【www.zhangdahai.com--其他工作总结】
[摘要]目的：探讨survivin的亚细胞定位与临床病理特征的关系。方法：收集行乳腺癌改良根治术、保乳手术和（或）腋窝淋巴结清扫手术，病理诊断为浸润性乳腺癌的患者标本80例。采用免疫组织化学方法对样本survivin表达水平进行检测，分析乳腺癌中survivin的亚细胞定位与临床病理特征之间的关系。结果：乳腺癌组织中survivin的阳性率为76%，其中26%定位于细胞核，15%定位于细胞浆，两者染色均阳性为35%。亚细胞定位差异与淋巴结转移相关（P0.05）。结论：survivin在乳腺癌表达具有亚细胞定位差别，并且与淋巴结转移相关，提示该基因的不同定位在乳腺癌发生和转移过程中发挥着不同的作用。
[关键词]survivin；乳腺癌；亚细胞定位
[中图分类号]R737.9 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）05-0785-03
Relationship between survivin subcellular localization and clinical pathologic features in breast cancer patients
LI Yong-ping1,YU Fang1,LV Yong-gang1,ZHU Hai-jun1,SHI Ming2,WANG Ling1
(1.Department of Vascular Endocrine Surgery,2.Department of Neurology,Xijing Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi"an 710032,China,China)
Abstract: Objective To explore the relationship between subcellular localization of survivin and clinical pathologic features of breast cancer patients. Methods Survivin expression was examined by immunohistochemistry in 80 primary breast cancer cases with clinical pathologic features. Results The expression of survivin was detected positive in 76% of the 80 breast cancer cases, among which 26% located in the nucleus,15% in cytoplasm, and 35% in both.Survivin expression in different subcellular localization was associated with lymph notes metastasis but independent of patients" pathologic grade, estrogen receptor expression, and tumor size. Conclusion Our data showed that survivin was expressed in different subcellular localization of breast cancer,and related to lymph nodes metastasis, which may be served as a prognostic indicator of breast cancer
Key words:survivin;breast cancer;subcellular localization
survivin是1997年发现的一种肿瘤特异性蛋白[1]，属于凋亡抑制因子家族，有多种生物学功能，如促进细胞增殖、抑制凋亡、促进肿瘤血管生成。survivin在肿瘤组织高表达，在成人分化组织无表达或低表达。在正常组织中，survivin是细胞分裂必须的，并参与染色质分离和胞质分裂[2]。在肿瘤细胞中，survivin的表达增高会扰乱细胞周期，使纺锤体缺失或染色质整合异常，从而影响细胞分裂。而且，survivin在线粒体聚积会阻止细胞凋亡[3]。survivin存在不同的亚细胞定位，即定位于细胞核和（或者）胞质中。研究发现，survivin的亚细胞定位可能与其多种剪接异构体相关。目前发现survivin存在14种编辑剪接体[4]，其中survivinΔEx3和survivin-2主要在胞核内表达，而survivin-2B和survivin-3B主要在胞质中表达。临床研究发现，Survivin的高表达与多种恶性肿瘤的不良预后相关，包括白血病、肺癌、结肠癌、宫颈癌、前列腺癌等。但同时存在不同或者相反的结论，这可能和其亚细胞定位及不同的剪接体生物学功能相关。目前Survivin的亚细胞定位与乳腺癌的生物学特征的关系尚无报道。
1 资料和方法
1.1 研究对象来源：乳腺癌石蜡组织样本均来自于2009年到2010年在西京医院血管内分泌外科手术治疗的80例随机抽取部分乳腺癌病人，石蜡样本保存于西京医院病理科。在本研究中，包括经乳腺癌改良根治术、保乳手术和（或）腋窝淋巴结清扫手术，并术后病理诊断为浸润性乳腺癌的病人。排除标准包括：肿瘤远处转移、新辅助化疗病人、接受放射治疗病人、接受术前其它治疗。肿瘤标本及临床资料均得到病人知情和许可。
1.2 检测方法：石蜡标本切为4μm切片，经脱蜡、水化、封闭（3%正常羊血清）及去除内源性过氧化物酶（含3% H2O2的甲醇）后，加入小鼠抗人survivin抗体(mouse anti-human survivin, Abcam, USA) 1:200反应4度过夜。生物素化抗小鼠二抗和ABC复合物孵育后，DAB显色，镜下观察染色结果。待相关部位出现特异性显色时，充分冲洗终止显色。苏木素复染胞核后，经脱水、透明后中性树胶封片。阴性对照使用鼠IgG代替一抗，阳性对照使用宫颈癌阳性切片。
1.3 判定标准：Survivin免疫组化阳性标准为肿瘤细胞核和（或）细胞质呈棕黄色染色。根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例以及阳性细胞染色强度判定实验结果：（A）：按显色细胞数记分，阳性细胞数
2 结果
2.1 survivin亚细胞定位及表达情况：Survivin在乳腺癌组织中的阳性率为76%，其中定位于细胞核的占26%，细胞浆染色阳性的占15%，细胞核和细胞浆均染色阳性的占35%（图1）。间质细胞基本不表达survivin，但在肿瘤周围某些淋巴细胞染色弱阳性。
