【www.zhangdahai.com--科学科技公文】
[摘要]目的:探讨三种配血方法在肿瘤患者临床用血时的结果。方法:微柱凝胶技术,凝聚胺法,盐水法。结果:微柱凝胶法对920例肿瘤患者配血其不规则抗体阳性检出率明显高于其他两种方法。
[关键词]肿瘤;微柱凝胶;凝聚胺;不规则抗体
[中图分类号]R446.11
[文献标识码]B
[文章编号]1006-1959(2009)12-0229-01
肿瘤患者的治疗已从手术向化疗、放疗和放化疗结合等综合性治疗发展,化疗后肿瘤患者血色素、白细胞、血小板、血浆蛋白等都很低,因此治疗过程常常需要输血等支持疗法。但是反复、大量输注成分血,将刺激机体产生免疫性抗体,引起交叉配血不合,或出现免疫溶血性输血反应,导致血红蛋白下降,血红蛋白尿,肾功能衰竭,严重者造成死亡。因此输血前为需输血患者提供同型血液并进行交叉配血试验和不规则抗体筛选试验,对于保证临床输血的安全有效具有重大意义。本文作者对本院920例需要输血的肿瘤患者应用微柱凝胶技术(MGT)交叉配血试验,并同时与盐水试管法和凝聚胺法进行比较。报告如下:
1 研究对象与方法
1.1 临床资料:受血者为2005年11月～2006年10月在我院住院的需要输血的肿瘤患者920例,年龄在0～88岁之间。献血者血液由盐城市中心血站提供。
1.2 试剂和设备:微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血卡(DiaMed-ID),ID-Incubator37SI(DiaMed专用离心机),ID-Centrifuge12SII(DiaMed血库专用37℃孵育箱);凝聚胺介质试剂(Baso-Polymatching),购自珠海贝索生物技术有限公司。
1.3 方法
1.3.1 微柱凝胶法:将患者与供血者标本(EDTA抗凝)离心,使其红细胞和血清分离,分别将患者与献血者红细胞用生理盐水配成3%～5%红细胞悬液(一般用1ml生理盐水加50uL红细胞),取配血卡,标上患者姓名撕开封口膜,主侧:加患者血清25uL和刚配制的供血者红细胞悬液50uL;次侧:加25uL献血者血清和50uL刚配制的患者红细胞悬液;将试剂卡置37℃孵育15min,使用专用离心机(1000rpm)离心10min,观察结果。结果判断:发生抗原、抗体反应的红细胞依据凝聚情况而停留在凝胶上部或分布在凝胶中,判为阳性结果;未发生反应的红细胞,也就是不凝集的红细胞经离心通过凝胶间隙到达柱底部,判定为阴性结果。
1.3.2 凝聚胺法:取试管2支,标明主次侧,主侧管加病人血清2滴,加供血者3%～5%红细胞悬液1滴,次侧管反之。各加低离子溶液(LIM)0.7ml,混合均匀1min后,各加凝聚胺(Polybrene)溶液2滴,并混合均匀静置15秒,在1000rpm条件下离心1min,倾去上清液,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体。轻轻摇晃试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则须重新测定。最后加入悬浮液(Resuspending)2滴,(如果室温较低,在滴入Resuspending时,要将试管置入37℃水浴中预温),再轻轻摇动试管并同时观察结果。如果在30s～1min内凝集散开,表示是由Polybrene引起的非特异性凝集,配血结果相容;如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应,配血结果不合。如凝集不明显,可将管内液体倒在玻片上用显微镜观察。
1.3.3 盐水配血法:取试管2支,标明主次侧,主侧加病人血清2滴,加供血者3%～5%红细胞悬液2滴,次侧反之。混匀,离心(离心条件为1000rpm,离心1min),轻轻转动试管观察结果。如果在室温较低时,应将试管在37℃水浴中保温,以防寒冷凝集素引起凝集反应影响结果判断。结果如果无溶血无凝集表示交叉配血相合;若有溶血或凝集表示交叉配血不合。
2 结果
三种交叉配血方法的结果比较:从表中可以看出,在920例标本进行交叉配血时,盐水配血法均没有凝集,即没有显示阳性结果,有3例用微柱凝胶法和凝聚胺法均显示阳性,我们将微柱凝胶法测得阳性的4例标本送去市中心血站进行不规则抗体筛检,结果表明微柱凝胶法测得4例标本均为不规则抗体检测阳性。在这里所指的阳性均是主侧凝集,次侧凝集在平时交叉配血时也有,次侧凝集可能是由于患者的红细胞被不规则抗体所致敏,但一般交叉配血时以主侧配血相合为主,次侧不合而主侧相配合的血液也可以少量输血,所以日常试验时,只将主侧凝集的标本送去市中心血站进行不规则抗体的筛检。根据鉴定结果,920例肿瘤患者中,有4例为不规则抗体筛查阳性,即阳性率为0.43%。应用微柱凝胶法的阳性检出率也为0.43%,与鉴定结果相同,而应用盐水试管法阳性检出率为0,凝聚胺法阳性检出率为0.32%。微柱凝胶法的阳性检出率高于其他两种方法。
3 讨论
微柱凝胶法技术是1994年获美国FDA批准,是建立在传统血型血清学基础上的一项免疫学检测技术,是基于游离红细胞和聚集红细胞是否能通过具有分子筛作用的凝胶颗粒构成的胶体介质,从而使不同状态的细胞得以分离这一原理进行的,是一种在微柱管中利用凝胶介质进行的改良的血凝反应。在这里需要说明的是患者输血前的血型检查,笔者所在科室的程序一般是先进行ABO血型鉴定,再进行交叉配血,也就是说此交叉配血是建立在ABO血型鉴定无误后再进行的,当然在ABO血型鉴定时,我们同时也做D抗原的检测。这样一来交叉配血出现的不合主要就是患者标本的血清中含有不规则抗体(主侧凝集),或是患者标本的红细胞已被致敏(次侧凝集)。而此试验中笔者使用的是微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血卡,其凝胶介质中含有抗人球蛋白,能与标本中的不规则抗体发生反应,从而可以使配血和不规则抗体的检测同时进行。结果显示微柱凝胶交叉配血试验阳性率0.36%,完全符合我市中心血站的鉴定结果,而凝聚胺法的阳性率为0.33%,盐水试管法阳性率为0,且观察结果时,微柱凝胶法阳性反应程度明显高于凝聚胺法,尤其对于不规则抗体所致的弱凝集反应,凝聚胺法需要在显微镜下观察,而微柱凝胶法则可以肉眼直接观察,并且结果可以长时间保存,由此可以看出微柱凝集法对于不规则的弱凝集检查能力最强,这三种方法灵敏度微柱凝胶法最高,与文献报道一致。
