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【摘要】:目的:了解用灭活大肠杆菌免疫小鼠所要的最适浓度,以指导实验教学获得较好的免疫血清。方法:随机选择150只健康小鼠做样本,分成5组做各种不同浓度的大肠杆菌菌液免疫小鼠,进行结果的观察和对比。结果:首次用6亿/ml以下的菌液浓度的免疫组死亡率较低,用6亿/ml以上的菌液浓度的免疫组血清效价较为满意。结论:首次免疫以6亿/ml的菌液浓度为最适浓度。可作为今后免疫小鼠以获取血清的实验指导。
【关键词】:大肠杆菌;小鼠;免疫;浓度
【中图分类号】R378.2+1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517 (2010) 02-078-1
在免疫实验教学当中,免疫血清是相当重要的一部分,有较好的免疫血清能给实验教学提供了很好的实验效果。目前尚未对大肠杆菌在免疫小鼠时所要用的浓度有相关的报道。为此,我们对平时较多用的小鼠用大肠杆菌进行了免疫实验,现将结果报告如下。
1对象与方法
1.1对象随机选择健康小鼠150只,均在同等动物场中饲养。
1.2方法将菌液在65℃水浴中灭活60分钟。分别将以上150只小鼠分成5组,每组30只,按各种不同浓度的大肠杆菌菌液对各组小鼠进行免疫,并做好标记,如下表1:
表1菌液浓度(个菌数/ml)
1组
小鼠 2组
小鼠 3组
小鼠 4组
小鼠 5组
小鼠
首次 1亿 3亿 6亿 9亿 12亿
第二次 3亿 6亿 9亿 12亿 15亿
第三次 6亿 9亿 12亿 15亿 18亿
第四次 9亿 12亿 15亿 18亿 21亿
按照以上浓度进行常规免疫小鼠的过程后,进行观察,最后采集小鼠血清送检进行免疫实验,观察效果对比。
2结果
2.1小鼠死亡率比较,1组死亡1只小鼠,死亡率为3.33%、2组死亡3只小鼠,死亡率为10%、3组死亡4只小鼠,死亡率为13.3%、4组8只小鼠,死亡率为26.7、5组死亡12只小鼠,死亡率为40%。
2.2采集以上免疫后的小鼠血清,按以上组进行分开做凝集反应试管法比较。进行效价的对比,比较出现“++++”时的血清效价,此时血清浓度越低为该组血清效价越高。结果观察如表2
表2“++++”时血清浓度,数字为血清稀释倍数
1组血清 2组血清 3组血清 4组血清 5组血清
40 80 160 160 240
3讨论
(1)本次实验从兔子的死亡率来看,4、5组的死亡率较高,证明这两组所使用的菌液浓度过高,导致小鼠死亡较多。1、2、3组兔子死亡率较低,是实验可以接受的范围。表明是小鼠可以接受的菌液浓度。(2)从血清的效价比较看,3、4、5组的血清效价都较为满意,可达到实验要求。(3)综合以上所述,3组死亡率低,效价达到实验要求,是适合的浓度。得出,3组中所免疫的浓度为最适浓度。因此,今后用大肠杆菌做抗原免疫小鼠时,可首次用6亿/ml、第二次免疫用9亿/ml、第三次免疫用12亿/ml、第四次免疫用15亿/ml的菌液浓度。可作为今后免疫动物的实验指导。
