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【摘要】 目的 建立耳聋通窍丸的质量标准。方法采 用高效液相色谱法，Diamonsil(BDs)C18柱，流动相为：甲醇-水(25：75)，检测波长为238nm。结果 本法线性范围为O．100 4～0．903 6f，r=0．99997；平均回收率为99．1％，RSD％=1．44％。结论方法简便可靠，重复性好，可用于耳聋通窍丸的质量控制。
【关键词】耳聋通窍丸；栀子苷；HPLC
【中图分类号】R917
【文献标识码】A
【文章编号】 1673-7555[2007]01-0012-03
耳聋通窍丸是由龙胆、黄柏、大黄、栀子(姜制)、石菖蒲、当归、芦荟、黄芩、黄连、磁石(煅)、木香、路路通12位药组成的制剂。我们选栀子中的栀子苷作为含量测定指标，采用高效液相色谱法对耳聋通窍丸中栀子进行了含量测定，操作简便、准确、重现性好。现将结果报告如下：
1方法
1．1仪器及试药 岛津LC-2010C高效液相色谱仪；栀子苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号：0749―200007，规格为含量测定用)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
1．2色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；色谱柱：迪马BDS C18(250×4．6mm，5m)；流动相：甲醇－水(25：75)；流速：0．8ml／min；柱温：30℃；检测波长：238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于2500。
1．3对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每毫升中约含50μg的溶液作为对照品溶液。
1．4供试品溶液的制备 取本品细粉约1g，加甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，冷却，称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2方法学考察
2．1含量测定指标的选择 试验分别对耳聋通窍丸、龙胆中的龙胆苦苷、黄柏及黄莲中的盐酸小檗碱、大黄中的大黄素、大黄酚、黄芩中的黄芩苷、栀子中的栀子苷进行了色谱分离。实验表明龙胆在相应的流动相系统下没有色谱峰出现，盐酸小檗碱色谱峰的响应值太小，大黄素、大黄酚以及黄芩苷的色谱峰附近杂质峰干扰严重，结果选择了栀子中的栀子苷作为含量测量指标。
2．2系统适用性试验 按正文方法测定，得到栀子苷对照品和样品色谱图(见图1、2)，测得其理论板数按栀子苷峰计算Ⅳ=3032。在此条件下，栀子苷峰附近没有杂质峰干扰，得到很好的分离，参考中国药典2000年版一部栀子项下有关规定，确定其理论板数按栀子苷峰计算，不得低于2500。
2．3测定波长的选择 取栀子苷对照品的甲醇溶液，经UV－265紫外可见分光光度计，在波长300～400nm范围内测定，栀子苷在238nm波长有最大吸收(见图3)，参照中国药典2000年版一部栀子项下有关规定(测定波长为238nm)，故规定测定波长为238nm。
2．4流动相的选择 试验比较了三种流动相的比例：①甲醇－水(20：80)；②甲醇－水(30：70)；③甲醇－水(25：75)。结果表明，流动相①栀子苷峰保留时间太长；流动相②栀子苷峰与其前面杂峰分不开；流动相③栀子苷峰与其前面杂峰分离较好，故选择流动相甲醇－水(25：75)。
2．5阴性对照试验 为进一步考察实验设计的合理性，取不含栀子的阴性样品，依正文方法测定，结果所得色谱图中，在与栀子苷色谱峰相应的保留时间附近无色谱峰检出，从而进一步证明本法是合理可行的(见图4)。
2．6标准曲线的制备 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0．050 2mg的溶液，分别精密吸取2μl、6lμ、10μl、14μl、18μl注入液相色谱仪，测定，以对照品的进样量(μg)为横座标，色谱峰面积值为纵座标，作图(见图1)，得一近通过原点的直线。得回归方程：Y=964302X+5674，r=0．99997。
2.7精密度试验精密吸取本品供试品常人液10l,注入液相色谱仪重复进样5次,测定其峰面积值,结果见表1.RSD%=0.5%。
2．8稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔一定时间按正文色谱条件测定，结果见表2。结果表明，在24h内供试品溶液中栀子苷的含量基本稳定。
2．9重现性试验 取同一批供试品，依正文方法独立测定5次，结果见表3。结果表明，本法重现性良好。
2．10回收率试验 精密称取同法测定已知含量的供试品(批号：0749－200007)5份，分别精密加入栀子苷对照品适量，依法测定，计算回收率，结果详见表4。本法栀子苷平均回收率为99．1％，而RSD为0．3％，表明本法回收率较高，准确度好。
2．11样品测定结果 依正文方法测定10批样品，结果见表5。
3 3批投料药材的含量测定
按中国药典2000年版一部栀子苷项下含量测定方法，测定3批投料用栀子的含量，结果见表6。3批栀子中栀子苷的含量均符合药典规定。
4含量限度的确定
通过对10批样品含量的测定可知，平均含量2．46mg／g，药材含量均符合中国药典2000年版一部栀子项下含量测定的规定，考虑到原料药材本身含量的变化及生产中的波动，以平均值的85％为限度，即暂定本品每克含栀子苷不得少于2．0mg。
5小结
试验比较了大连伊利特C18和迪马BDSC18(250nm×4．6nm，5μm)。结果在流动相一致的情况下，栀子苷在迪马BDSC18柱上分离效果较好，故选择BDSC18柱为色谱柱。
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。
