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[摘要] 目的 观察川芎嗪洗脱支架(TES)对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法 在6只小型猪冠状动脉分别植入TES与金属裸支架(BMS),术后第28天处死动物,用组织病理学方法检测内膜增殖情况,用免疫组化和TUNEL 法观察TES对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。结果 TES组较BMS组冠状动脉管腔面积增加、支架内新生内膜面积和面积再狭窄百分比减小(P2O2灭活内源性过氧化物酶,PBS洗涤,置入柠檬酸盐缓冲液中放入微波炉,95 ℃维持10 min。滴加1∶50稀释的鼠抗人PCNA(DaKo公司产品)4 ℃过夜,PBS洗涤后滴加EnVision TM试剂(DaKo公司产品),37 ℃放置30 min,PBS洗涤,滴加0.05% DAB后再加0.01% H2O2,显色5~�15 min,镜下控制终止显色反应。最后苏木素衬染,常规脱水,封片镜检。每个标本观察8个高倍镜视野,计数阳性细胞数占总观察细胞数的百分比。�
1.6 TUNEL法测定VSMC凋亡�
组织切片常规脱蜡,加入蛋白酶K(20 U•ml-1),消化后洗涤,滴加TUNEL标记液(Roche公司产品),TdT酶和荧光素标记的dUTP混合液(1∶29),37 ℃湿盒中孵育1 h,PBS洗涤。缓冲甘油封片,置荧光显微镜下观察。计算VSMC的凋亡数(取10个视野的平均值)。�
1.7 统计学方法�
两组数值均采用x-±s表示,两组间用独立样本t检验,用SPSS 12.0统计软件进行分析。�
2 结果�
2.1 支架植入情况�
6只猪均成功在左前降支及左回旋支冠状动脉中段各植入支架2枚,支架植入术后即刻行冠状动脉造影证实管腔通畅,无充盈缺损、管壁夹层、栓塞、支架移位或远端冠状动脉痉挛,无急性血栓形成。所有动物均顺利完成术后第28天的复查。�
2.2 支架植入第28天冠状动脉内膜增殖情况�
见表1。TES组与BMS组相比,支架内面积无显著差异。但管腔面积、新生内膜面积、平均面积狭窄百分比两组间比较差异有统计学意义(P