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[摘要] 目的:制备法莫替丁注射液,建立其质量控制方法,并考察其稳定性和安全性。方法:优化处方组成与制备工艺,并进行性状、鉴别、检查等质量研究,采用高效液相色谱法测定有关物质和含量,影响因素试验、加速试验和长期试验考察其稳定性,血管刺激性试验、溶血性试验以及过敏性试验评价其用药的安全性。结果:样品经酸、碱、氧化、热、光照破坏后所产生的杂质峰均能与主峰有效分离,最低检测限为1.0 ng。法莫替丁在80.32～120.48 μg/ml的浓度范围内与峰面积成良好的线性关系,平均回收率为99.76%,RSD为0.73%。恒温加速试验6个月和长期留样试验12个月,其性状、pH值、有关物质、可见异物、含量等均未见明显改变。结论:该制剂处方合理,制备工艺简便可行,质量可控,稳定性良好,用药安全。
[关键词] 法莫替丁注射液;制备;质量控制;稳定性;安全性
[中图分类号] R943 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2010)06(c)-005-04
The study of Famotidine Injection
DENG Qiaojun1, LI Jianhe2*, CAO Junhua2
(1.Department of Pharmacy,The Eighth Hospital of Changsha, Hunan Province, Changsha 410100,China;2.Department of Pharmacy,The Second XiangYa Hospital,Central South University, Hunan Province, Changsha 410011,China)
[Abstract] Objective: To prepare famotidine injection,establish its quality control and determine its stability and safety.Methods: Some work was done to optimize the prescription and preparation technology. The character, identification and examination et al were tested.The content and the related materials of famotidine injection were determined by HPLC.Stress testing, accelerated testing and long-term testing were done to study its stability. The safety was evaluated by testing the vessel stimulation, haemolyticus and hypersensitivity.Results:The method had an effective separation of the main component from impurities which produced after a series of destruction test,such as acid, alkalization,oxidation,light and thermal destruction.The detective limit was 1.0 ng. The linear relation of famotidine was excellent within the range of 80.32-120.48 μg/ml, and the average recovery rate was 99.76% with RSD was 0.73%. No obvious changes were observed at 6 month of an accelerated test or 12 month of long-term storage test. Conclusion: The preparation is reasonable in formulation, simple and convenient in preparation technique, accurate in quality control, good in stablility, and safe in application.
[Key words] Famotidine injection; Preparation; Quality control; Stability; Safety
法莫替丁为哌基噻唑类的H2受体拮抗剂,具有对H2受体亲和力高的特点,对胃酸分泌具有明显的抑制作用,对基础分泌及因给予各种刺激而引起的胃酸及胃蛋白酶增加有抑制作用。临床上用于治疗消化性溃疡所致上消化道出血,除肿瘤及食管、胃底静脉曲张以外的各种原因所致的胃及十二指肠黏膜糜烂出血者[1-4]。现将法莫替丁注射液的制备、质量控制、稳定性、安全性研究的结果报道如下:
1 一般资料
日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪;SPD-10Avp紫外检测器;分析之星色谱工作站;上海精密科学仪器有限公司FA1004N型电子分析天平;上海雷磁仪器厂pHS-3C型精密酸度计;天津大学精密仪器厂GWJ-3智能微粒检测仪;天津大学精密仪器厂YB-Z型澄明度检测仪;杭州高得医疗器械有限公司全封闭式HTY-2000型集菌仪;杭州高得医疗器械有限公司KSF集菌培养器;广东医疗器械厂生化培养箱。
