小鼠胸腺 银翘散对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、IgG含量的影响

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  摘 要:目的:观察银翘散(YQS)对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠细胞因子的影响。方法:以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠为模型,采用银翘散灌胃治疗。用ELISA法分别检测感染后第1、3、5、7天小鼠血清中IFN-γ、IgG的含量。结果:银翘散各给药组IFN-γ的含量明显降低,与病毒感染模型组比较差异有显著性意义(P0.05)。结论:银翘散可以降低血清中IFN-γ,说明银翘散可以降低炎性因子的表达,从而减少炎性损伤。IgG含量与感染模型组差异不是十分显著,有可能因为在病毒感染早期,机体只能产生低水平低亲和力的抗体。
  关键词:银翘散;流感病毒;细胞因子
  中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)02-0013-03
  
  银翘散(YQS)由连翘、银花、苦桔梗、薄荷、竹叶、生甘草、芥穗、淡豆豉、牛蒡子9味中药组成,为治疗温病之首方,是辛凉清解的代表方剂,以其治疗风温、温热病以及某些杂病(属于邪在卫分、上焦)而闻名,并一直沿用至今。现代临床上用于治疗流行性感冒、急性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎、疱疹、麻疹、流行性腮腺炎等病毒性感染疾病[1]。本实验观察了该药对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、TNF-α、TGF-β1及IgG含量的影响,从分子水平探讨该药治疗病毒性呼吸道感染的作用机制。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 材料
  1.1.1 药物及毒株
  银翘解毒口服液:批号070301,河北华威制药有限公司。病毒唑:批号070609,天津药业集团新郑股份有限公司。病毒:流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1),由中国中医科学院中药研究所提供,鸡胚传代后,血凝滴度为1:512,-70℃冻存备用。乙醚、生理盐水:由北京化学试剂公司提供。小鼠IFN-γ、TNF-αELISA试剂盒购自晶美生物工程(北京)有限公司,小鼠TGF-β1及IgG试剂盒购自Biotechnology Systems公司。
  1.1.2 动物及分组
  BALB/c nu/nu免疫缺陷裸小鼠,雌雄各半,共72只,体重18~20g,购自北京维通利华实验技术有限公司。按体重随机分组原则,将BALB/c nu/nu裸鼠分为正常对照组,模型组,病毒唑阳性药组,银翘散高、中、低剂量治疗组,各组按感染后1天、3天、5天、7天不同时相各分为4小组,每小组3只,分别标记,分笼饲养,所有动物自由摄食和饮水,控制温度湿度(18~25℃和55%±2%)。
  1.1.3 仪器
  微孔板扫描酶标仪(Bio-Tek公司),微量加样器,CO�2恒温培养箱,Labofuge 400R低温高速离心机(德国Heraeus公司),DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机(北京拓普分析仪器有限责任公司)。
  1.2 方法
  1.2.1 模型制备
  以乙醚轻度麻醉小鼠后,BALB/c nu/nu裸鼠正常对照组以生理盐水30μL/只滴鼻,其余各组以FM1株病毒液30μL/只滴鼻。
  1.2.3 实验给药
  感染1小时后给药,给药体积为0.2mL/10g,病毒唑组每次腹腔注射0.07g/kg/d,银翘散高中低剂量组分别为40g/kg/d、20g/kg/d、10g/kg/d。正常空白组、感染模型组灌服生理盐水。
  1.2.4 取材
  分别于感染24、72、120、168h后,各组小鼠摘眼球取血,离心分离血清,放入-20℃冰箱中保存待测,脱颈椎处死小鼠,无菌取胸腺、脾脏、双侧后肢股骨骨髓,以备它用。
  1.2.5 观察指标及方法
  小鼠血清IFN-γ、IgG含量的测定。本实验采用双抗体夹心ELISA法,检测程序按照试剂盒说明书进行。
  1.2.6 统计学处理
  所有实验数据用±s表示,采用SPSS统计分析软件进行统计学处理。在进行显著性检验时,组间比较采用单因素方差分析,以P0.05)。有可能因为在病毒感染早期,机体只能产生低水平低亲和力的抗体,通常在感染后最初2周达高峰。
  各组比较见图2。
  
