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【摘要】 目的 通过检测类风湿关节炎(RA)患者血清中表皮生长因子(EGF)的水平，探讨其在RA发病过程中存在的意义。方法 将研究对象分为RA组和健康对照组，用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两组血清中EGF水平。同时测定RA 患者的类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)。用统计学分析EGF在各组血清中的变化及其与临床各项指标间的相关性。结果 RA组血清EGF水平较正常对照组显著升高(P0.05)。结论 血清EGF水平在RA组明显升高，在骨质破坏组尤为明显。提示EGF在诊断RA中有一定价值，可能部分地参与RA的发病过程。�
【关键词】
关节炎；类风湿；表皮生长因子
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作者单位：266011山东省青岛市市立医院检验科
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表1
加样回收率试验(n=5)
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成分序号样品量/μg加入量/μg测得量/μg回收率/%平均回收率/%RSD/%
酚酞179.773816.28896.6001100.56100.100.26
280.704896.877999.88
379.557995.8786100.03
476.187392.4897100.02
582.675098.9899100.03
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图1
酚酞片中酚酞含量测定的HPLC 色谱图�
A，酚酞对照品及系统适应性、B，酚酞样品、C，空白
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2.9 样品含量测定 取4批样品分别按上述方法制备及色谱条件测定，以标准曲线方程计算含量，并与现行标准测的酚酞含量进行比较，结果见表2。�
3 讨论�
3.1 流动相的选择 参阅相关资料［1�3］，选择甲醇�0.05%磷酸为流动相，通过调整比例和流速进行考察后发现，以甲醇�0.05%磷酸(70�∶�30)流速0.8 ml/min为流动相时，酚酞和荧光母素分离效果好，保留时间、对称因子、塔板数均符合要求。�
表2
酚酞片含量测定结果(标示量的百分含量%)
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批号HPLC(%)UV(%)
10050198.9699.95
100907199.06100.16
10101896.8597.15
091207100.06102.66
3.2 检测波长的选择 采用PDA检测器，采集210~400 nm�3 d图谱，提取酚酞色谱峰处的光谱图，表明其在229nm与275nm波长处有最大吸收，在229nm波长处溶剂的紫外吸收会影响测定，故选择275nm作为检测波长。�
3.3 溶剂的选择 酚酞水溶性较差，可溶于甲醇、乙醇，原标准［4］采用乙醇作为溶剂，荧光母素采用无水乙醇作为溶剂。在使用甲醇作为溶剂时发现，荧光母素溶于甲醇后不稳定，放置一段时间，即出现絮凝，改用乙醇，即无该现象。综合考虑，在配置对照品贮备液时用乙醇作为溶剂，在二步稀释时采用流动相作为溶剂，样品采用乙醇超声10 min即可溶解。�
参 考 文 献�
［1］ 吴红英.高效液相色谱法测定酚酞片中酚酞含量研究.山西医药杂志，2010，39(2)：161�162.�
［2］ 王玫，曹霞.HPLC法测定酚酞片的含量探讨.黑龙江医药，2009，22(3)：260�261.�
［3］ 梁选革，伍国怡.高效液相色谱法测定酚酞溶液与酚酞片中荧光母素含量.医药导报，2006，25(11)：1210�1211.�
［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京：化学工业出版社，2010：882.
