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【摘要】目的：通过拆方分析，简单阐述厚朴大黄汤中各药物在组方中的作用。方法：利用氨水引咳实验和小鼠酚红排泌实验，确定厚朴大黄汤止咳化痰的有效成分。结果：止咳作用复方组>厚朴＋枳实>厚朴＋大黄>厚朴，枳实配伍效果优于大黄；化痰效果是厚朴大黄汤＞厚朴＋大黄＞厚朴＋枳实＞厚朴，大黄配伍效果优于枳实。
【关键词】厚朴大黄汤；止咳；化痰；拆方分析
Studies on the therapeutic basis and pharmacology ofHoupu dahuang decoction using splitting method
Hui Qiusha
（Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan, 250014）
【ABSTRACT】 Objective: Study the functions of different medicine in Houpu dahuang decoction using splitting method. Method: Two experiments were performed with Houpu dahuang decoction , including cough induced by ammonia liquor and phenol red secretion from trachea. Results: Houpu and Zhishi were considered to be the effective materials for cough. As well, Dahuang could reduce the sputum.
【Key-words】 Houpu dahuang decoction, cough, sputum, splitting method
小承气汤、厚朴三物汤及厚朴大黄汤均来自《金匮要略》，是张仲景的经典方。三方组成相同，唯不同点在于剂量各异，在对三方的药理研究方面，古认为，厚朴大黄汤治支饮兼腹满便秘，以开痞满而通大便；厚朴三物汤行气之力强，泻下力弱，治腹满而大便秘；小承气汤泻下荡积为主，用治阳明腑实[1]。而在现代药理研究中，寇俊萍等发现小承气汤泻下作用较强，厚朴三物汤理气效果较好，厚朴大黄汤止咳化痰作用明显，能明显延长小鼠咳嗽潜伏期 ,减少咳嗽次数 ,并显著促进小鼠气管酚红排泌 ,而其它两方作用不明显[2]。在此基础上，寇俊萍等人又进一步确定了泻下作用的主要药味即大黄，药效的物质基础即结合蒽醌[3]。胡小静等人通过拆方分析及SPSS软件的手段，也确定了小承气汤的质量控制指标即大黄酸、厚朴酚和橙皮苷[4]。
现代临床上也常用厚朴大黄汤来治疗咳嗽、肺炎及支气管炎等证[5]，但对于该方作用的物质基础始终未见研究说明，本实验即利用拆方分析对厚朴大黄汤的配伍机制进行研究，阐述各药物在组方中的作用，为该方的临床应用提供一定的依据。
1实验材料
1.1动物昆明种小鼠18～22g，雄性，由山东中医药大学动物实验中心提供。
1.2仪器
动物天平（上海精密仪器仪表有限公司），Sartorius BP211D型电子分析天平，数显恒温水浴锅HH-2 (国华电器有限公司)，752N型分光光度计（上海第三分析仪器厂），KH3200E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
1.3试药
碳酸氢钠（分析纯）南京化学试剂一厂 批号031211196
酚红（分析纯）天津市化学试剂研究所 批号20060602
乌来糖（氨基甲酸乙酯，化学纯） 上海青析化工科技有限公司批号060925急支糖浆
太极集团重庆涪陵制药厂有限公司批号18080055
氨水（分析纯）南京化学试剂一厂，批号021230501
苦味酸（分析纯）南京化学试剂一厂，批号20060503
1.4药材
大黄、厚朴、枳实均购于南京同仁堂药店，经本文笔者鉴定。大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatun L.的干燥根及根茎，厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rhed.et Wils.的干燥干皮、根皮及支皮，枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果。以上三味药粉碎过60目筛。
2拆方分析
拆方是对方剂的组成原则和配伍作用的研究，是方剂学研究的主要内容。现在拆方分析研究主要包括撤药研究、按君臣佐使进行拆方研究及按药性或经验进行拆方研究等[6]，我们选择的是按君臣佐使进行拆方研究，即按照中医理论将方剂分为君药、臣药、佐药、使药，通过药效学指标分别评价其在全方中的作用，探讨君臣佐使之间的相互关系，揭示方剂的配伍规律。
