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关键词：人参皂苷；白血病；细胞增殖；凋亡；分化 中图分类号：R733.7 文献标识码：A 文章编号：1007-2349(2008)02-0044-02
人参始载于《本经》，味甘、苦，性平，入脾、肺、心经，传统中医学认为人参具有大补元气、补脾益肺、生津止渴、安神益智、补气生血的作用。在祖国医学中应用广泛，历史悠久，《神农本草经》把人参列为上品，有“主补五脏、安精神、止惊悸、除邪气、明目、开心益智”的记述。人参在临床上有重要功能，在很多方剂中列为君药。人参的主要有效成分为人参皂苷，按单体皂苷元所含羟基量不同分为人参二醇和人参三醇两大类。近年来已有研究报道人参皂苷能抑制白血病细胞增殖、促进凋亡、诱导分化、增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等作用，本文就近年来该方面的研究进展作一综述。
1、抑制白血病细胞增殖、促进凋亡、诱导分化
高瑞兰等采用白血病祖细胞集落形成(CFU-AML)培养法，观察不同浓度人参总皂苷对HL-60、Meg-01白血病细胞株和急性髓细胞白血病患者的骨髓细胞集落形成的影响，并以正常粒单祖细胞(CFU-GM)作比较，结果示TSPG对白血病祖细胞的影响不同于正常的细胞，不同的浓度显示为增殖或抑制的双向作用。陈地龙等采用细胞体外培养技术，MTT法检测细胞增殖抑制，光镜和电镜观察细胞形态变化；联苯胺、糖原染色、过氧化物酶、非特异性脂酶细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征；免疫细胞化学检测细胞表面分化抗原及因子表达；FAS及FAS-L等检测细胞凋亡情况。证明人参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。戴勤等采用造血细胞体外培养形态学观察免疫细胞化学流式细胞术等实验血液学技术证明GPS可能通过阻止HL～60细胞从静止期GO期进入增殖周期S/G2+M期抑制DNA的合成等途径进而抑制细胞的增殖，提示GPS有可能成为既能促进正常造血又能抑制人白血病等肿瘤细胞增殖的天然诱导剂。李勇等通过四唑盐比色法观察细胞生长，蛋白印迹法和反转录一聚合酶链反应分析G-Rb1对细胞的GR蛋白和GRa mRNA的改变。发现G-Rb1可上调HL-60细胞GRa mRNA及GR蛋白的表达并抑制细胞生长。李世辉等利用MTT法检测细胞增殖抑制作用；流式细胞术检测SP2/0细胞凋亡率及细胞周期；常规Giemsa染色和DAPI荧光染色后观察SP2/0凋亡细胞的形态学变化；酶联免疫吸附法测定药物干预前后细胞上清液中肿瘤坏死因子、巨噬细胞炎症蛋白-let的水平。结果示G-Rh对SP2/0骨髓瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用，且这种作用有周期特异性。曹唯希等采用图像分析术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂苷诱导K562细胞凋亡。发现人参总皂苷对K562细胞有增殖抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡明显增加，同时细胞Fas表达升高。且推论人参总皂苷能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与调控Fas表达升高有关。牛泱平等取不同浓度的GS处理HL-60细胞，通过观察细胞形态学的变化；流式细胞术分析细胞DNA含量的改变，并进行DNA片段分析；Annexin V-FITC试验法分析细胞凋亡百分率。结果示人参皂苷能够抑制HL-60细胞生长，在一定剂量和时间范围内可引起细胞凋亡，可为临床应用人参皂苷作为化疗药物的辅助剂治疗白血病提供实验依据。李朝晖采用MTT法测定药物对细胞的抑制率，细胞形态学观察细胞分裂及凋亡，流式细胞仪进行细胞周期分析，发现人参皂苷Rg1呈剂量依赖性的将细胞阻滞于G1期，使G1期不能运行到S期，从而影响了肿瘤细胞的有丝分裂，并且在低于GO/G1期出现典型的凋亡峰。细胞形态学观察可见分裂细胞以及凋亡细胞。陈小红等选用人T淋巴细胞株(Jurkat细胞)作靶细胞，采用MTT法和半固体集落培养法观察不同浓度的GS对Jurkat细胞增生的抑制效应；用Annex-inV-FITC试验法分析Jurkat细胞的凋亡百分率，并进行DNA片段分析。证明GS在一定浓度范围内可抑制Jurkat细胞增生，并能够诱导其凋亡，为临床应用提供理论依据。