2.2 survivin在乳腺癌中亚细胞定位与临床病理特征的关系：通过对survivin在乳腺癌组织中亚细胞定位与临床病理特征关系的分析，发现在淋巴结转移阳性的乳腺癌原发灶组织中survivin细胞浆内表达阳性较细胞核内表达阳性多；相对在未发生淋巴结转移的原发灶中，survivin主要表达在细胞核，且二者差异有统计学意义。而survivin在乳腺癌亚细胞定位与其它临床病理特征，如病理分级、雌激素受体表达情况或肿瘤大小，均无显著关系（表1）。
3 讨论
我们前期研究发现，survivin的功能发挥，可能和基团修饰、亚细胞定位、不同的剪接变体有关[5]。本实验主要研究了survivin亚细胞定位与乳腺癌临床病理特征的关系，结果发现survivin的阳性率为76%，在细胞核和细胞浆均有分布，是浸润性乳腺癌的一个特征。
survivin的亚细胞定位和其生物学功能相关。作为细胞核内染色质复合体蛋白和细胞浆中微管相关蛋白，在正常细胞中，survivin是在细胞周期的G2/M期表达的调节蛋白，并且与有丝分裂纺锤体相关。Survivin与微管相互作用破坏可能是survivin抗凋亡功能丧失和caspase-3作用增强的原因[6]。Fortugno研究发现[7]，免疫组化染色可以区分细胞中不同分布的survivin，而且只有细胞浆可以和P34结合。P34-cyclin B磷酸化survivin是survivin发挥抑制凋亡作用所必须的[8]。所以细胞核内的survivin由于不能被P34磷酸化，所以不能发挥凋亡抑制作用，从而可能会诱导凋亡。survivin只有在胞浆中才能发挥凋亡抑制作用，这可能可以解释survivin的亚细胞定位与其功能的关系。
在survivin与胃癌的研究中，Yao[9]发现survivin也分布于细胞核和细胞浆中，而且多因素分析表明，核内survivin表达与较好的预后相关；胞浆survivin阳性提示预后差。晚期前列腺的研究表明[10]，survivin核染色评分高的患者5年生存率较评分低的患者高，提示survivin高表达可能是判断前列腺放疗效果的指标。在乳腺癌研究中，Kennedy研究表明，survivin的核染色阳性与患者5年生存率相关，并且核染色阳性作为一个独立因素提示良好预后[11]。以上研究与本结果一致。
所以，survivn的亚细胞定位与乳腺癌的发生发展相关，survivn可能会成为一个预后相关的预警分子。其机制还需要进一步研究。
[参考文献]
[1]Zaffaroni N, Daidone MG. Survivin expression and resistance to anticancer treatments: perspectives for new therapeutic interventions[J]. Drug Resist Updat, 2002,5:65-72.
[2]Sampath J, Pelus LM. Alternative splice variants of survivin as potential targets in cancer[J].Curr Drug Discov Technol,2007,4:174-191.
[3]娄鸣,饶国洲,朱勇,等.靶向Survivin RNAi诱导人黏液表皮样癌细胞凋亡的实验研究[J].中国美容医学,2009,18:1471-1473.
[4]Li F,Ling X.Survivin study: an update of "what is the next wave"[J]? J Cell Physiol, 2006, 208: 476-486.
[5]Lv YG,Yu F,Yao Q, et al.The role of survivin in diagnosis,prognosis and treatment of breast cancer[J].J Thorac Dis,2010,2:100-110.
[6]Yoshida T,Zhang Y,Rivera Rosado LA,et al.Blockade of Rac1 activity induces G1 cell cycle arrest or apoptosis in breast cancer cells through downregulation of cyclin D1,survivin,and X-linked inhibitor of apoptosis protein[J].Mol Cancer Ther, 2010,9:1657-1668.
[7]Fortugno P,Wall NR,Giodini A,et al.Survivin exists in immunochemically distinct subcellular pools and is involved in spindle microtubule function[J].J Cell Sci,2002, 115:575-585.
[8]Yoon MJ,Park SS,Kang YJ, et al.Aurora B confers cancer cell resistance to TRAIL-induced apoptosis via phosphorylation of survivin[J].Carcinogenesis,2011.
[9]Yao C,Liu J,Shao L.Rapamycin inhibits the proliferation and apoptosis of gastric cancer cells by down regulating the expression of survivin[J].Hepatogastroenterology,2011,58:1075-1080.
[10]Zhang M,Ho A,Hammond EH,et al.Prognostic value of survivin in locally advanced prostate cancer: study based on RTOG 8610[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys,2009,73: 1033-1042.
[11]Kennedy SM,O"Driscoll L,Purcell R,et al.Prognostic importance of survivin in breast cancer[J].Br J Cancer,2003,88:1077-1083.
[收稿日期] 2011-12-30 [修回日期]2012-03-10
编辑/张惠娟
