐水拌匀,加盖闷润。待盐水被吸尽后,置炒制容器内,中火炒至颜色加深,有焦斑,丝易断时,取出晾凉。
  (3)盐炒制Ⅱ:取100g杜仲丝,置炒制容器内,中火炒至颜色加深,有焦斑,丝易断时,取出,喷淋盐水拌匀,再置炒制容器内炒干,取出晾凉。
  (4)盐制砂炒Ⅰ:将河砂置锅内炒至灵活状态后,取用盐水闷润好的杜仲丝100g倾入锅内,中火反复翻炒20min,取出晾凉。
  (5)盐制砂炒Ⅱ:将专用温度计置入锅内,放入适量细砂,将100g杜仲丝置入锅内,中火反复翻炒20min后取出,筛去细砂,喷淋盐水拌匀,再置炒制容器内炒干,取出晾凉。
  (6)盐蒸制:取100g杜仲丝,置容器内加盐水拌匀,加盖闷润。待盐水被吸尽后,置锅内中火蒸制1h,取出晾凉。
  2.2 色谱条件
  色谱柱:Welch Materials C�18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(25∶75);柱温:25℃;检测波长: 277nm;流速:1mL•min-1;进样量:10μL。
  2.3 对照品溶液的制备
  取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量,置于五氧化二磷减压干燥器中干燥12h,精密称定,加甲醇溶解、定容,制成每1mL含松脂醇二葡萄糖苷0.218mg的对照品溶液,备用。
  2.4 供试品溶液的制备
  取上述不同炮制品粉末各1g,精密称定,置于三角瓶内,精密加入甲醇25mL,称重,超声处理1h后,放凉,用甲醇补足缺失量,滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。
  2.5 线性关系考察
  精密吸取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液1、3、5、7、9μL,按2.2项下的色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为Y=441480X-3092.9(r=0.9995)。结果显示,松脂醇二葡萄糖苷在0.218~1.962μg线性关系良好。
  2.6 稳定性试验
  取同一供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、10、12h进样10μl,测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积,结果表明,该供试样品在12h内具有良好的稳定性,RSD为2.2%。
  2.7 精密度试验
  取同一供试品溶液10μL,连续进样5次,测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积。结果表明本法精密度较好,RSD为1.62%。
  2.8 重复性实验
  取同一样品共5份,照“供试品溶液制备”项下的方法制备供试品溶液,测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积,结果表明本法重复性良好,RSD为1.82%。
  2.9 回收率试验
  取已知含量的样品6份,精密加入一定量的松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液,照“供试品溶液制备”项下的方法制备供试品溶液,取10μL注入液相色谱仪,测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积,计算回收率,结果显示,松脂醇二葡萄糖苷的平均回收率为99.49%,RSD为1.81%(见表1)。
  
  2.10 样品的含量测定
  分别吸取各供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,按2.2项下的色谱条件测定,记录峰面积,由回归方程计算松脂醇二葡萄糖苷的含量,结果见表2。松脂醇二葡萄糖苷对照品与样品色谱图见图1。
  
  结果表明:采用不同炮制方法,松脂醇二葡萄糖苷含量不同,呈以下趋势:盐制砂炒Ⅱ>盐蒸制>盐制砂炒Ⅰ>盐炒制Ⅱ>盐炒制Ⅰ>清炒>生品。传统的杜仲盐制砂炒方法较为理想,松脂醇二葡萄糖苷的含量较高。
  
  
  3 讨论
  
  (1)在流动相的选择上,通过对乙腈-不同浓度磷酸溶液系统,及其乙腈-磷酸溶液不同比例的洗脱系统进行研究,最终选择甲醇-0.4%磷酸溶液(25∶75)出峰较为合适,可达到基线分离。
  (2)本研究对于检测波长的选择,进行了全波长扫描,松脂醇二葡萄糖苷选用277nm,系统稳定性好,干扰小。
  (3)通过对不同炮制方法对杜仲中有效成分的影响的实验研究,结果表明,生品的松脂醇二葡萄糖苷含量均明显低于各炮制品,这可能是由于生品杜仲中橡胶丝的作用使其有效成分难以溶出,这为传统的“炒断丝”炮制标准提供了理论依据。
  (4)盐制杜仲中,松脂醇二葡萄糖苷含量大于清炒法和生品,这为盐制杜仲的传统方法提供了科学依据。
  (5)通过对不同盐制杜仲方法的比较,结果表明,砂炒杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量高于不加砂的炮制方法,这可能是由于砂可以提高炒制温度,传热也比较均匀,进而提高了杜仲的断丝率所致。
  (6)盐蒸制杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量最高,但是否优于传统的炒制法,还有待于进一步研究。
  
  参考文献:
  [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:化学工业出版社,2005.
  [2] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草[M].上册.上海:上海科学技术出版社,1996.
  [3] Charles J Sih, Ravikumar P, Huang Fuchin,et al. Separation and Synthesis of pinoresinol diglucoside moides olive[J]. Am Chem Soc,1976,17:5412.
  [4] 李家实.杜仲皮与叶化学成分初步研究[J].中药通报,1986,11(8):41.
  [5] 臧友维.杜仲化学成分研究进展[J].中草药,1989,20(4):42-43.
  (责任编辑:陈涌涛)

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