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[摘要]目的 探讨血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）基因A1166/C多态性与高血压患者左室肥厚之间的关系，以期从分子水平研究高血压患者左室肥厚发生的一般规律。方法 64例轻中度原发性高血压患者住院期间应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测AT1R基因型，同时应用HP SONOS 5500彩色多谱勒显像仪测定主动脉内径（ADD）、室间隔厚度（IVST）、左室内径（LVDD）、左房内径（LAD）、左室后壁厚度（LVPWT）、二尖瓣前叶舒张早期下降速度（EF斜率），然后计算左室重量和左室重量指数(LVMI)。结果 CC基因型因其突变率极低，本次实验未发现，故未予分组。本组原发性高血压患者AC基因型频率为23.4%，C等位基因频率为11.7%。 AC基因型患者ADD[（33.67±3.21）mm]较AA型者[(30.18±3.82)mm]宽，两者之间差异有统计学意义（P＜0.01）。AC型患者LVDD、LVPWT、LVMI均较AA型者小，差异有统计学意义[分别为(46.61±3.79）mm vs(49.65±9.06)mm,(8.08±0.40)mm vs(8.40±0.89)mm,(95.82±16.51)g•m-2vs(114.54±34.95)g•m-2，均P＜0.05];AC型患者EF斜率（71.88±12.70）较AA型者（60.68±16.60）大，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）;两基因型间IVST、LAD差异无统计学意义[分别为(8.51±0.64）mmvs(8.47±1.03)mm,(30.61±2.70)mmvs(30.23±5.20)mm,均P＞0.05]。结论 AT1R基因为AC型的原发性高血压患者左室肥厚的程度可能较AA型者轻，A1166/C多态性可能与高血压患者左室肥厚程度有关。�
[关键词] 原发性高血压；血管紧张素Ⅱ-1型受体；基因多态性；左室肥厚�
[中图分类号] R544.1
[文献标识码] A
[文章编号] 1671-7562(2007)02-0079-04��
Study of the relationship between the AT1Receptor gene polymorphism �and left ventricular hypertrophy in hypertension patients��
LIN Xin1,JIANG Shi-sen1,CAO Wen2
(1.Department of Cardiology,Nanjing General Hospital of Nanjing Command,Nanjing 210002,China;�
2.Department of Pharmacology，Nanjing General Hospital of Nanjing Command，Nanjing 210002,China)��
Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between the AT1 receptor gene polymorphism and left ventricular hypertrophy in hypertension patients.MethodsThe AT1 receptor gene type of 64 patients of mild-moderate essential hypertension was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP).Aorta dimension(AD)，interventricular septal thickness(IVST)，left ventricular diastolic dimension(LVDD)，left atria dimension(LAD)，left ventricular posterior wall thickness(LVPWT)，ejection fraction(EF)were determined,and left ventricular weight and left ventricular mass index(IVMI)were calculated.ResultsThe frequency of AC gene type in these essential hypertension patients and the C1166 allete of AT1Receptor gene was 23.4% and 11.7%.There was obvious difference on LADD，LVPWT and LVMI [(46.61±3.79)mmvs(49.65±9.06)mm，（8.08±0.40）mmvs(8.40±0.89)mm,(95.82±16.51)g•m-2vs(114.54±34.95)g•m-2，all P＜0.05] between AC and AA gene type.There was obvious