【www.zhangdahai.com--领导讲话稿】
摘 要：目的：探讨虎杖苷（PD）对烫伤大鼠胃肠粘膜的保护作用及与抗缩血管物质的关系。方法：88只Wister大鼠随机分为正常对照组、烫伤对照组和烫伤治疗组，应用放射免疫法及分光光度法分别测定不同组别及烫伤后不同时间血浆NPY与DAO含量。结果：PD可使烫伤大鼠应激性胃肠黏膜损伤过程中升高的血浆NPY与DAO含量降低。结论：虎杖苷对烫伤大鼠胃肠粘膜屏障具有保护作用，其作用机制可能与PD的抗缩血管物质有关。�
关键词：虎杖苷；胃肠粘膜损伤；NPY；DAO�
中图分类号：R285.6文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）07-023-02��
虎杖苷（�Polydatin�，PD）是从蓼科蓼属-虎杖的干燥根茎中提取的第四种单体，故又名虎杖结晶4号，也可称为白藜芦醇苷。中国传统医学认为虎杖能治疗烧伤，现代药理证明虎杖苷有多种生物活性［1］，但对烧伤所致的胃肠黏膜应激性损伤的影响未见报道。神经肽Y（�N europeptide� Y，NPY）主要分布于中枢神经系统和周围神经系统中，胃肠道也有NPY神经分布。NPY具有广泛的生理功能，作为一种血管收缩物质，可调节器官血流量［2，3］。烧伤、创伤患者早期会发生胃肠道血液供应减少，即使得到了及时充足的液体补充，也不能及时纠正胃肠道缺血，也就是胃肠道发生隐性休克。大鼠烫伤后血浆NPY升高，而这可能是造成肠道隐性休克的因素之一［4］。二胺氧化酶（�Diamine oxidase�，DAO）绝大部分存在于小肠粘膜上皮细胞中，在烧伤、创伤等病理条件下，肠粘膜受损，血浆中DAO显著增高，是反映小肠粘膜较为理想的指标［5］。严重烧伤造成肠粘膜缺血损伤，通透性增加，肠道细菌及内毒素移位，最终导致全身炎症反应综合症和多脏器功能障碍综合症，死亡率提高，目前尚无实用的临床特效治疗方法。因此，保护肠粘膜，从源头上防止肠道细菌移位引发的感染及毒血症，从而减轻全身炎症反应，减少死亡率，具有重要的临床意义及现实意义。本研究通过观察虎杖苷对烫伤大鼠血浆NPY与DAO的影响，从而探讨虎杖苷对烫伤大鼠肠道屏障的保护作用。
1 材料与方法�
1.1 动物分组及模型制作�
健康成年Wister大鼠88只，雌雄不拘，体重225~250g，随机分成正常对照组8只、烫伤对照组40只(3h、6h、12h、24h、72h各8只)、烫伤治疗组40只(3h、6h、12h、24h、72h各8只)。用10%的Na�2S溶液分别将上述88只大鼠背部行脱毛处理，脱毛面积40%，洗净。正常对照组8只脱毛不烫伤。烫伤对照组和烫伤治疗组24h后，用1%的戊巴比妥钠（4mg/100g）腹腔麻醉，蒸汽烫伤完成致伤过程，造成背部8cm×4.5cmⅢ度烫伤，腹腔注射等渗盐水复苏抗休克，分笼喂养，自主进食。伤后3h、6h、12h、24h、72h采血测定NPY与DAO。�
1.2 药品�
PD由西安冠宇生物技术有限公司生产，虎杖苷含量为99.12%，临用前用生理盐水配制。�
1.3 给药方法�
烫伤对照组创面用20%磺胺嘧啶银糊剂敷贴；烫伤治疗组烫伤后立即灌入虎杖苷，创面也用虎杖苷敷贴。
�
1.4 样品的采集和制样方法�
NPY测定：采用北京解放军总医院东亚免疫研究所提供的试剂盒，取全血2.0mL，注入含10%EDTA-Na�230ul的试管中，4℃2500g离心10min，分离血浆，-20℃保存，标本收齐后统一检测，测定采用非平衡法，具体操作按说明书执行，用SN-697全自动双探头放射免疫计数器计数。�
血浆DAO测定：取全血2.0mL，注入含10%EDTA-Na�230ul的试管中，4℃2500g离心10min，分离血浆，�-20℃保存，标本收齐后统一按Wollin等介绍的方法进行检测，向0.5mL血浆中依次加入3.0mL 0.2M磷酸缓冲液（pH7.2）、0.1mL（4μg）辣根过氧化酶溶液、0.1mL（500μg）0-二回香胺、0.1mL（175μg）二盐酸尸胺。37℃水浴中孵育30min，在436nm波长下测OD值，从以二胺氧化酶为标准制作的曲线上查出DAO的量。�
1.5 统计学处理�
数据以�±s表示，采用t�检验。�
2 结果�
2.1 NPY水平�
烫伤对照组3h、6h、12h NPY高于正常对照组，差异有显著性（�p�＜0.01）。烫伤治疗组6h、12h比烫伤对照组低，差异有显著性（�p�＜0.01）。而且烫伤治疗组恢复至正常的时间也比烫伤对照组短（见表1）。�
2.2 血浆DAO水平�
烫伤对照组3h、6h、12h DAO高于正常对照组和烫伤治疗组，差异也有显著性（�p�＜0.01）。而烫伤治疗组只是略高于正常对照组，无统计学差异，而且烫伤治疗组恢复至正常的时间也比烫伤对照组短。烫伤对照组，72h又有增高现象。见表1。�
3 讨论�
