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【摘要】 目的：建立测定双黄连注射液中黄芩苷和连翘苷含量的高效液相色谱法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Waters Symmery C18 ( 250mm×4.6mm,5μm ),流动相为乙腈―水（25�75），流速为1.0ml/min，检测波长为227nm，柱温为30℃。结果：黄芩苷、连翘苷的线性范围分别为1.63～8.51；0.43～2.14，重复性试验的RSD为 0.91 %、1.59% （n=6） ，平均回收率为 92.56%、95.75%，RSD分别为0.82%、2.39%（n=6）。结论：本方法简便易行，结果准确，可用于双黄连注射液的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；双黄连注射液；黄芩苷；连翘苷；含量测定
determination of baicalin and forsythin content in Shuanghuanglian injection by HPLC
Li Xiaoyun，Li Xiaoliang (Hezhou People"s Hospital, Guangxi Hezhou, 542800)
【Abstract】 Objective To set up a HPLC method for the determination of baicalin and forsythin content in Shuanghuanglian injection. Methods HPLC column was Waters Symmery C18(250mm×4.6mm, 5μm), the mobile phase was acetonitrile － water(25∶75)，the detection wavelength was 280 nm and the flow rate was 1.0 ml *min-1, the column temperature was 30℃．Results The linear range of Baicalin and Forsythin were 1.63～8.51； 0.43～2.14，the RSD of the repeatability test were 0.91%,1.59% (n = 6)，The average recovery rate of forsythin were 92.56%、95.75%，the RSD were 0.82%、2.39%(n= 6)．Conclusion The method is simple，convenient，accurate and reliable，which can be used for quality control of Shuanghuanglian injection．
【Key words】 HPLC; Shuanghuanglian injection; baicalin; forsythin; determination
双黄连注射液是由金银花、黄芩、连翘三味药材经科学方法提取的无菌注射液，是临床常用的中药注射剂，主要功效为清热解毒，具有抗菌抗病毒作用。目前，双黄连注射液收载于《卫生部中药成方制剂》第七册，原标准中只收载了黄芩苷的含量测定方法，没有金银花和连翘的含量测定方法，因此本文通过系统摸索，获得了HPLC同时测定双黄连注射液中黄芩苷、连翘苷两个指标性成分的色谱条件，相应的方法学考察结果表明，本研究所建方法简单，结果准确，可用于双黄连注射液的质量控制，现报道如下。
1 仪器与试药
1200型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）；CP225D型电子天平(德国赛多利斯公司)；AW-120型电子天平（西班牙 COBOS 公司）。
黄芩苷、连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所；批号分别为110715-200514、110821-200711）；双黄连注射液（黑龙江多多药业有限责任公司，批号：08050731、080310212 、070920312 ）乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmery C18 ( 250mm×4.6mm,5μm )；流动相：乙腈―水（25�75）；检测波长：227nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：供试品30?l、连翘苷5μl、黄芩苷10μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷减压干燥12h以上的黄芩苷、连翘苷对照品适量，分别加入50%甲醇制成每1ml含连翘苷42.82?g、黄芩苷 16.30 ?g的对照溶液。
2.2.2 供试品溶液 精密量取本品20ml，置水浴上蒸至约5ml，加中性氧化铝5g,搅拌混匀后，加至中性氧化铝柱（粒度量100～200目），2g，内径1cm)上，用70%乙醇适量洗涤容器，洗液加于柱上，继续用70%乙醇洗脱，收集洗脱液160ml，蒸干，残渣加50%甲醇适量温热使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.2.3 阴性样品溶液 取不含黄芩和连翘的阴性样品，同法（2.2.2）制备阴性样品溶液。
2.3 专属性试验 分别吸取对照品溶液连翘苷5μl、黄芩苷10μl，供试品溶液、阴性样品溶液各30?l进样，按“2.1”项下色谱条件进行检测。结果供试品溶液中黄芩苷和连翘苷与杂峰完全分离，阴性样品溶液无干扰。（谱图见图1）
A、B-对照品（1-黄芩苷； 2-连翘苷）；C-供试品；D-.阴性样品；
2.4 线性关系考试验 分别取“2.2.1”的黄芩苷和连翘苷混合对照品溶液，加50%甲醇制成每1mL含黄芩苷0.33?g、连翘苷0.086?g的混合对照品溶液，作为系列浓度的对照品溶液。依次自动进样5、10、15、20、25μL，记录色谱图。以对照品进样量X （μg）为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，进行线性回归。结果表明，各组分在表1浓度围内的线性关系良好。结果详见表1。
2.4 精密度试验 分别吸取对照品溶液连翘苷5μl、黄芩苷10μl，在相同的色谱条件下测定，记录峰面积，平行测定6次。结果黄芩苷、连翘苷的 RSD分别为0.20%、0.94%，（n=6）表明分析方法精密度较好。
2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，于室温下0、2、4、6、8、12、24h分别按上述色谱条件测定，结果黄芩苷、连翘苷的RSD分别为0.25%、2.02%（n=6），表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.6 重复性试验 取同一批样品（批号：080310212）共6份，按供试品溶液制备方法平行制备溶液并测定，结果，黄芩苷、连翘苷的平均含量4.45μg/ml 、1.04μg/ ml,RSD分别为0.91 %、1.59%（n=6），表明分析方法重复性良好。
2.7 回收率试验 取已知含量的样品（批号：080310212）10ml，分别精密加入一定量的黄芩苷、连翘苷对照品，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表2黄芩苷、连翘苷的平均回收率为99.50%、98.00%，RSD分别为3.29%、2.89%（n=6）。
2.8 样品含量测定 取3批双黄连注射液，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果表3。
3 讨论
双黄连注射液为中药复方制剂, 成分较复杂, 主要有效成分为黄芩苷、连翘苷和绿原酸，黄芩苷和连翘苷单个成分的测定方法已有报道[1,2]，本方法可同时测定双黄连注射液中黄芩苷、连翘苷的含量，结果准确，方法简便，重复性及回收率均较理想，阴性对照品溶液无干扰，可以作为该制剂的质量控制方法。
参考文献
[1]谢俊梅. 反相高效液相色谱法可测定双黄连注射液中黄芩苷的含量[J].中国医药导报，2008，5（24）：51～52.
[2]程晓英，赵明会.高效液相色谱法测定双黄连注射液中连翘苷含量[J].中国药业，2011，20（8）：41～42.