difference on ADD and EF[(33.67±3.21)mm vs(30.18±3.82)mm,(71.88±12.70)vs（60.68±16.60），P＜0.01 or P＜0.05]between AC and AA gene groups.There was no obvious difference on IVST and LAD [(8.51±0.64)mm vs(8.47±1.03)mm,(30.61±2.70)mm vs(30.23±5.20)mm，all P＞0.05)between AC and AA gene type.ConclusionA1166/C gene polymorphism may be associated with the degree of left ventricular hypertrophy of essential hypertesion.The degree of left ventricular hypertrophy of AC gene type is lower than that of AA.�
Key words:essential hypertension；AT1 receptor gene；polymorphism;left ventricular hypertrophy�
(Modern Medical Journal,2007,35:79-82)��
我国人群中高血压发病率呈逐年上升趋势。目前认为，原发性高血压是一种多基因性遗传性疾病，其发病系遗传与环境因素共同作用的结果,其中大约30%的个体血压变异是由遗传因素决定的[1-3]。肾素血管紧张素系统（RAS）在高血压的发生、发展过程中起重要作用，其中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是RAS的重要组成部分，是已知内源性升压物质中最强的激素之一。AngⅡ通过其受体发挥作用。AngⅡ受体有1型（AT1R）和2型（AT2R）两种亚型[4]。AT1R主要分布于血管平滑肌细胞上，介导AngⅡ绝大多数的生物学作用。因此,该基因多态性与高血压发病之间关系的研究日益受到重视。在目前已知的该基因的5个变异位点中，1166位点是由C代替了A而发生变异。自1994年Bonnardeaux等[5]发现白种人高血压患者AT1R的C1166等位基因频率明显增高以来，国内外学者针对该基因多态性与高血压发病及其并发症之间的关系进行了一系列的研究，但研究结论不尽一致，且关于AT1R基因多态性与高血压患者左室肥厚之间关系的系统研究尚不多见。本研究旨在探讨AT1R基因A1166/C多态性与国人中高血压患者左室肥厚之间的关系，以期从分子水平研究高血压患者左室肥厚发生的一般规律。�
1 对象与方法�
1.1 研究对象�
64例原发性高血压患者来自本院心内科2000年7月至2001年6月期间住院患者，均为汉族，其中男49 例，女15例，平均年龄（57.32±13.92）岁。高血压按照新的WHO诊断分类标准，符合收缩压140~179mmHg（1mmHg=0.133kPa）、舒张压90~109mmHg的轻、中度高血压标准，并排除糖尿病、继发性高血压及妊娠。�
1.2 方法�
1.2.1基因组DNA的提取 参照常规从外周血细胞提取DNA的方法[6]。�
1.2.2PCR反应系统 PCR引物[7]:5′端引物为5′-AAGCCTGCACCATGTTTTGAGC-3′，3′端引物为5′-GTTTCTGACATTGTTCTTCGAGC-3′，由上海细胞所合成。PCR扩增AT1R基因片段：反应体积为25μl，于0.5ml Eppendorff管中依次加入10×反应缓冲液2.5μl，25mmol•L�-1 MgCl�22μl，1mmol•L�-1 dNTP 1.0μl，模板DNA样品0.5~1μg（5μl），30μmol•L�-1 3′端和5′端引物各1μl，灭菌水11.5μl，覆盖一层石蜡油，94℃预变性5min后，加入5U•μl�-1 Taq DNA聚合酶0.2μl，依次经过93℃变性30s，54℃退火40s，72℃延伸45s，反复循环35个周期后结束反应[8]。实验采用PE-2400扩增仪（美国PE公司）进行扩增反应。�
1.2.3 PCR扩增产物的检测 扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下检测。�
1.2.4基因型的检测 取5μl�PCR产物，加入限制性内切酶Ddel（Promega公司）5U，10×反应缓冲液2.0μl，BSA 2.0μl，灭菌去离子双蒸水10μl，反应总体积20μl。37℃酶切4h。产物用2%琼脂糖凝胶电泳，电压60V，稳压电泳45min。EB染色，紫外灯下检测并拍照。Marker采用100bp DNA Ladder（MBI）。�
1.2.5 测定血压 于给药前1d上午9：00测量患者基础血压，血压测量均采用水银柱袖带血压计测量卧位右上臂血压值。�
1.2.6 心脏超声指标测定 采用HP SONOS 5500彩色多谱勒显像仪，探头频率2～4MHz，取胸骨旁左室长轴切面进行M超检查，测定主动脉内径（ADD）、室间隔厚度（IVST）、左室内径（LVDD）、左房内径（LAD）、左室后壁厚度（LVPWT）、二尖瓣前叶舒张早期下降速度（EF斜率）。利用舒张末期时测定的IVST、LVDD、LVPWT，按Devereux公式计算左室重量，左室重量（g)=1.04× [(LVDD+ IVST+ LVPWT)3-LVDD3]-13.6,左室重量指数(LVMI)即左室重量(g)/体表面积(m2)。左室肥厚的超声诊断标准定为LVMI>134g•m-2(男性)或>110g•m-2(女性)[9]。�
