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【摘要】阿司匹林是临床常用的解热镇痛药,目前国内本品的剂型主要为肠溶片,有胃肠道不良反应。阿司匹林口腔崩解片剂型，可使崩解时间显著缩短,溶出速度提高，吸收快，提高生物利用度。通过阿司匹林口腔崩解片进行了Beagle犬体内药物动力学研究，建立阿司匹林口腔崩解片在Beagle犬血浆中的HPLC-UV测定方法，采用自身对照交叉试验设计方法，以阿司匹林普通片为参比制剂，进行了阿司匹林口腔崩解片的单剂量试验。表明课题阿司匹林口崩片的研制及所建立的溶出度测定方法在试验动物的评价水平上科学合理。�
【关键词】 阿司匹林；口腔崩解片；比格犬；药物动力学
阿司匹林在体内很快转化为其活性代谢物水杨酸并迅速分布到各个组织，所以本文首先建立了测定血中水杨酸浓度的高效液相色谱(HPLC)法[1]，并采用该法考察了阿司匹林口腔崩解片(受试制剂)与阿司匹林普通片(参比制剂)在比格犬体内水杨酸的相对生物利用度与药动学特性[2]，并与阿司匹林普通片比较进行生物等效性评价，为该制剂的临床应用提供参考依据。�
1 实验材料�
1．1 试药与仪器，见表1。�
1．2 实验动物 健康比格犬6只，雌雄各半，体质量20～21 kg，实验前禁食12 h。�
2 实验方法�
2．1 血浆样品测定方法的建立�
2．1．1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil ODS C18柱(4．6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水(60:40)；流速：1 ml/min；检测波长：327 nm;进样量：20 μl。�
2．1．2 血浆样品预处理 取血清0．2 ml，置于10 ml离心管中，加入0．75 mg/ml的内标液10 μl，涡旋振荡混匀，再加入88%磷酸液30 μl，涡旋振荡混匀1 min，加入氯仿/异丙醇（95/5）2 ml，混旋振荡3 min，4000转/min，离心10 min，取出有机相，在室温下用氮气吹干，50 μl流动相溶解残留物，取20 μl进样分析。�
2．1．3 标准曲线的制备 取空白血浆0．2 ml，分别加入一定量的不同浓度的水杨酸标准溶液，使其终浓度分别为0．5、5、25、50、75、100、200 μg/ml，并加入内标液10 μl，混匀后按“血浆样品预处理”项下进行操作，结果用水杨酸与内标的峰面积比(Y)和水杨酸的浓度(C)进行回归计算。�
2．1．4 回收率及精密度测定 取空白血清0．2 ml，按“标准曲线的制备”项下方法分别配制水杨酸高、中、低3个浓度（分别为5、50、100μg/ml）的血浆样品，测定高、中、低3种不同浓度阿司匹林血浆样品的绝对回收率和相对回收率；以标准曲线高、中、低浓度阿司匹林血浆样品进行日间（连续测定5 d）和日内（1 d内连续测定5次）精密度试验。�
2．1．5 重现性试验 取一定量阿司匹林血清，按“血样预处理”项下操作，重复测量5次，计算其变异系数。�
2．2 动物实验方案
采用双周期交叉给药方法进行试验，将6只健康比格犬随机分为阿司匹林口腔崩解片组（受试制剂）及阿司匹林普通片组（参比制剂），每组3只。比格犬禁食12 h（自由饮水）后，分别口服阿司匹林口腔崩解片和阿司匹林普通片2片(每片25 mg)，于给药后0、1、3、4、5、6、7、9、12、15、18、24 h由犬前肢静脉采集约4 ml血液标本[3]。所采血样肝素抗凝，离心得血浆后，于-20℃冰箱保存，待测。停药1周后，进行交叉实验，方法同上。�
2．3 体内外相关性研究
以比格犬口服阿司匹林口腔崩解片后的血药浓度数据以及阿司匹林口腔崩解片的体外释放结果为基础[4]，采用Wanger-Nelson法计算阿司匹林口腔崩解片在比格犬体内不同时间点的吸收分数，以体内吸收分数对体外累积释放度进行回归，对其进行体内外相关性研究。�
2．4 统计学方法 单剂量给药研究中，分别采用房室模型和统计矩模型来计算其主要的药动学参数：Cmax、Tmax、AUC、MAT及相对生物利用度等。缓释片与受试片各项药动学参数均由DAS2．0软件进行计算，将所得单剂量给药的Cmax,AUC 0-∞, AUC0-T经对数转换后进行方差分析，并进一步采用双单侧t检验和90%置信区间法进行生物等效性评价。Tmax经非参数检验法(秩和检验)进行统计检验。�
3 试验结果�
3．1 方法专属性 水杨酸和内标在6 min内达基线分离，内标的保留时间为3．6 min，水杨酸的保留时间为74．5 min。其色谱图见图1。水杨酸及内标与血清中的杂质分离良好。�
3．2 回收率与精密度 阿司匹林绝对回收率、相对回收率及日间、日内精密度见表2。�
3．3 标准曲线、检测限与定量限 用阿司匹林与庚酸的峰面积比(Y)和阿司匹林的浓度(C)进行线性回归，得标准曲线方程：Y=0．013C+0．001，γ=0．999 2(n=5)，线性范围为0．5～200 μg/ml。�
按实验所用色谱条件以信噪比(S/N)3:1计，测得血浆中阿司匹林定量限为0．5 μg/ml，最低检测限为0．17 μg/ml。�
3．4 重现性试验结果取一定量阿司匹林血清，按“血样预处理”项下操作，重复测量5次，计算其变异系数为2．0%，说明结果有很好的重现性。�
3．5 血药浓度-时间曲线 6只比格犬单剂量给药受试片和参比片后经时血药浓度数据见表3、4，平均血药浓度-时间曲线见图2、3，曲线满足一室模型，权重系数为1/CC2。�
3．6 药动学参数 采用DAS软件对实验数据进行药物动力学模型拟合[5]，模型参数见表5。�
3．7 相对生物利用度
根据每条比格犬交叉服用试验制剂T和参比制剂R后的血药浓度时间曲线下面积(AUC)[6]，计算出阿司匹林口腔崩解片相对生物利用度F。�
F= AUC0-∞T/AUC0-∞R×100%=103．67%�
3．8 体内外相关性结果 由犬体内释放研究结果可知，比格犬单剂量服用阿司匹林口腔崩解片后，阿司匹林在体内的吸收符合一室模型，因此选用Wanger-nelson法计算阿司匹林口腔崩解片在比格犬体内不同时间点的吸收分数f(%)。计算结果见表6。�
结论：以阿司匹林口腔崩解片体内吸收分数Y对体外释放度X进行线性回归,进行阿司匹林口腔崩解片体内外相关性考察，得出线性方程为：Y=0．5951X+0．5498，相关系数r=9803。由t检验结果可知，P1/2、MRT 、Tmax没有明显变化，表明该口腔崩解片具有较好的口崩效果；口腔崩解片相对于普通片的生物利用度为103．67%，经方差分析二者为生物等效制剂；体内外相关性研究表明，阿司匹林口腔崩解片的体外累积释放度与比格犬体内药物吸收百分数之间相关，线性相关系数r=0．985 9(P
