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【摘要】 目的 观察鼻疗法喷剂对偏头痛大鼠模型5-HT、NO、多巴胺含量的影响，探讨其神经生物学作用机制。方法 大鼠随机分成6组：正常对照组、模型对照组、阳性药物组、鼻疗法喷剂大、中、小剂量组；除空白对照组以外的其他5组SD大鼠皮下注射硝酸甘油注射液10 mg/kg进行造模；造模后，阳性药物组每天灌胃天舒胶囊溶液1 ml/100 g；鼻疗法喷剂高、中、低剂量组分别每天滴0．1 ml/100 g、0．05 ml/100 g、0．025 ml/100 g体质量；正常对照组每天灌胃生理盐水1 ml/100 g体质量，连续4 d。末次给药1 h后，采血测定血中的5-HT、多巴胺含量，取脑测定下丘脑、脑干含量。结果 鼻疗法喷剂组特别是大剂量组血清中5-HT与多巴胺含量、下丘脑和脑干中NO含量皆显著低于正常对照组。结论 鼻疗法喷剂能有效降低血清中5-HT、多巴胺含量，降低下丘脑、脑干的NO含量，是鼻疗法喷剂的作用机制之一。�
【关键词】鼻疗法；偏头痛；5-HT；NO；多巴胺
偏头痛是常见多发病，有多种发病机制，其中神经递质异常、血管源学说和炎性学说占有重要地位。针对这些发病机制的治疗药物显示了相应的疗效，但许多药物具有较大的毒副作用。积极研究寻找治疗偏头痛的药物，仍然是当今的重要课题[1-2]。鼻疗法喷剂是治疗偏头痛的经验方，有必要探讨其疗效与治疗作用机制。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 实验动物 SD系大鼠，体质量(200±20)g,雌雄各半，由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，合格证号：SCXK(沪)2007-0005。
1．1．2 实验药物 鼻疗法喷剂为治疗偏头痛经验方，由本院制剂室制备；天舒胶囊，每粒0．34 g，临用前用蒸馏水配成3．74 g/100 ml，由江苏康缘药业股份有限公司生产，批准文号：国药准字Z10950004，生产批号：070510；硝酸甘油注射液，每支5 mg/1 ml：,由北京益民药业有限公司提供，批准文号：国药准字H11020289，生产批号：20070111。
1．1．3 试剂 5-HT ELISA试剂盒：美国ADL，生产批号：RT110371；多巴胺ELISA试剂盒：美国ADL，生产批号：CA-A011；NO：南京建成生物工程研究所，批号：A014-2。
1．2 实验方法
1．2．1 分组 取60只SD大鼠随机分成6组，每组雌雄各半。分别为正常对照组，模型对照组，阳性药物组，鼻疗法喷剂大、中、小剂量组。
1．2．2 造模 除空白对照组以外的其他4组SD大鼠皮下注射硝酸甘油注射液10 mg/kg，空白对照组皮下注射生理盐水10 mg/kg。
1．2．3 给药 阳性药物组每天灌胃天舒胶囊溶液1次1 ml/100 g体质量(0．037 4 g生药/ml,相当于人的等效剂量)；大剂量为0．1 ml/100 g体质量，中、低剂量分别为0．05、�0．025 ml�；空白对照组灌以生理盐水1 ml/100 g体重,连续4 d。
1．2．4 取材 末次给药1 h后，采血放冰箱保存，并将SD大鼠处死，取脑，分袋装好，放超低温冰箱保存，待测脑中的5-HT，NO，多巴胺含量的变化。
1．2．5 大鼠血清多巴胺浓度测定 ①取酶标板，依次对应分别加入100 μl的标准品与空白微孔中；②分别标记样品编号，加入100 μl样品于空白微孔中；③在标品孔和样品孔中加入50 μl酶标记溶液；④(36±2)℃孵育反应60 min；⑤洗板机清洗5次，每次静置10~20 s；⑥每孔加入底物A、B液各50 μl；⑦(36±2)℃避光孵育反应15 min；⑧每孔加入终止液，终止反应。
1．2．6 大鼠血清5-HT测定 ①取酶标板，依次对应分别加入100 μl的标准品与空白微孔中；②分别标记样品编号，加入100 μl样品于空白微孔中；③在标品孔和样品孔中加入50 μl酶标记溶液；④(36±2)℃孵育反应60 min；⑤洗板机清洗5次，每次静置10~20 s；⑥每孔加入底物A，B液各50 μl；⑦(36±2)℃避光孵育反应15 min；⑧每孔加入终止液，终止反应。