1.3统计学处理�
用Excell统计软件进行数据处理。计量资料采用x-±s表示,AC基因型组与AA基因型组组间计量资料的比较采用t检验。�
2 结果�
2.1AT1R基因A1166/C多态性分析�
原发性高血压患者的DNA经PCR扩增，产物为278bp的片段。若在此片段中存在A1166→C位点突变，则产生限制性内切酶Ddel的切点，从而导致了3种基因型：AA型（无酶切位点），其酶切产物为278bp；CC型（存在酶切位点），其酶切产物为170bp和108bp两个片段；AC型为3个片段并存的杂和子。本组原发性高血压患者未见CC型；AC型15例，频率为23.4%（15/64），C等位基因频率为11.7%；AA型49例。经计算，所调查人群基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。各基因型经凝胶电泳分型稳定后拍照，见图1。
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2.2 AA、AC基因型间心脏超声采集左室肥厚及左室重量指标的比较�
AC基因型原发性高血压患者ADD较AA型者宽，两者之间差异有统计学意义（P＜0.01）；AC型者LVDD、LVPWT、LVMI均较AA型者小，差异均有统计学意义(均P＜0.05);AC型患者EF斜率较AA型者大，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）;两基因型组IVST、LAD间差异无统计学意义(均P＞0.05)。见表1。���
表1 各基因型间心脏超声采集左室肥厚及左室重量指标的比较�
3 讨论�
AT1R是一种与G蛋白偶联的受体，具有7个跨膜功能区，由于其介导了AngⅡ的绝大多数生物学作用，AT1R基因成为高血压病的一个重要候选基因。1994年，Bonnardeaux等[5]检测出AT1R基因5个多态性（T573→C，A1062→G，A1166→C，G1517→T，A1878→G），未发现有致氨基酸序列发生变化的功能性突变点。有作者在病例对照研究中发现只有A1166→C在高血压组和正常组突变频率有差异[8]。澳大利亚学者Wang等[10]在另一项研究中也发现高血压患者C1166等位基因频率明显高于正常组。我国学者林从容等[11]也认为AT1R基因A1166/C多态性与中国人高血压病相关。也有研究报道高血压患者与正常人的AT1R基因的C等位基因频率无差异[12-13]。�
AngⅡ能直接使小动脉平滑肌收缩、外周阻力增加，交感神经冲动发放增加，醛固酮分泌增加而导致水钠潴留。近年来已证实心脏、血管、肾等处存在局部或组织RAS[14-15]。局部RAS各成分作用于心血管系统可以促进血管平滑肌细胞增殖，导致心肌细胞肥大，引起血管壁增厚，使血管阻力增加。原发性高血压左室肥厚是导致严重心律失常及心源性猝死的危险因子之一。而左室肥厚是原发性高血压病理生理的一部分，包括心肌细胞肥大、间质细胞增殖和胶原的增生堆积，AngⅡ在介导心肌细胞肥大和间质纤维化的过程中起重要作用。因而左室肥厚的发生是否与AT1R基因多态性相关值得探讨。国内外学者针对该基因多态性（A1166/C）与高血压病左室肥厚等并发症之间的关系已进行了一系列的研究，但研究结论不尽相同。国内有学者报道AT1R基因多态性可能与高血压动脉硬化有关，但与高血压左室肥厚无关[16]，这一研究结果与Benetos等国外学者的研究结果[17-18]相似。然而，有关AT1R基因多态性与原发性高血压患者左室肥厚及左室重量之间关系的研究报道不多，研究样本量亦偏小。�
本研究发现，本组原发性高血压患者AC基因型频率及C等位基因频率与林从容等[11]报道的相应基因型频率相似。 AT1R基因多态性本身可能与原发性高血压患者左室肥厚程度相关，即AC基因型患者发生左室肥厚的程度可能较AA型患者轻，或者说，AA基因型患者可能更易发生左室肥厚。AC型患者的平均LVPWT、LVDD均小于AA型患者，EF斜率大于AA型患者，差异均有统计学意义（均P0.05）,这可能与单纯原发性高血压患者压力负荷增加对心室壁的影响更为突出，而对室间隔的影响相对较小有关。�
左室肥厚及左室重量指标是衡量原发性高血压靶器官损害的重要指标。高血压患者随着年龄增长，动脉逐渐硬化，收缩压上升，舒张压下降，脉压增大，心、肾等靶器官负荷加重，可引起左室肥厚、肾功能受损[16]。通过本研究可以看出，基因分型对于判断高血压患者左室肥厚发生概率以及指导原发性高血压患者及时合理选用逆转左室肥厚的治疗方案是有一定作用的。对于敏感基因型（如AA型）的高血压患者，应尽可能地及早选用那些兼有降压及逆转左室肥厚的药物。相信随着样本量的扩大，本实验结论将进一步趋于完善，这必将促进高血压及其并发症的防治具体化，并为高血压及其并发症的基因治疗提供理论依据。�
[参考文献]�
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[收稿日期] 2006-09-19
“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”