法莫替丁注射液由中南大学湘雅二医院药学部和衡阳恒生制药有限公司研制提供,样品批号为:20090810、20090905、20090906、20090907,规格:2 ml:20 mg;法莫替丁对照品:由中国药品生物制品检定所提供,含量为99.9%;法莫替丁注射液市售对比品:上海信谊金朱药业有限公司生产提供,商品名:信法丁,批号:090701,规格:2 ml:20 mg。乙腈和甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 处方工艺优化
在确定本研制的法莫替丁注射液规格为2 ml:20 mg的基础上,对本品的处方工艺进行优化。
2.1.1 考察活性炭对法莫替丁的吸附
称取法莫替丁25.0 g和门冬氨酸10.0 g,加注射用水(60～80℃)使之溶解,调pH值至5.5,补加注射用水,均分成5份,分别加入0、0.03%、0.05%、0.10%、0.20%药用炭,封口。煮沸15 min后,抽滤,精滤,灌封,115℃热压灭菌30 min即得。以活性炭对法莫替丁的吸附以及对制剂热原检查等为指标进行考察。结果表明,加入配液总量0.05%的药用炭,加热煮沸15 min最佳。
2.1.2 灭菌条件的选择
称取法莫替丁25.0 g和门冬氨酸10.0 g,加注射用水(60～80℃)使之溶解,调pH值至5.5,然后按配制总量加入0.05%药用炭即1.25 g,加热煮沸15 min,抽滤,加注射用水至2 500 ml,精滤,灌封;取其中50支不灭菌,剩余的样品等分成3份,其中一份于121℃热压灭菌20 min,一份于115℃热压灭菌30 min,一份于100℃流通蒸汽灭菌45 min,即得。结果表明热压灭菌115℃,30 min最佳。
2.1.3 确定药液pH值范围
称取法莫替丁10.0 g和门冬氨酸4.0 g,各5份,分别加入注射用水(60～80℃)约900 ml中,搅拌使溶,调节药液pH值至4.0、4.5、5.0、5.5、6.0,加入0.05%药用炭,煮沸15 min,抽滤脱炭,加注射用水至1 000 ml,检查合格后,精滤,灌封于2 ml安瓿中,115℃热压灭菌30 min,即得。结果表明本品pH值范围制订为4.5～6.0,生产中一般控制pH值在5.5左右。
2.1.4 最佳处方与工艺
法莫替丁10.0 g,门冬氨酸4.0 g,1 mol/L盐酸或氢氧化钠溶液适量调pH值至5.5,注射用水加至1 000 ml。最佳工艺为:按上述处方量称取法莫替丁10.0 g和门冬氨酸4.0 g,加入热注射用水(60～80℃)约900 ml中,不断搅拌使溶后,用1 mol/L盐酸或氢氧化钠溶液适量调pH值至5.5,然后按配制总量加入0.05%药用炭即0.5g,加热煮沸15 min,趁热抽滤脱炭,补加注射用水至1 000 ml,取样测定药液pH值和含量,合格后,精滤,灌封于2 ml安瓿中,115℃热压灭菌30 min,检查澄明度合格后,印字,包装即得。
2.2 质量控制
本品为法莫替丁的灭菌水溶液,含法莫替丁(C8H15N7O2S3)应为标示量的90.0%～110.0%。
2.2.1 性状
本品为无色至微黄色的澄明液体。
2.2.2 鉴别
在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
2.2.3 检查
2.2.3.1 颜色 取本品,依法检查(中国药典2005年版二部附录IX A第一法),与黄色3号标准比色液比较,不得更深。
2.2.3.2 pH值 应为4.5～6.0(中国药典2005年版二部附录Ⅵ H)。
2.2.3.3 有关物质照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验。色谱柱:Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:庚烷磺酸钠溶液(取庚烷磺酸钠2.0 g,加水900 ml溶解后,用冰醋酸调节pH为3.9,加水至1 000 ml)-乙腈-甲醇(25∶6∶1);检测波长:254 nm,流速:1.0 ml/min;进样量:20 μl。理论板数按法莫替丁峰计算不低于1 400。
溶液的制备。①空白辅料溶液的制备:按处方配制成100 ml不含法莫替丁的空白辅料溶液,备用。精密量取上述溶液2 ml,置50 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀;再从中精密量取5 ml于20 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为空白溶液,备用。②供试品溶液的制备:精密量取本品2 ml,置50 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀;再从中精密量取5 ml于20 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液,备用。③对照溶液的制备:精密量取上述供试品溶液2 ml,置100 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液,备用。
空白辅料的干扰性试验。在上述色谱条件下,取上述空白辅料溶液20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,结果表明空白辅料对检测无干扰。
最低检测限。精密量取上述供试品溶液适量,加流动相逐级稀释测定,当S/N≈3时,样品浓度为0.05 μg/ml,进样20 μl,最低检测限为1.0 ng。
破坏性试验色谱图,见图1。
结果表明,在上述色谱条件下,样品经酸、碱、氧化、热、光照破坏后所产生的杂质峰均能与主峰有效分离,说明本方法专属性较强。
有关物质检测。取批号为:20090905、20090906、20090907的3批法莫替丁注射液样品和市售对比品的有关物质检查,结果分别为1.13%、1.11%、1.25%和1.74%,均在2.0%范围内。
热原。取本品2 ml,加入0.9% NaCl溶液100 ml中稀释后,依法检查(中国药典2005年版二部附录Ⅺ D),剂量按家兔体重每1 千克缓缓注射稀释液10 ml,应符合规定。
其他:应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版二部附录I B)。
2.3 含量测定
2.3.1 色谱条件与系统适用性试验
