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中图分类号：R512.6+2 文献标识码： A 文章编号： 1672-3783(2008)-4-0153-01 【关键词】乙肝 HBV变化 意义 荧光定量 PCR技术
近年发展的荧光定量PCR技术可以根据其设计的特异性引物及探针，来定量检测病原微生物的拷贝数。最新研究表明，患者血清中的HBV数量与HBV的疗效有一定相关性。因此治疗前后，患者血清中的HBV数量变化往往能反映出药物治疗对患者的疗效，并作为患者临床症状缓解与否的主要指标之一。本文通过1例患者在服用HEPTODIN（贺普丁，品名为拉米夫定，是一种较新的核苷类抗病毒药。它的活性形式拉夫定三磷酸盐，既是HBV聚合酶的抑制剂，还是此聚合酶的底物，当它渗入到病毒DVA链中时，就阻断了病毒DNA的复制。因此在整个疗程中，患者体内的HBV-BNA拷贝数会逐渐下降，直至消失。同时使血清转氨酶降至正常。）前后的整个疗程中，对体内病原体拷贝数的定量检测，以观察HBV数量增减来判断药物对患者的疗效，发现具有明显的相关性，现报道如下:
1 对象与方法
1.1 对象 患者，男性，36岁，2007年被诊断为慢性乙型肝炎。经半年的休息治疗，症状得到控制，自觉症状消失，肝功能恢复正常，乙肝三系HBs-Ag,HBe-Ag，HBc-Ab均为阳性。今年4月再次发病，肝功能各项指标明显异常，乙肝三系HBs-Ag,HBe-Ag，HBc-Ab均为阳性，肝脏肿大有压痛，肝炎症状明显。6月初在医生建议下开始用贺普丁治疗，每次0.1g，每日1次，疗程60d。
1.2 方法 分别取患者治疗前，治疗20d，40d后3ml全血，无菌分离血清1ml，15000rpm，10min离心沉淀病原体。沉淀中加50μ1DNA提取液，充分混匀，沸水浴10min，立即插入冰浴中，离心10000rpm，5min，取上清液2μ1直接加入到含有HBV特异性DNA探针的PCR封闭反应管中（中山医科大学达安基因诊断中心提供）进行扩增。扩增条件为93℃45s，55℃ 2min共40个循环。由荧光定量PCR仪7700型（美国PerkinElmer公司）进行实时荧光定量检测，自动读取样品的HBV-DNA含量，同时设置标准曲线。
2 结果
2.1 荧光定量PCRDNA检测结果 治疗前HBV-DNA拷贝数为1.5×10�7个/ml,血清治疗20d后HBV-DNA虽仍为阳性，
但DNA拷贝数明显下降，为2.2×105个/ml血清；治疗40天后HBV-DNA拷贝数下降为5个/ml；治疗40d，乙肝三系中的HBe-Ag转阴，GPT下降至正常，白/球比例正常，HBV拷贝数下降至10以下。生化检测结果与定量PCRHBV-DNA含量检测结果基本相符。
3 讨论
荧光定量检测PCR技术目前已用于多种病原微生物的定量检测，其优点是：①荧光标记的DNA探针与病原微生物DNA全长进行特异性的DNA-DNA杂交，特异性强，降低了假阳性。②荧光定量PCR对产物的检测是通过PCR产物中的荧光信号进行实时动态检测，因此灵敏度很高，定量范围很宽，可包括0-10�11拷贝/ml，定量准确度为100%（即最大偏差为1倍），基本能满足临床诊断的需要。③荧光定量PCR的整个检测过程为密闭操作，无需PCR后处理和冗长的电泳检测，减少了实验中的交叉污染。因此该方法快速，特异、灵敏、是未来检测手段的趋势。
该方法较为有效和直观，因为它检测的是HBV自身拷贝数，准确灵敏的反应了HBV的感染和恢复情况。从本文结果可以看出，当患者治疗20天后，虽乙肝三系仍为阳性，检测结果显示，患者本内HBV拷贝数已正在稳步下降，而且随着HBV拷贝数的下降，患者血清的GPT逐渐下降，白/球比例也恢复了正常。说明本法敏感性远高于目前的检测手段，医生可以通过该结果及时了解患者的病情和药物疗效。
