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摘 要 目的 研究复方天麻滴丸中吴茱萸、川芎水提醇沉工艺。方法 采用单因素分析法结合L�9(3�4)正交试验设计优选吴茱萸、川芎水提醇沉工艺参数，确定水蒸气提取挥发油和醇沉的最佳工艺。结果 水蒸气提取挥发油工艺为浸泡0．5h，加10倍量的水提取5h；最佳醇沉工艺为醇沉浓度为80％，所用乙醇浓度为95％，药液浓度为1．5g/mL，醇沉时间为12h。结论 该提取工艺简单、稳定、可行。�
关键词 复方天麻滴丸 正交试验 水提醇沉法��
复方天麻滴丸为我院名老中医邱德文教授长期临床所得经验方，经临床初步观察确定其功用为平肝息风，通络止痛，对偏头痛，眩晕有显著疗效。该方由天麻、吴茱萸等药物组成，其中吴茱萸碱和吴茱萸次碱为该药的主要有效成分，为提高制剂有效成分含量，降低固形物含量，本实验采用正交设计，对其中的醇沉工艺进行研究，为优选复方天麻滴丸生产工艺提供依据。我们在研究吴茱萸、川芎提取工艺时采用水提挥发油－醇沉－醇提，针对这三个工艺步骤，采用了一个单因素优选、两个正交实验，本文报道吴茱萸、川芎水蒸气提取挥发油和醇沉工艺的实验结果。
1 实验材料
1．1 仪器�
美国Agilent1100高效液相色谱仪；KQ3200DE型医用数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)；AUY220电子分析天平（日本岛津公司）。
1．2 试剂与药材�
吴茱萸碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号:110802-200504）吴茱萸次碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号:110801-200505）；吴茱萸、川芎；乙醇（食用酒精）；其余均为分析纯。
2 实验方法与结果
2．1 单因素优选水蒸气提取挥发油工艺
2．1．1 浸泡时间的考察�
称取吴茱萸、川芎药材（粗粉）各30克，共4份，分别置于1000ml烧杯中，加入600 ml（10倍量）水浸泡，记录浸泡后药材湿重，结果见图1。
2．1．2 提取时间的考察
称取吴茱萸、川芎药材（粗粉）各30 g，置于1000 ml圆底烧瓶中，加600 ml（10倍量）水，浸泡30 min，加热回流提取挥发油，每隔1 h记录挥发油体积，结果见图2。
2．1．3 结果：单因素工艺考察结果表明：水蒸气提取挥发油最佳工艺为称取药材粗粉，加10倍量水浸泡0．5 h，加热回流提取挥发油5 h。
2．2 正交实验优选醇沉工艺
2．2．1 正交实验设计〔1〕�
水提醇沉能有效降低固形物含量，去除淀粉、鞣质等杂质，其主要影响因素有：需要达到的乙醇浓度、待精制浓缩药液的浓度即初膏浓度、乙醇用量和所用乙醇浓度，以及药液温度、加醇方式、室内温度、醇沉时间等〔2〕 。�
为了优选最佳醇沉工艺，以醇沉后的沉淀物为指标，检查沉淀是否完全及沉淀物中有无吴茱萸总碱被共沉，选用L9(34)[BFQ]正交表进行试验，因素水平见表1。
2．2．2 正交试验结果��
色谱条件〔3〕 色谱柱：Diamonsil C18（4．6×250 mm，5μm）；流动相：乙腈－水（50∶50）；流速：1 mL/min；检测波长：250 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。�
对照品溶液的制备：精密称取吴茱萸碱对照品、吴茱萸次碱对照品适量，加甲醇分别制成0．1040 mg/mL吴茱萸碱对照品溶液、0．1150 mg/mL吴茱萸次碱对照品溶液。�
供试品溶液的制备：取滤渣粉末（过三号筛）约0．2 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加入乙醇约90 mL，浸泡1 h，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）40分钟，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，滤过（0．45 μm），取续滤液，即得。�
结果：各组实验沉淀物按上述色谱条件进行色谱分析，所得结果显示在吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品相应出峰位置均无峰出现，如图3。�
②直观分析与方差分析
见表2、表3。经方差分析结果可知，因素A（醇沉浓度）有显著性影响（P＜0．05），因素B、C、D无显著性差异（P＞0．05），影响顺序：A＞C＞D＞B，最佳醇沉工艺为：A�3B�3C�2D�3，即醇沉浓度为80％，所用乙醇浓度为95％，药液浓度为1．5 g/mL，醇沉时间为12 h。
2．3 最佳工艺的验证�
按正交实验所优选最佳工艺条件进行了3次重复试验， 三组沉淀物中均未检出吴茱萸总碱成分，沉淀物得滤分别为：11．97％、12．32％、11．67％(RSD＝2．72％)。
3 讨论
3．1 整个实验过程操作务必规范，否则将严重影响实验结果。
3．2 单因素优选水蒸气提取挥发油工艺中，药材浸泡30 min后，随浸泡时间的增加，对药材湿重的影响不显著，结果显示：浸泡30 min即可浸泡透心；通过预实验确定溶剂用量，溶剂用量对挥发油提取量影响不明显，结合实际工业生产，最终确定溶剂用量为药材10倍量水；提取时间考察表明：初时挥发油提取量随提取时间的增加呈上升趋势，5 h后随提取时间的增加，挥发油提取量反而逐渐下降，最终确定挥发油提取时间为5 h。
3．3 醇沉工艺过程中，待药液降至室温，以慢加快搅的加醇方式为宜，加醇速度过快，药液局部与高浓度乙醇接触后，接触面会有部分有效成分伴随其他成分不溶于高浓度乙醇被共沉；在醇沉静置过程中，需使药液密封置于冰箱的冷藏室（0－2 ℃）中，从而有效防止乙醇挥发，保持所需的醇沉浓度。醇沉所得沉淀物表面较为平整，用玻棒插入沉淀物中有阻力感，如用手捻之能感觉到砂粒感，这样的沉淀物较为理想。�
参考文献�
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(收稿日期：2007年4月6日)
