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【摘要】目的：探讨非小细胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）乙酰肝素酶（HPA）和C-erbB-2表达与NSCLC发生发展和浸润转移的关系。方法：NSCLC组为56例非小细胞肺癌保存蜡块，其中临床分期Ⅰ期15例、Ⅱ期28例、Ⅲ期13例。病理分级高分化16例、中分化22例、低分化18例，对照组为18例癌旁组织。采用免疫组织化学染色法检测两组HPA和C-erbB-2蛋白表达情况。结果：NSCLC组HPA表达阳性率（43/56例，76.8％）显著高于对照组（2/18例，11.1％），淋巴结转移NSCLC组显著高于无淋巴结转移NSCLC组，不同临床分期、不同病理分化程度NSCLC组HPA阳性表达率差异有显著性。NSCLC组C-erbB-2阳性率（40/56例，71.4％）显著高于对照组（2/18例，11.1％），NSCLC组不同临床分期、不同病理分化程度的C-erbB-2阳性表达率差异有显著性。结论：HPA和C-erbB-2高表达与NSCLC的发生、发展及浸润转移有显著关系。
【关键词】非小细胞肺癌；乙酰肝素酶；C-erbB-2；免疫组织化学
文章编号：1009-5519（2008）09-1287-02 中图分类号：R36 文献标识码：A
肿瘤侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，但目前对肿瘤侵袭转移的确切机制尚不十分清楚[1]。乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是一种内糖苷酶，可降解细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）和基底膜（basement membrane，BM）中的硫酸乙酰肝素（heparan sulfate，HS），HPA在恶性肿瘤中高表达，与肿瘤血管生成关系密切[2]。C-erbB-2为促肿瘤细胞生长的基因，与肺癌发生发展有关[3]。本研究应用免疫组织化学技术检测56例非小细胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）中HPA和C-erbB-2的临床表达特征及相互关系，以期了解HPA和C-erbB-2表达在NSCLC发生发展和预后中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料：56例病理标本取自2000年1月~2005年12月在本院胸外科手术的NSCLC患者的保存腊块，其中男30例，女26例，年龄45~69岁，平均（57.5±6.3）岁，经病理检查证实为NSCLC。56例标本中鳞癌22例、腺癌20例、腺鳞癌8例、大细胞癌6例。高分化癌16例、中分化癌22例、低分化癌18例。临床分期Ⅰ期15例、Ⅱ期28例、Ⅲ期13例，有淋巴结转移25例，无远处淋巴结转移31例。对照组18例癌旁组织标本选用离肿块5cm的肺组织。
1.2 免疫组织化学染色分析：兔抗人HPA（1∶500）和C-erbB-2单克隆抗体（1∶500）为美国Sauta Cruz公司产品，免疫组化检测试剂盒（SP-9000）及DAB酶底物显色试剂盒等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。NSCLC标本常规石蜡包埋，5 ?滋m切片，60℃烤片1 h；二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；将组织切片放入柠檬酸缓冲液内，高压锅热诱导抗原修复；3%H2O2作用10 min抑制内源性过氧化酶；正常非免疫动物血清封闭液室温孵育10 min，阻断非特异性着色；加一抗4℃过夜，0.01M PBS冲洗；生物素标记二抗37℃孵育30 min，0.01M PBS冲洗；链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶37℃孵育30 min，0.01M PBS冲洗；DAB显色，HE复染，中性树胶封固。0.01M PBS代替一抗作阴性对照。结果判定：随机选择5个高倍视野进行观察，平均阳性细胞数≥10%为阳性片。
1.3 统计分析：所得数据以例数或％表示，采用SPSS 11.0统计学软件进行χ2分析，P NSCLC中HPA与C-erbB-2表达相关性分析提示，HPA阳性组C-erbB-2阳性率为90.7％，HPA阴性组C-erbB-2阳性率为7.7％，差异有显著性，提示HPA表达与C-erbB-2表达差异有显著性，二者在NSCLC的发生发展中具有协同作用，在促进肿瘤细胞穿越血管壁、进行扩散和转移中发挥共同作用，也提示HPA与C-erbB-2表达可作为临床判定NSCLC生物学行为和预后的参考指标。
综上所述，对HPA和C-erbB-2基因表达的研究可为研究NSCLC发病机制提供新的途径，为NSCLC的有效靶基因的预防和治疗提出了理论基础。
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收稿日期：2008-01-08