陈地龙等采用细胞体外培养技术，光镜和电镜观察细胞形态变化；联苯胺染色、POX染色、α-NAE细胞化学染色发现TSPG协同细胞因子对K562细胞的诱导作用与TSPG单独作用相比，K562细胞形态学更趋向于成熟；血红蛋白、过氧化物酶的表达明显增加；细胞表面分化抗原CDl5、HIR2、EPO-R、GM-CSF-R的表达明显增强。方美云等应用光学和电子显微镜观察细胞的形态学特征，单克隆抗体标记流式细胞术检测细胞表型，用ELISA法测定L-60-DC培养上清液中的IL-12及INF-7的量，用流式细胞仪检测凋亡率。结果HL-60细胞在组合细胞因子并分别加入TSPG及As2o3后，均可诱生出不同比例的DC。光镜及电镜下均有典型的树突状细胞的形态学特征，细胞表达DC的表面分化抗原，诱生的DC培养上清液中可测出不同量的IL-12及IFN-7。联合中药各组的凋亡率、树突状细胞的特异性抗原表达均高于GM-CSF与IL-4组。诱生后的DC具有抗白血病细胞作用，与HL-60细胞共培养后可使白血病细胞凋亡明显增强。
2、对白血病细胞的其他作用
高瑞兰等ElZ3采用白血病组细胞集落形成(CFU-MAL)药敏试验法。选用4种化疗药物：高三尖杉酯碱、阿糖胞苷、阿霉素和足叶乙苷。通过观察其集落生长情况发现人参总皂苷可使常规的化疗药物对白血病细胞的抑制作用增强。王一等采用PCR-ELISA法检测端粒酶性，Southern blot法检测端粒长度，观察到经人参皂苷、三氧化二砷及β榄香烯作用后，K562细胞株端粒酶活性下降，下降程度呈浓度、时间依赖性，在一定浓度及作用时间后端粒酶呈阴性；细胞的存活率下降；并推论抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一；其后王一等用不同浓度的三氧化二砷、人参皂苷及β榄香烯单独及联合环磷酰胺与人类白血病细胞株K562共培养，采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性、Southern杂交法检测端粒长度。观察到三氧化二砷、人参皂苷、β榄香烯及环磷酰胺均能抑制K562细胞株的生长及端粒酶活性，抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一；三氧化二砷、人参皂苷、β榄香烯与环磷酰胺联合应用后抑制作用增强；联合环磷酰胺可望降低上述药物的给药浓度。周烨等运用基因芯片技术研究人参总皂苷(TSPG)作用后K562细胞基因表达谱的变化，结果示TSPG刺激K562细胞后共有362个基因表达发生变化，与对照组K562细胞比较，表达上调的基因有20个，主要有代谢相关基因，信号转导相关基因，细胞受体相关基因等；表达下调的有342个，包括免疫防御相关基因，DNA结合与转录因子，代谢相关基因，细胞周期相关基因等。RT-PCR技术验证了FOSL1、E2F2、CCNE2和ODZ14个基因表达的变化。证明TSPG刺激K562细胞后，影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与TSPG的抗肿瘤机制有关。陈小红等选用K562/V CR、K562/Adr两耐药细胞株作为靶细胞，液体培养和半固体集落培养法及MTT法观察到GS通过提高耐药细胞对化疗药物的敏感性而与化疗药物起协同作用，同时在一定浓度下，能直接抑制白血病耐药细胞增殖。立彦等通过细胞毒试验、药敏试验、RT-PCR方法与流式细胞术了解中药人参皂苷Rb1的毒性、细胞对药物的敏感性及在细胞水平和分子水平对多药耐药的逆转作用。结果显示人参皂苷Rb1能部分逆转耐药；RT-PCR结果显示，对照组和给药组均有明显的扩增片段区带，流式结果显示Pgp的表达无明显差异。说明可以通过人参皂苷Rb1抑制Pgp的功能，从而提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，对于今后研究和发展肿瘤治疗来说有十分重要的意义。
3、结语
白血病是一种造血系统的恶性肿瘤，化疗是治疗白血病的主要手段，但化疗药物的毒副反应及其耐药性仍然是目前难以解决的问题。某些中药具有抗白血病作用，而对正常细胞的损伤小的优点，因此，国内外研究者们正在寻找抗白血病的中药，并提取和分离出其中的有效成分，进行药效学及其作用机理研究，试图开发高效低毒的治疗白血病的潜在或辅助药物，有助于提高疗效、减少化疗毒副反应、改善生活质量、延长生存期等。综上所述近年来已有研究表明人参皂苷能抑制白血病细胞增殖、促进凋亡、诱导分化、能增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等作用，但其作用途径和机制还需进一步的研究，为临床应用提供依据。
