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【摘要】利用免疫组化和血清药理学等实验方法,对颤复宁治疗帕金森病的机理进行系统研究,得出结论:颤复宁对帕金森病大鼠模型有一定的治疗作用,颤复宁血清保护组可维持较高的细胞存活率,其保护作用有明显的剂量依赖效应。
【关键词】帕金森病;中药颤复宁;多巴胺能神经元
帕金森病(Parkinson’s disease,PD)又称震颤麻痹,是影响中老年人身体健康的主要神经退行性疾病,其病因仍然不清。本课题所用“颤复宁”复方中药,应用于临床近20年,取得了良好的治疗效果。本研究用6-羟基多巴(6-OHDA)损伤制作的PD体内和体外模型,利用血清药理学方法,在抗氧化、抗凋亡等方面对颤复宁治疗PD的机理进行了系统研究。旨在为中药颤复宁治疗PD提供实验依据,为PD治疗提供新思路。
1方法
1.1实验方法本研究首先用6-OHDA两点注射右侧纹状体制作单侧PD大鼠模型,注射等剂量的生理盐水的假手术组为对照。实验共分3组,每组6只:对照组、模型组和中药治疗组,对照组和模型组生理盐水灌胃,中药治疗组同时间等剂量中药颤复宁灌胃,连续灌胃30天后,观察阿朴吗啡诱导的行为学改变,及用免疫组化染色检测各组大鼠黑质部位TH阳性神经元数量及纹状体TH阳性纤维密度的改变,分析颤复宁对PD大鼠模型的治疗作用。然后用血清药理学方法制备中药颤复宁大鼠血清和对照大鼠血清用于体外研究。选用Wistar孕大鼠15～16天的胚胎原代中脑黑质神经元为实验材料,100μM6-OHDA作用24小时作为PD的体外模型。观察中药颤复宁大鼠血清对多巴胺神经元的保护作用并探讨其作用机理。本次实验分3组:对照组,即对照鼠血清培养;6-OHDA损伤组,即对照鼠血清+100μM6-OHDA;中药保护组,即中药鼠血清+100μM6-OHDA。用MTT法检测各组细胞的生长活性。TH免疫细胞化学染色检测多巴胺神经元的数量、突起长度、细胞胞体面积。Flou-3-AM对细胞进行荧光染色后,用激光扫描共聚焦显微镜检测各组细胞内Ca��2+�浓度变化并进行图像采集及荧光强度定量分析。生化方法测定各组细胞内GSH和MDA含量的变化。最后用100μM 6-OHDA加入到体外培养的PC12细胞培养液中制作PD的体外型,中药血清制备,分3组,每组6只大鼠。用MTT法测各组细胞的存活率,并用免疫组织化学染色方法和图像分析检测TH的含量及半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)阳性细胞数。
1.2 统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析,各指标均以均数±标准差(x±s)表示,分类资料统计分析采用X2检验, 计量资料采用两样本t检验,P