Clinical significance of detecting serum epidermal growth factor Level in patients with rheumatoid arthritis
ZHANG Bin�guo,LUAN Qing�xin.Department of Clinical Laboratory,Qingdao Muniapal Hospital,Qingdao 266011,China
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【Abstract】 Objective
To detect the serum levels of epidermal growth factor(EGF)in rheumatoid arthritis(RA)patients，and explore the possible role of EGF in RA. Methods All the cases were individed into two groups: RA patients group and healthy control group. The serum level of EGF was measured by enzyme�linked immunosorbent assay(ELISA).Rheumatoid factor(RF)，erythrocyte sedimentation rate(ESR)and C�creative protein(CRP)were also measured in these RA patients. The relation beween the serum level changes of EGF and the corresponding clinical indexes in the two groups was statistically analyzed. Results Compared with the healthy individuals，the serum EGF levels of RA patients increased significantly (P0.05). Conclusion The evident increase of serum EGF level in RA patients，especially in bone erosion patients，suggests that EGF has some value in the diagnosis of RA and may partly play a role in the pathogenesis of RA.�
【Key words】
Arthritis；Rheumatoid；Epidermal growth factor
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类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是常见的自身免疫性疾病之一，可累及多器官系统，主要侵犯关节滑膜，表现为滑膜组织的异常增生，大量炎性细胞浸润及软骨与骨的进行性破坏。研究表明表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)具有刺激多种组织和细胞分裂、增殖和分化的作用［1］。多种细胞因子参与了RA 的发病与演变，Koichiro等［2］报告RA 患者滑膜液中EGF升高。本实验通过检测RA 患者与正常人血清中EGF水平的变化，探讨EGF在诊断RA中的意义及其在RA发病过程中可能起到的作用。�
1 资料与方法�
1.1 一般资料
选择2010年1月至6月在我院住院的初治RA患者36例，所有患者均符合1987 年美国风湿病学会(ACR)修订的RA分类标准、既往未服用过激素或改善病情药物。其中男5例，女31例。年龄24~59岁，平均(49.49±8.01)岁。依照患者双手X线的检查结果将RA患者分为单纯骨质疏松组(Ⅰ~Ⅱ级)和骨质破坏组(Ⅲ~Ⅳ级)：单纯骨质疏松组平均病程为(5.86±1.35)个月；骨质破坏组平均病程为(10.67±3.58)个月。20例正常健康对照者均来自我院体检中心健康体检者，其中男4例，女16例。年龄20～64岁，平均(51.46±13.24)岁。各组在年龄、性别等方面均无统计学差异。�
1.2 方法
抽取清晨空腹静脉血3 ml，离心后取上清液，置于PC管中�20℃保存，同批次检测。血清EGF水平测定采用双抗体夹心ELISA 法，试剂盒由美国Rapid Bio Lab公司提供，严格按照试剂盒说明书的程序进行操作。全自动酶免分析仪(瑞士Hamilton公司 MicroLab STAR IVD ELISA型�8通道)450 nm处测OD值，绘制标准曲线，计算EGF浓度值。分别采用免疫比浊法、琼脂扩散法、魏氏法检测类风湿因子(RF)，C反应蛋白(CRP)，红细胞沉降率(ESR)。异常值判定均参考同期该项检查的正常值。并收集整理患者其他临床资料做对比。�
1.3 统计学方法
计量资料数据结果用均数±标准差(x±s)表示，组间差异采用两样本均数比较t检验；两变量间的相关关系采用Pearso直线相关分析。所有统计分析用SPSS 13.0软件进行处理，以P0.05；r =0.25，P>0.05；r =0.26，P>0.05)。�
3 讨论�
类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，简写RA)又称类风湿，是一种常见病、多发病,目前公认是一种自身免疫性疾病。可能与内分泌、营养、地理、职业、心理和社会环境的差异、细菌和病毒感染及遗传因素等方面有关系。各种细胞因子和趋化因子在RA的发病过程中发挥着重要作用。�
目前对于RA的研究主要集中于滑膜细胞的类肿瘤性研究。人们注意到RA 滑膜中存在过量的细胞因子、受体和与其有同源性的癌基因产物, 它们可能作用于滑膜细胞信号传导途径的不同部位, 导致持续的信号传导, 从而引起RA 滑膜细胞的无限制增生［3］。该病好发于手、腕、足等小关节，以手的近端指间关节、腕关节、足的庶趾关节最为常见，反复发作，呈对称分布。早期有关节红肿热痛和功能障碍，晚期关节可出现不同程度的僵硬畸形，并伴有骨和骨骼肌的萎缩，极易致残。从病理改变的角度来看，类风湿性关节种主要累及关节滑膜(以后可波及到关节软骨、骨组织、关节韧带和肌键)，其次为浆膜、心、肺及眼等结缔组织的广泛性炎症性疾病。�
表皮生长因子(EGF) 由53个氨基酸组成, 相对分子质量为6054u，是1959年在神经生长因子研究过程偶然被发现的。它具广泛生物学效应，是强有力的促细胞分裂因子, 能加速蛋白质、DNA和RNA的合成, 能刺激体内或体外培养的多种组织和细胞的分裂、增生、分化［1］。因其具有强有力的促细胞分裂、增殖及分化作用，近年成为肿瘤及创伤愈合等研
