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【摘要】目的观察石杉碱甲对VD小鼠海马神经细胞钙稳态的影响。方法制备VD动物模型，并设立假手术组作，选用石杉碱甲为治疗组。进行学习、记忆成绩测试，在LSCM下观察海马神经细胞静息态［Ca2+］i及其在去极化时的动态变化。结果模型组的学习和记忆成绩低于假手术组及治疗组；而模型组静息态［Ca2+］i显著高于假手术组、治疗组，并且海马神经细胞［Ca2+］i升高幅度明显降低，恢复时间明显延长。结论VD小鼠海马神经细胞钙稳态变化参与了其发病机制，石杉碱甲可改善海马神经细胞钙稳态变化。
【关键词】血管性痴呆；海马；钙稳态；石杉碱甲
作者单位：272111济宁市第一人民医院神经内科随着高龄人口和脑卒中存活率的增高，血管性痴呆(VD)的发病愈来愈多。由于生理浓度的钙离子作为神经细胞内第二信使，参与了学习和记忆过程；因此，神经细胞［Ca2+］i研究一直倍受人们关注。
1材料与方法
1.1动物模型制备与分组实验动物选用2月龄雄性昆明小鼠。采用双侧颈总动脉结扎再灌注的方式制备VD模型；假手术组仅暴露双侧颈总动脉；治疗组先制备模型，术后第2天给予石杉碱甲0.05 μg/g/d 30 d。
1.2学习、记忆成绩测试跳台试验装置为被动回避反应箱，术后第29天测试学习成绩，记录动物反应时间、错误次数；24 h后测试记忆成绩(潜伏时间及错误次数)。
1.3LSCM下观察神经细胞静息态［Ca2+］i及其去极化兴奋时的钙震荡将小鼠断头处死，在低温下分离出海马组织，制备海马活细胞。滴加荧光探针Fluo�3(浓度1000 mM)1 μl，在Bio�Rad MRC�1024型LSCM下，对锥体细胞进行激光扫描观察，数据为细胞内荧光像素的相对值；观察静息态［Ca2+］i后，加入20 μl 50 mmol/L氯化钾溶液，观察神经细胞的钙震荡变化，记录其［Ca2+］i的上升时间、下降时间以及升高的峰值和幅度。
1.4数据分析采用单因素方差分析，运用SAS软件进行处理，并采用SNK法进行3组之间的两两比较。
2结果
2.1跳台试验表1可见，模型组的学习成绩和记忆成绩均劣于假手术组，治疗组的学习成绩和记忆成绩均优于模型组。
2.2海马神经细胞钙稳态变化表2可见，模型组静息态［Ca2+］i显著高于假手术组、治疗组，并且去极化后海马神经细胞［Ca2+］i升高幅度明显降低，恢复时间明显延长。
表1各组小鼠学习和记忆成绩比较
组别学习成绩记忆成绩反应时间(sec)错误次数潜伏时间(sec)错误次数假手术组(n=23)30.95±18.181.17±1.20138.09±39.520.89±0.96模型组(n=16)112.65±20.62*4.17±2.66*33.02±27.55*3.61±3.18*治疗组(n=22)35.72±16.24△1.28±1.32△133.76±48.07△0.94±1.06△*P
