【www.zhangdahai.com--调研报告】
【摘要】目的 建立测定山药及其麸炒品中尿囊素含量的高效液相色谱分析方法。方法：采用ODS-C18色谱柱 （250mm×4.6 mm，5μｍ），流动相为甲醇-水（1：39）,检测波长为224nm，柱温30℃，流速0.8mL/ｍｉｎ。结果：尿囊素在0.1μg～5μg间线性关系良好,回归方程为y = 3961.4x + 9612.9（r＝0.9998）, 尿囊素的平均回收率为100.4%。结论：该方法简便、快速、准确,可作为山药及其炮制品质量控制的可靠手段。
【关键词】尿囊素；山药；反相高效液相色谱法
山药（RHIZOMA DIOSCOREAE）为薯蓣科植物Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎。山药主产于河南，以焦作市（古怀庆府）所产者为最佳；山西、广东、广西、河北、江苏和云南等省亦有栽培。生山药偏重于生津益肺、补肾涩精，临床上常用于肺虚喘咳、肾虚遗精、带下、尿频、虚热消渴等症；麸炒山药偏重于补脾健胃，多用于脾虚食少、泄泻便溏。
山药含有薯蓣皂苷元和尿囊素等成分。尿囊素能修复上皮组织，促进皮肤溃疡和伤口愈合，具有生肌作用，可用于胃及十二指肠溃疡，是山药有效成分之一 。目前文献报道多对山药中尿囊素采用 HPLC法和薄层扫描法进行含量测定 ,但分离度较差，本文建立的尿囊素含量测定方法，分离效果良好，从而为山药的质量控制提供了可靠的手段。
1仪器、试药和样品
岛津 LC- 10Avp高效液相色谱仪；LC-10ATvp二元泵；岛津 SPD-10Avp紫外-可见检测器；SHIMADZU CLASS-VP 工作站（Version 6.12 SP2）；H66025T超声清洗机（无锡超声电子设备厂）；电子分析天平（METTLER AG245）。
甲醇为色谱纯，水为纯化水；其他试剂均为分析纯。
尿囊素对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：111501-200001）；山药样品采集自河南焦作。
2实验部分
2.1色谱条件：色谱柱：Alltech ODS C18（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇-水（1：39）；流速：0.8mL/min；柱温：30℃；检测波长：224nm。
2.2对照品溶液的制备及线性化范围试验：取尿囊素，精密称定，置10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀作为储备液（0.492mg/mL）。取储备液分别稀释100、50、25、10、5、2倍，吸取10μL，注入液相色谱仪，照上述色谱条件分析，以峰面积积分值 Y为纵坐标，尿囊素含量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=3961.4x+9612.9（r＝0.9998）,表明尿囊素在0.1μg～5μg间线性关系良好。
2.3稳定性试验：精密吸取上述供试品溶液10μL,分别在1h、2h、4h、8h、12h、24h进样，记录峰面积积分值，结果表明尿囊素在24h内基本稳定。RSD=0.7（n=6）。
2.4精密度试验：精密吸取供试品溶液10μL,连续进样5次，记录峰面积积分值，结果表明精密度良好。RSD=0.5（n=5）。
2.5重现性实验：精密称取样品6份，每份0.25g左右，按供试品溶液的制备方法处理后，分别进样10μL,用外标法计算尿囊素含量，RSD=0.9（n=6），表明该法重现性良好。
2.6加样回收率试验：取已知含量的山药粉末（80目，50℃干燥3h），精密称定6份置50m L磨口锥形瓶中，每份0.25g,各精密加入约1mL尿囊素对照品溶液，其余照供试品制备方法操作，作为加样回收供试品溶液，用外标法测定，计算结果尿囊素的平均回收率为100.4%，RSD%=0.6 （n=6）。
2.7供试品溶液的制备及含量测定：取山药样品（ 80目，50℃干燥3h），精密称定0.5 g,精密加入20％乙醇25mL，超声两次，每次20min，离心，取上清液过0.45μm微孔滤膜，作为供试品溶液。分别进样10μL,用外标两点法法计算山药中尿囊素的含量，测定结果见表 1。
3讨论
3.1样品提取方法曾用50%乙醇回流、20%乙醇回流、甲醇超声、水超声提取进行比较，结果采用20%乙醇超声提取比较完全。进样前供试品溶液经高速离心、微孔滤膜滤过可以去除糖类、蛋白质等杂质干扰，有利于色谱峰分离。
3.2流动相的选择以甲醇-氯仿-水（0.5：0.012：100）、甲醇-水（1：9）、甲醇-水（4：1）、甲醇-水（1：39）来进行考察，结果后者系统分离较好，色谱重现性好。
3.3山药作为常用中药材，尿囊素是山药中的活性成分之一，该方法分离效果良好，方法简便，可为山药药材的质量控制提供参考。
3.4山药麸炒后尿囊素的含量变化不大。
参考文献
[1]白雁,朱凤云,王东,陈志红,袁子民等. HPLC法测定不同产地山药中尿囊素的含量，中草药；2003，34（2）：179.
[2]梁蔚阳. 高效液相色谱法测定中新滴眼液中尿囊素与维生素Ｂ6的含量，中国生化药物杂志；2002，23（3）：146.
[3]郝丽晓，窦爱兰，钟化人.用ＨＰＬＣ法测定皮尔复溶液中尿囊素与甲硝唑含量，山西医科大学学；2000,31（1）41.
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