厚朴大黄汤中厚朴为主药，佐以枳实调气行滞，使气行水利；大黄通下，荡涤肠胃。本实验从厚朴大黄汤君臣佐使配伍关系出发，以君药厚朴为核心，依次配伍其他两味中药，进行拆方分析，共得四组组方，见表1。
表 1拆方设计表
组方 药味及剂量
1 厚朴24g
2 厚朴24g+大黄18g
3 厚朴24g+枳实12g
4 厚朴24g+大黄18g＋枳实12g
3药理指标的选择
对止咳化痰实验一般有很多的药理模型进行选择，比如止咳实验有氨水致小鼠咳嗽模型，枸橼酸致豚鼠咳嗽模型；祛痰的药理模型常用小鼠呼吸道酚红排痰观察，大鼠毛细管排痰实验等。本实验中我们选择氨水引咳实验和小鼠酚红排泌实验，这两个模型均属于经典药理模型，分别记录小鼠咳嗽潜伏期、两分钟内小鼠咳嗽次数及酚红排泌量。
4化痰实验
4.1样品制备
分别按照上表拆方组合及配比，取三味中药粉末，加10倍量水，浸泡1h，直火加热提取1h，四层纱布过滤，滤液浓缩至1g•mL-1备用[1]。
4.2酚红标准曲线的绘制
精密称取酚红5.61mg，置于容量瓶中，加5％碳酸氢钠溶液至100mL，精密吸取上述酚红溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL于10mL容量瓶中，以5％碳酸氢钠稀释至刻度，摇匀，避光放置30min，于546nm处测定其吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，结果见表2，图1。
4.3酚红排泌实验[6-11]
18～22g小鼠90只，实验前禁食不禁水12h，随机分成6组，分别灌胃水空白组（0.2mL/20g），急支糖浆阳性组（0.16mL/20g），拆方组（0.2mL/20g），给药1h后腹腔注射1％酚红0.5mL，半小时后腹腔注射40％乌来糖0.7mL处死。剪开颈部皮肤，剥取器官周围肌肉组织，将点滴管针头于远心端插入小鼠气管，手术线结扎针头处，以5％碳酸氢钠溶液冲洗四次，每次0.5mL,合并冲洗液，放置一段时间后使杂质沉淀，得透明红色上清液，以5％碳酸氢钠为对照，546nm测其吸收度，并根据标准曲线计算酚红排泌量，结果见表3。
4.4数据处理及结果分析：
表2吸收度数据
1 2 3 4 5
浓度（μg•mL-1） 2.224 4.488 6.732 8.976 11.22
吸收度 0.14 0.29 0.44 0.60 0.75
Fig 1酚红标准曲线
有此可知：A＝0.0682C－0.015R＝0.9999
表3厚朴大黄汤不同配伍对小鼠酚红排泌作用的影响
组方 剂量（mL/20g） 酚红排泌量（μg•mL-1）
空白组 0.2 4.55±1.15
阳性组(急支糖浆) 0.16 5.74±1.31*
厚朴大黄汤 0.2 6.90±1.13**
厚朴 0.2 4.90±1.23
厚朴＋大黄 0.2 5.81±1.15
厚朴＋枳实 0.2 5.01±1.21
*P厚朴＋大黄>厚朴＋枳实>厚朴，大黄配伍效果优于枳实。
5止咳试验
5 实验过程：
5.1样品制备：见化痰实验
5.2氨水引咳实验[6-10]
取18～22g小鼠90只，随机分成6组，分别灌胃空白组水0.2g•mL-1，拆方组0.2g•mL-1，急支糖浆组0.16g•mL-1。1h后将小鼠置于钟罩内，于0.2g棉花上注入0.3mL氨水，扔至钟罩内，加盖密封。观察小鼠咳嗽潜伏期和2min内咳嗽的次数。实验数据见表4。
表4厚朴大黄汤不同配伍对小鼠咳嗽的影响
组方
剂量(mL/20g) 咳嗽潜伏期(S) 2min内咳嗽次数
空白组 0.2 40.09±13.89 37.44±9.77
急支糖浆组 0.16 54.83±17.60** 26.78±4.79**
厚朴大黄汤 0.2 56.59±9.25** 26.22±5.09**
厚朴 0.2 42.33±5.31 32.33±4.33
厚朴＋大黄 0.2 47.74±5.70 31.11±3.02
厚朴＋枳实 0.2 49.37±11.73 30.67±7.43
**P厚朴＋枳实>厚朴＋大黄>厚朴，枳实配伍效果优于大黄。
6注意事项
6.1按时处死动物，保证结果准确。
6.2化痰实验中，手术要轻柔，以免损失血管。冲洗气管时，动作也要轻柔，以免损失气管及肺组织。冲洗速度和时间要尽量保持一致，以免造成较大的实验误差。酚红配制时，碳酸氢钠溶液要缓缓加入，以免产生泡沫溢出。
6.3止咳实验中，典型咳嗽是小鼠腹肌收缩，同时张大口，有时有咳嗽声。并且每次做完实验，小鼠取出后，钟罩用湿抹布擦净，使余气散尽，否则会影响下一只小鼠咳嗽潜伏时间。
7结论
该方中，大黄配伍厚朴化痰效果较好，而枳实配伍厚朴则止咳效果较佳。通过拆方分析，可判断复方中何种药物起主要作用，更好的判断药物在组方中的君臣佐使地位，是现代复方研究的主要方法之一。
参考文献
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