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【摘要】目的建立用高效液相色谱法测定复方薏蓝颗粒中龙胆苦苷含量的方法。方法采用Shimpack CLC ODS(150 mm×6�0 mm,5 μm) 色谱柱，流动相为乙腈�水(13∶87)，检测波长：276 nm。结果龙胆苦苷在2�6~13 μg(r=0�9998) 范围内良好的呈线性关系。平均回收率为97�8%，RSD为1�0%。结论本方法操作简便、准确、灵敏度高，可有效地用于复方薏蓝颗粒的质量控制。
【关键词】复方薏蓝颗粒；龙胆苦苷；高效液相色谱法
Analysis of gentiopicrin in Fufang Yulan Keli of Chinese MedicineCHEN Yi�hua, YANG Zhi�hua， LIU Zhen�feng� Shantou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shantou 515041,China
【Abstract】ObjectiveTo establish method of HPLC for analysis of gentiopicrin in Fufang Yulan Keli of Chinese Medicine� MethodsThe colum:Shimpack CLC ODS(150 mm×6�0 mm,5 μm),the mobile phase was acetonitrile�H2O(13∶87)(v/v),the flow rate 1�0 ml/min,the detection wavelength 276 nm.Resultsthe linear range of gentiopicrin was 2�6~13 μg(r=0�999 8), The average recovery rate was 97�8%, RSD=1�0%.ConclusionThe method is accurate, rapid and sensitive and can be effectually applied to the quality control of Fufang Yulan Keli.
【Key words】Fufang Yulan Keli;Gentiopicrin; HPLC
作者单位：515041广东省汕头市中医医院(陈毅华);广东省汕头市皮肤性病防治院(杨志华刘镇峰)复方薏蓝颗粒是本医院的中药自制制剂，于2010年在本医院制剂室现有生产条件的基础上，联合广东一方制药厂的技术力量进行生产，经申报广东省药监局审核批准取得医院中药自制制剂注册生产批准文号(粤Z20100090)。该制剂由板蓝根、连翘、龙胆草、夏枯草、重楼、紫草、薏苡仁等中药材组成，具有清热除湿、活血解毒的功效。临床上用于治疗湿热�毒型引起的带状疱疹、单纯疱疹、湿疣、扁平疣等症，疗效确切。该制剂中药材成分复杂，为控制本制剂的内在质量，保证临床用药效果，龙胆苦苷作为制剂中的主要成分之一，本文参考文献［1，2］采用高效液相色谱法测定制剂中龙胆苦苷的含量，作为该制剂生产质量的内部控制标准。
1仪器与试药
1�1仪器美国Waters 2695高效液相色谱系统，Waters 2487双波长紫外检测器，N2000色谱工作站，MILLIPOKE Smiplicity 185纯水器，瑞士CAMAG Reprostar(薄层成像系统)，硅胶G薄层板(浙江省路桥四甲生化塑料厂)，G2170AA数据处理软件系统。
1�2试药龙胆苦苷对照品(批号0737�9910)购于中国药品生物制品检定所。复方薏蓝颗粒由本医院制剂室生产的中药制剂，所用药材均为生产用同批药材。试剂：甲醇为进口色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。
1�3含量测定
1�3�1色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；色谱柱：Shimpack CLC ODS(150 mm×6�0 mm,5 μm)；流动相：乙腈�水(13∶87)；流速：1�0 ml/min，检测波长：276 nm，进样量：20 μl［1,2］。
1�3�2对照品溶液的制备取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，用流动相溶解，并稀释定容，制成每1 ml含龙胆苦苷0�5 mg的溶液，即得。
