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【摘要】目的：探讨建立高效液相色谱法测定人血清中地西泮和硝西泮含量的方法。方法:采用Hypersil C18色谱柱(5 ?滋m，250 mm×4.6 mm)，以萘为内标，甲醇水(72∶28)为流动相，流速为1 ml/min，检测波长为254 nm。结果:地西泮和硝西泮在0.03～3.00 ?滋g/ml范围内线性关系良好，地西泮标准曲线方程：Y=0.0068+0.372X，r=0.9989；硝西泮标准曲线方程：Y=0.054+0.268X，r=0.9991。结论：该方法操作简便快速、分离效果好、灵敏度高、回收率良好，适合临床上对地西泮和硝西泮的常规检测。
【关键词】高效液相色谱法；地西泮；硝西泮；血清浓度
文章编号：1009-5519（2008）17-2587-02 中图分类号：R9 文献标识码：A
地西泮和硝西泮是临床上常用的苯二氮类镇静催眠药，目前对地西泮和硝西泮单独进行检测分析的方法有紫外分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)等[1]，而能同时检测这两种药物的方法也有报道，但方法都较繁琐[2]。笔者采用HPLC同时测定人血清中地西泮和硝西泮含量获得满意效果，该方法适于实验室常规检测，报道如
下。
1 器材与方法
1.1 仪器及试剂：（1）仪器：Waters 2695型高效液相色谱系统，Waters 2487型紫外检测器，Empower数据处理仪，800型离心沉淀器，XW-80A微型涡旋混合仪，RE-52AA旋转蒸发仪，SHB-C型循环水式多用真空泵，N-EVAPTM 111氮吹仪、P30TC 空气泵。（2）色谱条件：采用Hypersil C18色谱柱(5 ?滋m，250 mm×4.6 mm)，以萘为内标，甲醇水(70∶30)为流动相，流速为1 ml/min；检测波长为254 nm，柱温为35 ℃。（3）试剂：地西泮和硝西泮片(均为市售品)；地西泮和硝西泮标准对照品由中国药品生物制品检定所提供，内标物萘为分析纯，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。
1.2 方法：(1)标准贮备液配制：精密称取地西泮和硝西泮标准对照品各10 mg，分别置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解后定容成1.0 mg/ml标准贮备液；精密称取内标物萘20 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解后定容成2.0 mg/mL内标贮备液。临用前将三种标准贮备液混合，并以甲醇稀释制成不同浓度的混合对照品液。（2）血样处理：取空白人血清0.2 ml，加入甲醇溶液0.5 ml置具塞离心管中混匀，4 000 r/min离心15 min，吸取上清液20 ?滋l进样分析；然后取空白人血清0.2 ml，加入甲醇对照品液(含地西泮、硝西泮及内标物萘适当浓度)0.5 ml置具塞离心管中混匀，4 000 r/min离心15 min，吸取上清液20 ?滋l进样分析，从而确定硝西泮、地西泮和萘的保留时间分别为4.527、6.436和8.198 min。
2 结果
2.1 标准曲线建立：取空白人血清0.2 ml置具塞离心管中，加入混合对照品适量并用甲醇溶液配制成0.5 ml的系列血清样品，其中地西泮和硝西泮的浓度均为0.03、0.06、0.15、0.30、0.60、1.50、3.00 g/ml，按方法(2)的操作处理后进样。以两种药物的峰面积与内标峰面积之比(Y)对血清药物浓度(X)进行线性回归，得到标准曲线方程，其中，地西泮:Y=0.0068+0.372X，r=0.9989；硝西泮:Y=0.054+0.268X，r=0.9991。结果表明地西泮、硝西泮在0.03～3.00 ?滋g/ml的范围内线性关系良好；两种药物的最低检测浓度均为4 ?滋g/L。
2.2 回收率及精密度试验：取空白血清0.2 ml，准确加入一定量的混合对照品液，配成高、中、低3种浓度的血清样品，并按方法（2）的操作处理后进样，测定峰面积。每个浓度样品日内平行检测6次，隔日再连续检测6次，计算回收率及精密度，结果见表1。
2.3 临床应用实例：患者女，24岁，因服用地西泮类药物中毒入院，应临床要求检测其血药浓度。采用此法测得其血清中地西泮浓度为689 ?滋g/ml，达到中毒浓度，测定结果为临床及时诊治提供了依据。
3 讨论
本文建立的采用HPLC同时测定人血清中地西泮和硝西泮含量的方法步骤简单、操作快速，并可达到两种药物较好分离，同时检测的目的；而采用内标法对药物进行定量分析，能更准确地测定药物在血清中浓度。实验结果表明，地西泮、硝西泮在0.03～3.00 ?滋g/ml的范围内线性关系良好，两种药物的最低检测浓度均为4 ?滋g/L。临床实际应用也获得满意效果。因此，笔者认为，采用HPLC同时测定人血清中地西泮和硝西泮含量的方法适合临床上对地西泮和硝西泮的常规检测。
参考文献：
[1] 刘香臣.RP-HPLC法测定血清硝基安定及临床适用性[J].中国药事，2005，19(1)：56.
[2] 毛桂福.高效液相色谱法同时测定人血浆中地西泮、硝西泮、氯硝西泮[J].中国医院药学杂志，2004，24(11):684.
收稿日期：2008-04-10
