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自1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技术列为正式诊断方法以来,国内外病理同仁在这方面做了大量工作,随着技术的不断完善,冰冻切片已成为病理科的常规工作,这为术中诊断提供了条件。随着人们生活水平的不断提高和医学科学技术的不断发展,人们对健康越来越重视,临床医生和患者常常要求对直径小于0.3 cm的微小组织作出快速诊断,由于组织小,有时难以制片和诊断,影响了此项工作的全面开展。为解决这一问题,在实际工作中,我们不断摸索、改进、完善,总结出了一种较实用的微小组织快速冰冻切片法,现介绍如下。
1材料与方法
1.1材料①微小组织包括纤维胃镜活检标本,肾穿刺标本,脱落细胞沉淀后剩余物等,均为我院门诊及住院部送检。②原西德产Leitz 1720型低温恒冷冰冻切片机。③组织包埋托的改进:找一直径为0.8～1 cm,高约1 cm的圆柱形铜质材料,一端可上螺丝,在机器所配的组织包埋托中央打一小孔,将铜质的圆柱体用螺丝与组织包埋托固定,铜质圆柱体周围缠以3～4圈医用胶布,周围略高于铜质圆柱体。④包埋剂:取适量甲基纤维素,然后加入适量蒸馏水调成糊状,煮沸,放凉,再加入适量麝香草酚,分装于空的超声耦合剂瓶内,贮存于4℃冰箱待用。
1.2方法①开机预冷:提前开机,将低温恒冷切片机冷台及切片刀冷至-22℃左右。②滴加包埋剂:在改进后的组织包埋托上滴加包埋剂,待冷冻好后修平,将微小组织平放于修好的平面上,冷冻片刻,修切,若是长条组织,如肾穿刺标本,组织与组织包埋托旋钮呈60°角,若是多块组织则应放置于同一平面,且不互相重叠。③切片:用手术刀片切去组织周围多余的包埋剂。使之成为长方形或正方形,然后开始切片,切片厚度3～5 μm。④固定:95%乙醇或乙醚酒精混合液(乙醚,95%乙醇等量混合)固定5～10 s。⑤染色:苏木素1～2 min,0.5%盐酸酒精分化1 s,0.25%氨水返蓝,伊红染1 min,95%乙醇3 s,无水乙醇3 s,在烘片机上烤干,封片。
2结果
组织切片完整,可连续切片,HE染色组织结构清晰,色彩鲜艳,细胞核、细胞质对比明显。
3讨论
快速低温恒冷冰冻切片是手术中病理诊断的方法之一,具有较广泛的应用,在很大程度上决定了手术的方式和治疗方案的确定,因此质量较好的冰冻切片,对病理医生和临床医生都至关重要。对于大块组织的冰冻切片基本不成问题,既可用一块组织多切,又可再次取材,然而,对于直径小于0.3 cm的微小组织来说,材料显得尤为珍贵,要作出正确的诊断,就必须要有一张高质量的冰冻切片。笔者将原组织包埋托进行改进,使切片刀与组织包埋托的接触面缩小,这样便于观察组织,又不至于损伤刀口,修切时防止将组织切完,有利于切片。
冰冻切片的包埋剂大致有以下几种:OCT包埋剂、纯胶水、稀释胶水(普通办公用胶水2份,加1份蒸馏水混合)、水等。目前比较常用的是OCT包埋剂,但价格昂贵,我们用甲基纤维素做包埋剂,甲基纤维素广泛用做增稠剂、医学胶粘剂和保护胶体等,由于在低温下极易固化,在固定和染色过程中即溶于水,对组织和细胞结构无影响,且价格低廉,经过20余年的应用,取得了满意的效果。笔者认为,甲基纤维素包埋剂不仅可用于微小组织的冰冻包埋,而且适用于所有的组织的冰冻切片,完全可以替代其他包埋剂。
微小组织由于直径一般小于0.3 cm,在放置多块组织时,速度要快,使多块组织在同一平面上,且不互相重叠,修切时进刀要慢,防止将组织修完,防卷板要调节合适,切片刀和防卷板要保持清洁,当切片刀上有霜时,用有机玻璃片刮除,这样便于连续冰冻切片,有利于病理医生观察不同切面,利于病理诊断。
本文介绍的方法有以下几个特点:①冰冻切片迅速及时,整个过程仅需几分钟。②将组织包埋托进行改进,不易损伤切片刀,不易将组织修完。③切片质量好,染色鲜艳。④用甲基纤维素代替OCT做包埋剂,节约大量经费。
