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摘要：目的：建立柿叶中总黄酮的含量测定 方法，为考察其内在质量提供依据。方法：利用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH分光光度法 测定柿叶中黄酮类物质含量，检测波长为510nm。结果：芦丁检测浓度在0.020~0.100mg/ml 范围内与吸收度呈良好的线性关系(�r�=0.9999)，平均回收率为99.99%(RSD=0.99%，�n �=5)。柿叶中总黄酮的平均含量为5.63%。结论：此测定方法简便快捷、精密度高、准确性 好，可以作为柿叶中总黄酮的含量测定方法，以控制黄酮的质量。
关键词：柿叶；总黄酮；紫外分光光度法
中图分类号： R927.2 文献标识码： A 文章编号： 1008-2409(2008)03-0433-02
Determination of total Flavonoids in Diospyros Leaves/LUO Yu-lan∥Department of Pharmacy, The Affiliated Hospital of Guilin MedicalCollege, Guilin 541001， China
Abstract:Objective：To establish a method for the determination of t otal flavonoids in leaves of diospyros and to provide basis for the study of itsinternal quality. Methods：Using NaNO2-Al(NO3)3-NaOH spectrophotometryt o determine the total flavones content in leaves of diospyros with a detection w avelength at 510nm. Results： Good linear relationship with absorbability occurr edwhen the concentration range of rutin was 0.020~0.100mg/ml(�r�=0.9999) and it s average recovery was 99.99% (RSD=0.99%, �n�=5). In leaves of diospyros the a verage content of total flavonoids was 5.63%. Conclusion：This technique is a co nvenient and simple method with high accuracy. The method can be used for the de termination of the total flavonoids in leaves of diospyros and for the controlli ng the quality of its.
Key words:leaves of diospyros; total flavonoids; UV-spe ctrophotometry
柿叶为柿科植物柿(Diospyros kaki L.)的干燥叶，其中含有丰富的维生素C、黄酮、胆碱、 有机酸、胡萝卜素、多种氨基酸及铁、锌、钙等对人体健康有益的营养成分，主要用于咳喘 、肺气肿、各种内出血、高血压等病症［1］。近年来大量药理实验研究表明，黄酮 类化合物有降脂、抗血栓、抗氧化［2］、抗衰老、清除自由基［3］、抗心率 失常等作用，因而广泛用于医药、食品等行业，具有极广的开发应用前景。笔者参照文献 ［4,5］的方法建立络合-分光光度法对柿叶总黄酮含量测定方法进行研究，现报道如下 。
1 仪器与试药
1.1 仪器
中草药万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；CENTRIFUGE TDL-5型离心 机:上海安亭科学仪器厂；722S紫外分光光度计:上海精密科学仪器有限责任公司；电热恒温 干燥箱：上海市跃进医疗器械一厂；HANGPING JA1003型上皿电子天平：上海天平仪器厂；R E-52旋转蒸发仪：上海安亭实验仪器有限公司。
1.2 试药
干燥柿叶由广西医科大学药理教研室提供。芦丁对 照品（中国药品生物制品检定所,批号：0080-9705），95%乙醇(广东光华化学有限公司)， 石油醚(天津市光复精细化工研究所),乙酸乙酯(天津市光复精细化工研究所)，其余试剂均 为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
称取柿叶粗粉5.0 g，加70%乙醇50ml浸泡30min后，回流提取2h，过滤。药渣再加70%乙 醇40ml，回流提取1h，过滤。合并两次滤液，离心(3000γ/min) 15 min。回收乙醇后，收 集提取液，减压浓缩，用石油醚萃取2次，除去叶绿素、脂类，弃醚相，水相用乙酸乙酯萃 取2次，合并乙酸乙酯相浓缩干燥得柿叶总黄酮作为供试品。精密称取供试品200mg，用50% 的乙醇溶解过滤定容于100ml容量瓶中作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓 度为0.20mg/ml对照品溶液。
2.3 检测波长的确定