同有关物质项下的色谱条件与系统适用性试验,空白样品溶液、法莫替丁对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图2,辅料对测定无干扰。
2.3.2 线性试验
精密称取经五氧化二磷80℃减压干燥4 h的法莫替丁对照品适量(实际称重0.050 2 g),置50 ml量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取4.0、4.5、5.0、5.5、6.0 ml,分别置于50 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。取上述溶液进样20 ml,记录色谱图。以浓度C(μg/ml)为横坐标,主峰面积A为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为:A=12 138.98C+4 098.00,r=0.999 6。结果表明法莫替丁在80.32～120.48 μg/ml的浓度范围内与峰面积成良好的线性关系。
2.3.3 稳定性试验
取上述线性试验项下浓度为100.4 μg/ml的溶液,分别于0、3、6、9、12 h进样20 ml,记录色谱图,测定其峰面积值,结果待测溶液在室温下放置12 h内,其主峰面积A值平均为1 216 238.0,RSD为0.58%。溶液基本稳定。
2.3.4 回收率试验
精密称取经五氧化二磷80℃减压干燥4 h的法莫替丁原料药约80、100、120 mg各3份,置10 ml量瓶中,分别用不含法莫替丁的处方量空白辅料溶液溶解稀释至刻度,然后从中精密量取上述溶液2 ml,置50 ml量瓶中,加甲醇5 ml,并用流动相稀释至刻度,摇匀。然后再从中精密量取5.0 ml,置20 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得浓度约为80.0、100.0、120.0 μg/ml的溶液各3份,分别进样20 ml,记录色谱图。另精密称取经五氧化二磷80℃减压干燥4 h的法莫替丁对照品适量(约50 mg),置50 ml量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,摇匀,然后再从中精密量取5.0 ml,置于50 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得浓度约为100.0 μg/ml的对照品溶液,同法测定。根据加入量及测得量,计算回收率。结果本品的平均回收率为99.76%,RSD为0.73%,本方法的回收率良好。
2.3.5 精密度试验
取上述回收率试验项下浓度约为100.0 μg/ml的对照品溶液,进样20 ml,连续6次,记录色谱图。结果其主峰面积A值平均为1 211 972.7,RSD为0.33%。本方法精密度良好。
2.3.6 样品含量测定
取批号为20090905、20090906、20090907的法莫替丁注射液和市售对比品进行含量测定,标示百分含量分别为100.3%、101.3%、99.8%、100.8%,均在90.0%～110.0%的合格范围内。
2.3.7 重现性试验
取同一批样品(批号为:20090906),照“样品含量测定”项下方法稀释制成浓度为100 μg/ml的供试品溶液,然后按上述样品含量测定方法测定,结果法莫替丁注射液中法莫替丁的平均标示百分含量为100.24%,RSD为0.64%。该法的重现性良好。
2.4 稳定性考察
2.4.1 影响因素试验
对按照上述最佳处方工艺生产的批号为:20090810的法莫替丁注射液置高温[(60±2)℃]、低温(0～5℃)以及光照(4 500±500) Lx条件下,分别于0、5、10 d定期取样,然后进行质量检测,并与0 d的数据进行比较分析。结果法莫替丁注射液在上述高温、低温及光照条件下5、10 d的性状、pH值、有关物质、可见异物及含量与0 d比较均基本上无明显变化,示其在上述试验条件下较为稳定。这些进一步证明本处方及工艺基本合理、可行。
2.4.2 恒温加速试验
取模拟上市包装批号为20090905、20090906、20090907的法莫替丁注射液3批,放入温度(40±2)℃、相对湿度(75±5)%的生化培养箱中,分别于0、1、2、3、6个月定期取样,然后进行质量检测,并与0个月的数据进行比较分析。结果表明本品在本包装的加速试验条件下放置6个月较为稳定。
2.4.3 长期留样试验
取模拟上市包装批号为20090905、20090906、20090907法莫替丁注射液3批,在温度(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置12个月,分别于0、3、6、9、12个月定期取样,然后进行质量检测,并与0个月的数据进行比较分析。12个月后仍须继续考察,检测结果与0个月比较。结果:本品暂定有效期为1年,贮藏条件为:遮光、密闭保存。
2.5 安全性试验
对法莫替丁注射液进行了全身过敏性、溶血性及血管刺激性试验,结果:法莫替丁注射液未使红细胞产生溶血或凝集等反应,溶血试验为阴性。在血管刺激性试验中,选用家兔耳缘静脉注射法莫替丁注射液,每天1次,连续3 d,末次注射后24 h及7 d,肉眼观察注射部位的血管及周围组织的变化,并进行病理组织学检查,结果法莫替丁注射液给家兔静脉注射均未见明显的刺激性。
3 讨论
活性炭对法莫替丁略有吸附作用,并且随着活性炭用量的增加而加大。当药液pH值低于4.0时,灭菌后其稳定性有所改变,有关物质有所升高,含量有所下降,这可能是法莫替丁中的酰胺在酸性条件容易水解造成的。
《中国药典》2005年版二部收载的法莫替丁原料药中的有关物质采用薄层色谱法进行测定,制剂中的有关物质未进行控制[5],为确保用药安全有效,参考相关文献资料[6-13],采用高效液相色谱法对法莫替丁注射液中的有关物质和含量进行研究考查。法莫替丁注射液3批样品和市售对比品的有关物质均在2%内。本制剂中杂质的来源主要为原料中带入、生产配制过程中带入及降解产物。目前美国、英国、日本、中国的药典均对法莫替丁原料中有关物质的检测做了规定,我国药典中规定有关物质的限量为
