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[摘要]目的建立金麦胶囊中绿原酸含量的高效液相色谱法测定方法。方法采用shimpackVP―ODS色谱柱:(250mm×4.6mm,5ug);流动相:乙晴--0.4%磷酸溶液(12:88),流速0.8ml/min;检测波长327nm;柱温23℃,峰面积外标法定量。结果绿原酸在0.07~1.23ug,范围内线性关系良好(r=0.9999)平均回收率98%RSD=1.35%(n=5)。结论该方法测定样品分离度佳,灵敏度高,操作简便,结果准确可靠。
[关键词]金麦胶囊;含量测定;绿原酸;高效液相色谱法
金麦胶囊是由金银花、玄参、麦冬、桔梗、�子等九味中药加工而成,具有清热解毒、生津利咽之功效。用于上焦风热所致的喉痹,症见咽喉疼痛,咽干喉痒,声音嘶哑,急性咽炎,急性喉炎,见上述症候者。以金银花中的绿原酸为指标,采用高效液相色谱法测定金麦胶囊中绿原酸的含量,方法简便、准确,灵敏度高,可作为该制剂的质控标准。
1仪器与试药
1.1仪器岛津LC-10A高效液相色谱仪,SPD-10AVP检测器。LC-10AVP输液泵,CTD-10AVP恒温箱,CS-light色谱工作站。
1.2试药金麦胶囊(自制,批号20080510、20080518、20080525),绿原酸对照品(批号110753200212中国药品生物制品检定所),乙晴为色谱纯,水为纯净水,其余试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1溶液制备
2.1.1对照品溶液的制备精密称取绿原酸(置P2O5干燥器中减压干燥12h)对照品适量,加入50%甲醇制成1ml含200ug的备用溶液(10℃以下保存),精密量取备用溶液2ml,置10ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀既得。
2.1.2供试品溶液制备取内容物适量研细,混匀,精密称定0.5g,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率240W,频率40kHz)20min放冷,用50%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,既得。
2.1.3阴性对照品溶液的制备,按处方比例和制法,制成不含绿原酸的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.2色谱条件色谱柱为shimpackVP-ODS(250mm×4.6mm,5um);流动相:乙晴-0.4%磷酸(12:88);检测波长:327nm流速0.8ml/min柱温23℃进样量10ul,保留时间约为10min。理论塔板数以绿原酸峰面积计算应不低于2000,用外标法测定.。
2.3线性关系考察精密量取“2.1.1”项下的对照品溶液4ml(200ug/ul),置于10ml的量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,作为对照品溶液,分别精密吸取此对照品1、2、4、7、10ul注入色谱仪,记录色谱图,以进样量X(ug)对峰面积Y进行线性回归,得回归方程Y=2.76×106X-6.53×103r=0.9999(n=5)。表明绿原酸在0.08-1.21ug之间与峰面积呈良好的线性关系。
2.4精密度试验取对照品溶液,重复进行5次,每次10ul,测定其峰面积值,结果峰面积值的RSD=0.35%(n=5),表明精密度良好。
2.5重复性试验分别取同一批号供试品5份,按供试品项下测定。计算含量,绿原酸平均为0.75ug/粒,RSD=0.6%(n=5),表明重复性良好。
2.6稳定性试验取同一批号供试品溶。分别在0、3、6、9、12h各进样10ul,测定绿原酸峰面积,结果RSD=0.8%(n=5),表明供试品溶液在12h内基本稳定。
2.7加样回收率试验取同一批号的样品(绿原酸含量为0.75ug/粒,平均粒重为0.4074g)0.20g,共取样5份。分别加入上述绿原酸对照品溶液2ml(200ug/ml),照“2.1.2”项下方法依法制备供试液,进样10ul测定峰面积,计算回收率,结果见表1。
2.8样品测定取样品按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,进样10ul,测定峰面积按外标法(以峰面积)计算含量,结果见表2。
3讨论
3.1绿原酸的紫外图谱显示其在327nm波长处有最大吸收,且灵敏度高,与《中国药典》2005年版一部金银花含量测定所用波长一致,故选择327nm为检验波长。
3.2提取时间,分别超声15、20、30min提取测得绿原酸含量分别为0.79、0.80、0.80mg/粒。故选择50%甲醇提取20min为最佳条件。
