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摘要：目的：观察肝龙胶囊对豚鼠离体回肠收缩活动和对小鼠小肠推进运动的影响。方法：BL-420E+生物机能系统记录肝龙胶囊对豚鼠离体回肠收缩活动的影响；碳末推进法观察肝龙胶囊对小鼠小肠推进运动的影响。结果：肝龙胶囊能明显促进豚鼠离体肠肌和小鼠在体肠肌收缩运动，与N·S组比较具有显著性差异（P<0.05）。结论：肝龙胶囊体内外均能促进肠肌收缩，可能与其激动了H1受体、M胆碱受体和促进Ca+通道开放有关。
关键词：肝龙胶囊；小肠推进率；离体回肠
中图分类号：R285.5文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2013）01-0064-03
美洲大蠊（Periplaneta americana）为大蠊属蜚蠊目蜚蠊科昆虫，本院对其已进行了多年研究。现代药理报道美洲大蠊具有抗肝炎、抗肿瘤、抗菌、抗艾滋病病毒、增强机体免疫力、消炎镇痛、促进血管增生、组织修复等作用[1～4]。在对肠肌作用方面，有报道表明美洲大蠊提取物中的肽具有很强的控制和调节肌肉收缩的活性[5]，特别是美洲大蠊提取物CⅡ3能够对Ach、His及BaCl2引起的豚鼠离体肠肌痉挛有显著的解痉作用[6]。
肝龙胶囊是从美洲大蠊中提取的一组有效物质，临床上主要用于治疗慢性乙型肝炎，对乙型肝炎有较好的治疗效果，而且毒副作用较小。但关于肝龙胶囊对于离体、在体肠肌收缩的影响，目前尚未见研究报道，所以本实验观察了其对肠肌活动的影响。
1材料与方法
1.1实验试剂及药品乙酰胆碱（Acetylcholine，Ach），sigma公司（批号：00011698）；硫酸阿托品（Atropine），天津药业集团新郑股份有限公司（批号：100925）；组胺（Histamine，His），上海丽珠东风生物技术有限公司（批号：1703）；盐酸苯海拉明（Diphenhydramine），广州明兴制药有限公司（批号：040702）；氯化钡（Barium Chloride，BaCl2）：上海化工专科学校实验工厂（批号：830703）；盐酸维拉帕米（Verapamil）：上海禾丰制药有限公司（批号：100901）；生理盐水（Saline）：昆明南疆制药有限公司（批号：D10120702）；台氏液（1000 mL中含：NaCl：8 g，KCl：0.2 g，MgSO4 ·7H2O：0.26 g，NaH2PO4：0.065 g，NaHCO3：1 g，CaCl2：0.20 g，葡萄糖：1 g）；肝龙胶囊，昆明赛诺制药有限公司（批号：10110901）；碳素墨水，贵州博士化工有限公司（批号D90411）；吗丁啉（Domperidone）：西安扬森制药有限公司（批号：110914490）。
1.2动物普通级健康豚鼠8只，雌雄各半，体重400～500 g，由昆明医学院实验动物中心提供。合格证号：SCXK（滇）2011-0003。昆明种健康小鼠，体重18～20 g，由昆明医学院实验动物中心提供。合格证号：SCXK（滇）2011-0004。
1.3器材HW-400S恒温平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）、BL-420E+生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）、张力换能器、手术器械、1 mL可调式微量移液枪。
1.4实验方法
1.4.1肝龙胶囊对豚鼠离体肠肌收缩活动的影响将健康豚鼠击头处死，迅速剖腹，取距回盲部10 cm处回肠的一段，置于盛有冷台氏液的器皿中，轻轻剥离回肠周围的脂肪组织，冲洗肠管，剪取1.5～2.0 cm长的肠段数节作为标本备用。标本一端穿线并固定于通气板背面的铁钩上，另一端通过蛙心夹连接到张力换能器并与BL-420E+ 生物技能实验系统连接，然后将标本放入恒温平滑肌槽的小槽内，将槽内通20 mL营养液，立即通氧（1～2个气泡/s）。调整肠肌张力为1.0 g，让标本在台氏液中稳定30 min。待自主舒张活动稳定后，描记一段正常曲线，然后加入终浓度为1×10-5 g / mL 的Ach，并描记收缩曲线，作用明 显后，换液3次，待曲线恢复到用药前水平，再描记一段一段曲线；然后加入生理盐水，如上操作加入依次加入2.5×10-5 g/mL、5×10-5 g/mL、7.5×10-5g/mL的肝龙胶囊观察阿托品对肝龙胶囊诱导的肠肌收缩活动的抑制作用。如上操作，分别观察1×10-5 g/mL苯海拉明和1×10-5 g/mL维拉帕米对肝龙胶囊诱导的肠肌收缩活动的抑制作用。