1�3�3供试品溶液的制备精密称取本品粉末(过三号筛)5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，超声提取20 min，取出放置室温，加50%甲醇至原称重。摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液作为供试品溶液。
1�3�4阴性对照溶液的制备处方中除去龙胆按制剂工艺制备，制得阴性对照品溶液。
1�3�5阴性试验按上述仪器和试验条件，将龙胆苦苷对照品溶液，供试品溶液及阴性对照溶液分别进样测定，结果其他成分对龙胆苦苷的测定无干扰。
1�3�6线性关系考察精密吸取上述对照品溶液，并适当稀释。按测定时实际配制的对照品溶液浓度分别为0�259、0�518、0�777、1�036、1�295 mg/ml，分别精密吸取10 μl注入液相色谱仪，每种浓度进样3次，测得平均峰面积分别为206758、413915、625456、8228830、1035451，以龙胆苦苷峰面积积分值对进样量(μg)进行直线回归，得标准曲线：Y=392+8�0×104X，r=0�9998，表明龙胆苦苷进样量在2�6~13 μg范围内有良好的线性关系。
1�3�7精密度试验精密吸取同一批号(20110513)的黄芩苷对照品溶液20 μl，重复进样5次，测得峰面积积分值，结果RSD为0�94%。
1�3�8稳定性试验取龙胆苦苷对照品溶液和供试品溶液各20 μl，按含量测定项下方法测定，在8 h内每次间隔2 h进样测定1次，结果峰面积积分值前后变化不明显，对照品溶液RSD为0�57%，供试品溶液的RSD为0�93%。
1�3�9重现性试验取同一批样品(批号：20110513)5份，按以拟定的样品测定方法，分别测定5次，结果RSD为1�21%。
1�3�10回收率试验精密称取已知龙胆苦苷含量的样品，分别加入一定量的龙胆苦苷对照品(3种不同水平，各3份)，按上述的样品溶液制备并进样测定，计算回收率，结果见表1。
1�3�11样品测定分别精密吸取对照品溶液与样品供试液各20 μl，按上述色谱条件测定。5批样品中龙胆苦苷的含量测定结果见表2。
表1龙胆苦苷回收率试验结果
序号样品含量(mg)添加量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)114�2685�1219�31098�527�1717�0013�97297�237�2335�0812�28399�4414�3195�1219�54197�957�2707�0013�97995�897�81�067�2085�0812�18197�9714�5295�1219�54197�987�1237�0014�01098�497�1285�0812�08097�5表2样品中龙胆苦苷的含量测定结果(mg/g)
批号2011040720110418201104262011051320110525含量5�04�75�65�25�42小结与讨论
2�1关于龙胆药材中龙胆苦苷的含量测定方法，根据有关文献记载已有薄层色谱法、比色法和高效液相色谱法等。本文采用高效液相色谱法对样品的测定具有较好的分辨性及重现性。在测定过程中发现：若采用流动相甲醇∶水(1∶4)得到的龙胆苦苷峰，峰形较宽。故采用乙腈∶水(13∶87)作为流动相，得到的龙胆苦苷峰峰形对称，阴性样品无干扰，与其他成分达到基线分离。
2�2分析过程中，由于使用不同的硅胶板，必然存在着厚薄差异，影响测量结果，所以要测量板与板之间的矫正系数，方法如下：在各薄层板上各点5 μl的标准品，它的峰面积积分值与绘制标准曲线板上的5 μl标准品峰面积积分值的比值，即为校正系数。
2�3在桔梗的定性鉴别中曾采用了加酸水解，再用氯仿萃取的方法，但上样量太大，效果不好，后改用酸水、氯仿双项水解的方法，达到了很好效果。展开时，曾采用展开系统石油醚(60℃~90℃)�醋酸乙酯�冰醋酸(25∶7∶0�5)，斑点的分离度不好；氯仿�异丙醇�冰醋酸(9∶1∶0�5)，Rf值太大，后改为氯仿�异丙醇�冰醋酸(15∶1∶0�5)则达到了较好分离效果。
2�4本文通过薄层鉴别分析，中药材桔梗、枳壳、连翘的鉴别不仅专属性强且重现性好，可作为复方清肺消痤颗粒制剂的定性指标。对于定量测定，根据相关文献，选定制剂中黄芩苷的含量作为指标。在测定时，对超声提取法和热回流提取法进行了比较，发现效果相近，故选择操作较简便的超声提取法。按处方制备工艺制成不含黄芩的阴性样品，按样品测定方法同法测定。结果表明阴性样品中其他组分对黄芩苷的含量测定无干扰。
参考文献
［1］中华人民共和国药典(一部)� 北京：中国医药科技出版社，2010.
［2］何伟，张峰�龙胆泻肝颗粒质量标准研究�山东医药工业，2002，21(2):1.
