丹酚酸【HPLC梯度洗脱法测定宁神丸中丹酚酸B的含量】

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  【摘要】目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定中成药宁神丸中丹参的主要成分丹酚酸B的含量。方法:采用Luna C18(2)(5 ?滋m,4.6 mm×250 mm)色谱柱;检测波长286 nm;流动相乙腈-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱;流速1.0 ml/min。结果:在0.142628~1.42628 μg范围内具有良好的线性关系,r=0.999997;平均回收率为97.61%,RSD=1.70%。结论:该法灵敏度高、专属性强、重现性好,并通过对数批样品含量进行考察,可作为制剂质量控制指标之一。
  【关键词】宁神丸;HPLC;丹参;丹酚酸B
  文章编号:1009-5519(2008)23-3533-02 中图分类号:R28 文献标识码:A
  
  宁神丸是由熟地黄、山药、茯苓、党参、白术、丹参、酸枣仁、枸杞子等中药组成的中药复方制剂。具有养血安神,益气健脾。用于夜睡不宁,怔忡健忘,体弱神疲等。为了更好的控制成品的质量,本实验采用高效液相色谱法(HPLC)对处方中丹酚酸B进行测定,结果如下。
  
  1 仪器与试剂
  
  Agilent 1100高效液相色谱仪;色谱柱:Luna C18(2)(5 ?滋m,4.6 mm×250 mm);丹酚酸B对照品:中国药品生物制品检定所,供含量测定用(纯度:98.5%)(111562-200605);宁神丸(广州固志医药科技有限公司供应,批号为:20061001)。乙腈:色谱纯(Fisher sientifics);水为重蒸水;其它试剂均为分析纯。
  
  2 方法与结果
  
  2.1 色谱条件:色谱柱:Luna C18(2)(5?滋m,4.6mm×250mm);流动相:乙腈流动相A,以 0.4%磷酸溶液流动相B,按表1进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min;286 nm波长为检测波长。上述条件下,丹酚酸B与其它组分能达到基线分离,分离度,理论板数均符合要求。
  2.2 供试品溶液制备方法:取本品适量研细,取约2.5 g,精密称定。置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50 ml,称定重量,超声提取40分钟(功率:45 W;频率:59 KHz),取出,放冷,再次称重,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
  2.3 对照品溶液制备:取丹酚酸B对照品适量,精密称定,加75%甲醇制成每1 ml含丹酚酸B 70 μg的溶液,即得。
  
  2.4 方法专属性的考察:依法制备阴性样品溶液,并按样品含量测定方法操作收集图谱,结果见图1所示,显示阴性对测定成分无干扰,说明本含量测定方法对丹酚酸B专属。
  
  2.5 仪器精密度考察:取同一浓度对照品溶液,按含量测定项下方法重复测定6次,结果见表2。
  
  2.6 线性关系的考察:分别精密吸取浓度为71.314 μg/ml的丹酚酸B对照液2 μl、5 μl、8 μl、12 μl、16 μl、20 μl,按样品含量测定方法项下色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为横坐标,丹酚酸B的量为纵坐标绘制标准曲线,见图2,计算其回归方程。y=8.53699×10-7x+0.00217547 (r=0.999997)见表3。
  
  2.6 稳定性试验:取同一供试品溶液(批号:20061001),配制后每间隔2小时测定丹酚酸B的峰面积,结果列于见表4。结果表明供试品溶液在8小时内稳定。
  
  2.7 重复性试验:取同一批号(20061001)样品,按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,并按样品含量测定方法测定丹酚酸B的含量,结果见表5。
  
  2.8 准确度试验:采用加样回收法:精密量取浓度为1.262 mg/ml的丹酚酸B对照品甲醇溶液1 ml(精密称得丹酚酸B(纯度98.5%)对照品12.81 mg,置10 ml量瓶中,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度,即得(12.81×0.985/10=1.262 mg/ml)),置具塞锥形瓶中,挥干甲醇,再精密加入已知含量的供试品(20061001批样品含丹酚酸B的量为1.073 mg/g)约1.25g,精密称定。照供试品制备方法制备回收率样品溶液6份,依法测定,计算回收率,结果见表6。结果表明,本法具有良好的回收率。回收率计算公式:
  
  
  3 讨论
  
  3.1 提取方法的选择:根据文献[1],选择75%甲醇为提取溶剂,药典中丹参药材采用加热回流提取方法提取丹酚酸B,本实验中采用超声提取40分钟,并考察提取残渣,残渣中已无丹酚酸B残留,故采用超声提取。
  3.2 有关丹酚酸B含量测定方法文献报到较多,但均为等度洗脱,而本方中,在采用等度洗脱条件时,很难达到基线分离,并且峰形较差,采用本文梯度条件时,丹酚酸B与其它组分能达到基线分离,且峰形好,故选用本文条件。
  3.3 采用HPLC梯度洗脱法测定宁神丸中丹酚酸B的含量,处理方法简单,所测结果重现性好、精密度好,适用多种中药配伍使用的丹酚酸B的定量分析。
  
  参考文献:
  [1]国家药典委员会.中国药典,2005年版第一部[S].北京:化学工业出版社,2005.52.
  收稿日期:2008-07-04

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本文来源:http://www.zhangdahai.com/shuzhibaogao/gerenshuzhibaogao/2019/0302/504.html

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