1．2．7 NO的测定 按试剂盒要求进行测定。
1．2．8 统计 利用Sigma-plot数据处理软件进行统计分析。
2 结果�
结果见表1~3。�
由图1及表1可以看出，模型组5-HT显著高于正常组(P[1-3]。英明格是血管选择性5-HT1受体激动剂，可抑制脑血管收缩治疗偏头痛。甲基麦角胺、苯塞啶是5-HT竞争性拮抗剂；苯乙肼是单胺氧化酶抑制剂，防止5-HT的氧化脱胺作用，提高5-HT浓度，防止脑血管扩张；丙戊酸钠作用于GABA受体，使有血管扩张作用的5-HT活性降低的作用，均是有效的预防剂[2]。以上说明5-HT在脑组织及血中的作用较为复杂，本实验中观察到鼻疗法喷雾剂通过降低血中5-HT而发挥作用。�
NO兼有神经递质和效应分子的双重功能，在偏头痛和其他头痛的产生机制中是一个十分关键的因子[3，5]。NO是一种强力的内源性血管扩张和一种新型的逆行神经递质，广泛存在于中枢神经系统内，可以直接导致内皮源性血管扩张，在脑膜血管调节中起重要的作用；NO可通过作用于血管周围的NO能神经纤维(NO-ergic fiber)，产生神经源性血管扩张[4-5，7]。Jansen-olesen等发现应用GTN后，颅内血管活性增加，更易于由血清素引起血管收缩，由CGRP引起血管扩张。GTN直接或间接地导致延迟性硬膜神经源性炎症的形成，NO是其中的介质。GTN及其衍生物NO可增加硬膜细胞因子和iNOS的表达，产生神经源性炎症，细胞因子和NO的增加增强了细的、无髓鞘的三叉神经的敏感性，使之激活，产生疼痛，并促进脑膜的水肿及神经肽的释放。注射GTN 2 h后硬膜巨噬细胞中iNOS mRNA表达开始增加，并呈剂量依赖性。NO供体可触发肥大细胞脱颗粒反应，说明在GTN所致神经源性炎症中起介质的作用。还有一种解释，GTN可能激活支配硬膜的三叉神经传入纤维，可引起早期的短暂头痛，接着巨噬细胞激活，炎症形成，产生延迟出现的头痛[4-5，8]。鼻疗法喷雾剂降低了下丘脑、脑干的NO含量，可能抑制血管扩张与炎症反应。�
胃复安是多巴胺拮抗剂，起到治疗偏头痛的作用[2]。鼻疗法喷雾剂能够降低血清中多巴胺的含量。
参考文献
［1］ Stephen D,Richard BL,Nabih M.From migraine mechanisms to innovative therapeutic drugs.Neurology,2005,64：1-3.
［2］ 陈清棠.偏头痛.临床神经病学,2000,4：533-558.
［3］ 郭俊唐,于生元.大鼠偏头痛模型中脑导水管周围灰质c-fos表达及与5-�色胺共存.中华神经科杂志,2004,37(6)：504-506.
［4］ Karl B,Stanislav,V,koulchitsky,et al.Nitric oxide synthase inhibition lowers ativity of neurons with meningeal input in the rat spinal trigeminal nucleus.Neuroreptor,2003,14(2)：229-232.
［5］ 郭琳,洪治平.硝酸甘油型实验性偏头痛模型原理与研究现状.中国疼痛医学杂志，2004,10(6)：357-359.
［6］ 赵永烈,王爱成,陈锦锋,等.硝酸甘油型偏头痛模型评述.中国康复理论与实践,2005,6(11)：455-456.
［7］ Stopien A.The role of nitrogen oxide in migraine attack.Neurochir,1999,33(2)：435.
［8］ Marteuetri P,Aalos D,StirparoG,et al.Modulation of nitric oxide synthase by nitric oxid donor compounds in migraine.Int J Clin Res,1998,28(2)：135.