由于形成金属有色络合物后吸收红移是黄酮类化合物的特性，取芦丁对照品溶液及其 铝络合物测定液在200～800nm之间进行扫描，芦丁对照品溶液在510nm处没有吸收，而其铝 络合物测定液在510nm处有吸收峰，故选择此波长为检测波长。
2.4 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加 50%乙醇使成5ml；各加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6min；各加10%硝酸铝溶液0.3ml ，摇匀，放置6min；再各加1%氢氧化钠溶液4ml，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置1 5min，制成待测对照品溶液。以第一瓶为空白，在510nm处测定吸收度。以吸光度（A）对浓 度（C）进行线性回归，得回归方程C=0.09370A-0.0006（�r�=0.9999），芦丁对照品浓 度在0.020~0.100mg/ml范围内与吸收度线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取供试品溶液1.0ml，共5份，分别置于10ml容量瓶中，按照2.4项下的方法操作 ，分别测定吸收度，结果RSD=0.41%，表明本方法精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，按照2.4项下的方法操作，摇匀后每30min 测定1次，结果120min内测得吸收度的RSD=2.41%，表明在120min内完成测定时结果准确 、稳定。
2.7 柿叶中总黄酮含量测定
精密吸取供试品溶液5份，每份1.0ml，分别置于10ml容量瓶中，按照2.4项下的方法操作 ，分别测定吸收度，代入回归方程计算供试品液浓度，换算成药材中总黄酮的含量。结果见 表1。
2.8 加样回收率试验
精密称取芦丁对照品适量，加入已知含量供试品中，按供试品溶液的制备方法制成溶液5份 ，各取1.0ml，置于10ml容量瓶中，按2.4项下测定方法进行测定。结果见表2。表2 回收率试验结果
样品编号回收率（％）平均回收率（％）RSD（%）1100.79298.823101.4799.990.99499.67599.20
3 讨论
3.1 黄酮类化合物分子易与金属盐类如铝盐、锆盐、锶盐、镁盐等反应生成有色的金属络 合物［6］，常用于黄酮类化合物含量测定。在本实验中，笔者以柿叶为原料，采用 石 油醚除脂后，再用乙酸乙酯提取柿叶中总黄酮，以芦丁为标准对照品，采用NaNO2-Al(NO 3)3-NaOH络合法，先用NaNO2还原总黄酮，再加Al(NO3)3络合，最后加NaOH溶液 显色，产生红色化合物进行比色测定测定其中的黄酮类物质。
3.2 中草药中的总黄酮成分多数带有一个以上羟基，对光和空气中的氧很敏感，其稀释液 在室温下久置后吸收强度会下降。因此，待测液应现用现制，并避光保存于冰箱中。
3.3 柿叶的主要有效成分是黄酮类化合物，目前已发现的柿叶黄酮类化合物有黄芪苷、异 榭皮素［7］、山萘酚、槲皮素、阿拉伯糖苷［8］、芦丁、金丝桃苷［9 ］等。因此选用黄酮作为定量指标有一定的实际意义。本实验方法操作简便快捷、稳定， 结果可靠，重现性好，易于普及，可为有效评价质量及开发资源提供依据，并对深入研究柿 叶中有效成分的结构及提取精制等方面的工作提供一定的参考价值，为柿叶的质量标准研究 和进一步开发利用奠定了基础。
参考文献：
［1］ 广西卫生厅.广西中药材标准［S］.南宁：广西科学技术出版社，1992：2 43.
［2］ CHEN G,LU H,WANG C,et al�.Effect of five triterpenoid compoun ds isolated from leaves of Diospyros kaki on stimulus induced superoxide generat ion and tyrosyl phosphorylation in human polymorphonuclear leukocytes［J］. ClinChim Acta, 2002, 320(1-2)：11-16.
［3］ HAN J,KANG S,CHOUE R,et al�.Free radical scavenging effect ofDiospyros kaki Laminaria japonica and Undaria pinnatifida［J］.Fitoterapia, 200 2,73(7-8)：710-712.
［4］ 梁生旺.中药制剂分析［M］.北京：中国中医药出版社，2003：385-386 .�［5］ 席荣英，孙祥德. 半枝莲中总黄酮含量测定［J］. 新乡医 学院学报，2003，20（1）：29-30.
［6］ 林启寿.中草药成分化学［M］.北京：科学出版社,1977：301.
［7］ NAKATANI M�,MIYAZAKI Y,IWASHITA T,et al.Triterpenes from Ilexrotunda fruits［J］.Phytochemistry,1989,28(5)：1479-1482.
［8］ GOROBETS A V�.Antibacterial compounds from Oak quercus acutathunb［J］.Khim Prir Soedin,1985，(5)：710.
［9］ 郭玫，董晓萍.柿叶的研究概况［J］.重庆中草药研究，1999，40：164 -166.
(收稿日期： 2008-01-29)
［责任编辑 高莉丽 邓德灵］