笔者观察到烫伤治疗组大鼠应用虎杖苷治疗后血浆NPY和DAO水平均比没有用虎杖苷的烫伤对照组大鼠要低很多，而比正常对照组的大鼠稍高，说明虎杖苷能够防止烫伤大鼠血浆NPY和DAO的升高。邵立健等人［6］研究提示烫伤大鼠早期肠粘膜的损伤不是由于炎症介质的作用所致，而主要是由于肠道血液供应减少引起的。Han等人［7］应用游离的肠血管研究NPY与肠血管的收缩关系，结果表明刺激交感神经所引起的血管收缩30%是由NPY介导的，这种收缩作用可被NPY Y1受体拮抗剂所阻断，应用放射免疫法测得在刺激频率为16Hz时NPY含量最高，此时血管也发生强烈收缩，这表明NPY对肠血流的调节发挥重要作用。彭曦等人［8］用激光多普勒血流仪测定了烧伤后3h、6h、12h和24h肠粘膜血流量都低于正常，以伤后12h粘膜血流量降低最为显著。邵立健等人［3］研究证实大鼠烫伤后血浆NPY的变化趋势与前者测的烧伤后肠粘膜血流量的变化趋势一致。并进而推测烫伤作为一种应激，交感神经兴奋，引起NPY释放，血浆NPY升高，肠血管收缩，血流量下降，肠粘膜屏障功能障碍，造成烫伤后肠道缺血缺氧性损伤。我们的结果表明虎杖苷能够很好地对抗烫伤后血浆NPY的升高，其机理可能是虎杖苷保护创面、降低了应激性，以及作用于肠道抑制了肠道交感神经的缘故。�
二胺氧化酶（DAO）是具有高度活性的细胞内酶，存在于哺乳动物小肠粘膜绒毛上层，其它组织和细胞中含量极少，其活性与绒毛高度和粘膜细胞的核酸和蛋白质合成密切相关，是反映小肠粘膜结构和功能较理想的指标。肠粘膜细胞缺血受损后，肠粘膜细胞内DAO释放入血，致血清DAO升高，测定血清DAO活性可反映肠粘膜的缺血程度，对研究创（烧）伤后小肠粘膜结构和功能损伤可能导致肠源性感染有指导意义［9］。�
虎杖是传统的治疗烧烫伤的药物。虎杖能抗杀病原微生物，防止感染，而且具活血化瘀，止痛收敛的功效，对烧伤具有明显的消炎、收敛、防腐的特点［9］。现代科学近一步证实虎杖中的虎杖苷确能防止血管内皮细胞受损、维持血管壁的完整性、减轻血浆外渗、防止肠粘膜损伤［10，11］，这也可能是降低DAO的原因。综上所述，虎杖苷既能保护创面，也能减少胃肠应激性，能够降低烫伤大鼠血浆NPY与DAO，所以对烫伤大鼠肠粘膜屏障具有明显的保护作用。�
实验中还观察到烫伤对照组DAO的值在3h和72h呈双峰性升高，可能为烫伤肠缺血再灌注时肠道屏障功能有损伤。而烫伤治疗组DAO的值上述现象不明显，说明虎杖苷也能够缓解烫伤后肠缺血再灌注时肠道屏障功能的损伤，其机理有待进一步研究。�
参考文献：�
［1］ 杨溪琳.虎杖的临床应用探析［J］.云南中医中药，2007，28（10）：48~49.�
［2］ Spangeus A，Suhr O，El-Salhy M.Diabetie state affects the innervation of gut in an animal of human type 1 diabetes ［J］.Histol Histopathol，2000，15(3)：739~744.�
［3］ 林雪群，邵力健，程上穆，等.大鼠椎动脉基底动脉系脑血管神经肽Y能神经与星状神经节的关系［J］.神经解剖学，2001，17（3）：257~260.
［4］ 邵力健，朱清仙，何明，等.大鼠烫伤后血浆NPY与DAO含量变化的研究［J］.中国烧伤创疡，2004，16（1）：1.�
［5］ Bragg LE，Thompson Js，West W W.Intestinal diamine oxidase levels reflect ischemic injury ［J］.J Surg Res.1991，50(3)：228~233.�
［6］邵力健，朱清仙，等.大鼠烫伤后肠壁微血管通透性和肠组织含水量的变化［J］.中国烧伤创疡，2005，17（2）：94~96.�
［7］ HanSP，YangCL，Chen X，etal.Directevidence for the roll of neuropeptide Y in sympathetic nerve stimulation induced vasoconstriction ［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，1998，274 (1)：290~294.�
［8］ 彭曦，汪仕良，冯晋斌，等.早期肠道营养改善烧伤后大鼠肠血液灌流的实验研究 ［J］.中华外科，1999，37(8)：507~509.�
［9］ 黎君友，孙世荣，薛立波，等.烧伤后二胺氧化酶活性的变化［J］.中华整形烧伤外科，1997，13(1)：40~41.�
［10］ 伍晓春，陆豫.虎杖的药理作用及临床应用研究进展［J］.中医药信息，2005，22（2）：23.�
［11］ 谢忠琳，金丽娟，王静珍.虎杖甙对兔肠缺血-再灌注损伤的保护作用［J］.中国危重病急救医学，1997，9（3）：136~138.�
（责任编辑：姜付平）