收缩率的计算：收缩率（%）=[（实验组收缩张力-正常组收缩张力）/正常组收缩张力]×100%
1.4.2肝龙胶囊对正常小鼠小肠运动影响取健康昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分成5组：生理盐水组、0.2 % 吗丁啉组、肝龙胶囊高剂量组（75 mg/kg）、中剂量组（50 mg/kg）、低剂量组（25 mg/kg）。各组均按0.2 mL/10 g剂量连续给药4 d。第3天给药后禁食不禁水18 h并于末次给药1 h后，分别给各组小鼠灌胃碳素墨水（0.2 mL/10 g），20 min后脱颈椎处死各小鼠，立即打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于桌面上拉直，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至碳末前沿的距离作为“碳末推进距离”，用下列公式计算碳末推进百分率：
碳末推进百分率（%）=碳末推进距离（cm）/小肠总长度（cm）×100 %
1.4.3统计学处理各组实验数据均以（ ±s ）表示，采用统计软件SPSS 19.0进行组间t检验，P<0.05有统计学意义。
2结果
2.1肝龙胶囊对豚鼠离体肠肌收缩的作用
2.2.1维拉帕米对肝龙胶囊所致肠肌收缩活动的抑制作用与N·S组比较，肝龙胶囊能够显著增强离体肠肌的收缩作用（P<0.05）。加入维拉帕米阻断剂后，肝龙胶囊所致肠肌收缩率显著降低，分别为4.94 %、6.79 %、2.18 %。维拉帕米对肝龙胶囊的收缩作用的抑制率，与BaCl2组比较没有显著性差异（P>0.05），表明维拉帕米对肝龙胶囊所致肠肌收缩活动有显著的抑制作用，即肝龙胶囊促进离体肠肌的收缩作用与开放Ca+ 通道有关。结果见表1。
2.2.2阿托品对肝龙胶囊所致肠肌收缩活动的抑制作用与N·S组比较，肝龙胶囊能够显著增强离体肠肌的收缩作用（P<0.05）。加入阿托品作为阻断剂后，肝龙胶囊所致肠肌收缩率显著降低，分别为141.5 %、258.5 %、466.9 %。阿托品对肝龙胶囊的收缩作用的抑制率，与N·S组比较P<0.05，表明阿托品对肝龙胶囊所致肠肌收缩活动有显著的抑制作用，即肝龙胶囊促进离体肠肌的收缩作用与激动M胆碱受体有关。结果见表2。
2.2.3苯海拉明对肝龙胶囊所致肠肌收缩活动的抑制率
与N·S组比较，肝龙胶囊能够显著增强离体肠肌的收缩作用（P<0.05），加入苯海拉明作为阻断剂后，肝龙胶囊所致肠肌收缩率显著降低，分别为7.00 %、10.76 %、3.15 %。苯海拉明对肝龙胶囊的收缩作用的抑制率，与N·S组比较P<0.05，与His 组比较无显著性差异（P>0.05），表明苯海拉明对肝龙胶囊所致肠肌收缩活动有显著的抑制作用，即肝龙胶囊促进离体肠肌的收缩作用与激动H1受体有关。结果见表3。
3结果讨论
M胆碱受体又称M受体，对毒蕈碱敏感，能与乙酰胆碱结合。主要分布于节后胆碱能神经纤维所支配的效应器细胞膜上，对胃壁细胞、自主神经节、平滑肌和外分泌腺等具有活性。阿托品能松弛许多内脏平滑肌，可抑制胃肠道平滑肌的强烈痉挛，降低蠕动的幅度和频率[12]。
钙离子作为生物细胞的重要信使，参与细胞多种重要功能的调节，包括心脏起搏、心肌细胞核骨骼平滑肌以及血管平滑肌的兴奋-收缩偶联、神经递质释放、腺体分泌及基因表达等。钙离子通道阻滞药对支气管平滑肌松弛作用较为明显，
较大剂量也能松弛胃肠道平滑肌[12]。
H1受体激活产生支气管与胃肠道平滑肌兴奋、毛细血管通透性增加和部分血管扩张效应。苯海拉明为H1受体阻断药，可完全对抗组胺引起的支气管、胃肠道平滑肌的收缩作用[12]。
Ach、His、BaCl2 通过对相应受体的激活来增加胃肠道平滑肌的蠕动。临床上分别用阿托品、苯海拉明及维拉帕米对其促进作用进行阻断。在本实验中，肝龙胶囊能够促进小鼠小肠蠕动，增强小肠的推进作用，且存在一定的剂量依赖性。而且肝龙胶囊还具有促进豚鼠离体回肠收缩的作用，其收缩程度随着其浓度的升高而增强，与N·S组比较均具有明显差异（P<0.05），而且可见苯海拉明、维拉帕米和阿托品对其收缩有明显抑制作用。因此说明肝龙胶囊促进豚鼠离体肠肌的收缩作用可能与其激动H1受体、M胆碱受体及开放Ca+ 通道有关。其确切的作用机制还需进一步研究。
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（收稿日期：2012-10-22）
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