  
  
  3 讨论
  
  流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,起病急骤,以全身中毒症状为主,亦可引起病毒性肺炎。流感病毒侵袭机体,病毒在宿主细胞内复制,并可入血,从而形成病毒血症。病毒作用于机体后,机体免疫细胞对于病毒可产生免疫应答,从而产生一些超过生理浓度的细胞因子。这些细胞因子释放入血后,其中具有致热作用的因子即可引起发热等全身中毒症状。研究发现,病理浓度的TNF-α、IL-1、IFN等都具有致热作用。IFN-γ的致热性作用方式可能是通过促进LPS而诱生IL-1。中医复方治疗病毒感染性疾病的优势并非单纯抗病毒本身,虽与促进机体免疫应答有关,却不能单纯用促进机体免疫应答来解释,其疗效机制可能与其抑制或调节机体炎症免疫病理反应有关。IFN-γ主要由活化的Th1和NK细胞产生,是机体抗病毒感染中最重要的细胞因子之一。它不仅可以阻止病毒在体内复制和扩散,而且能对许多免疫细胞发挥强大的免疫调节作用。有研究发现,IFN-γ及TNF-α可调节单核吞噬细胞产生超氧阴离子,如在短时间内大量产生TNF-α,IFN-γ将全身大量单核巨噬细胞激活,产生大量超氧阴离子导致组织器官的严重损伤[2];同时,IFN-γ可促进T细胞和B细胞的分化,激活单核-巨噬细胞,促进炎性因子如TNF-α,IL-6,IL-1的产生,从而造成炎性损伤。因此内源性IFN-γ虽是维持机体抗感染所必不可少,但大量产生则又“走向问题的反面”。实验结果显示,感染模型组的IFN-γ含量与正常空白组比较,有所提高,二者比较,有显著性差异,银翘散组IFN-γ含量较之模型组有所减少,而且二者比较,亦有显著性差异。说明银翘散可以抑制病毒感染后IFN-γ的表达,降低炎性因子的表达,从而减少炎性损伤。。关于流感病毒感染小鼠后,血清中IFN-γ的表达,有些资料[3]显示IFN-γ升高,而有些资料[4]显示降低。究竟流感病毒感染对IFN-γ的产生是抑制还是促进,有待于进一步探讨。
  病毒感染可诱导3种抗体:IgG、IgM、IgA。其中IgG是最重要的一类抗体,能直接中和体液中的病毒。尽管体液免疫在病毒感染后被激活,但在病毒感染早期,机体只能产生低水平低亲和力的抗体,通常在感染后最初2周达高峰,以后开始下降。本实验中各组的IgG含量都很低。治疗组的IgG含量略低于感染模型组,差异不是十分显著(P>0.05),有可能因为在感染初期,IgG水平比较低,也有可能因为本实验选用的老鼠是胸腺缺陷小鼠,有文献研究发现,T细胞及吞噬细胞功能障碍均可使自身完好的B细胞发生障碍而产生Ig或抗体缺乏症。
  通过本实验,还可以发现,流感病毒所致机体的免疫状态是一个庞杂的细胞因子网络,各种细胞因子相互促进又相互制约,调节细胞因子生成的分子机制是复杂的,值得进一步探讨。
  
  参考文献:
  [1] 吴幸周.银翘散现代临床运行的文献研究[D].北京:北京中医药大学硕士研究生学位论文,2006:6-8.
  [2] 周炳荣.IFN-γ及TNF-α调节单核吞噬细胞超氧阴离子及在抗感染中的作用[J].国外医学•免疫学分册,1994(2):65.
  [3] Robert NJ JL. The limited role of the human interferon systerm response to respiratory syneytial virus challenge, Analysis and comparison to influenza virus challenge[J].Microb Pathog, 1992, 12:49.
  [4] 王飞,胥方元, 马萍,等. 感冒清口崩片对流感病毒FM1感染小鼠细胞因子水平的影响[J]. 中药药理与临床,2007,23(5):169-170.
  (责任编辑:陈涌涛)

本文来源:http://www.zhangdahai.com/qiyewenhua/qiyewenhuajianshe/2019/0322/29857.html

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