分离纯化微生物的方法_蘑菇接种室无菌操作及空气消毒法

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   平菇、香菇、金针菇、鸡腿蘑、口蘑、滑子菇等蘑菇均为传统的食料之一,向来以“味道鲜美,营养丰富”著称。近些年来,蘑菇需求量越来越大,全国每年消费蘑菇千万吨,随之广大蘑菇种植户的种植热情愈发高涨,但如果无菌操作及空气消毒方法不当,易导致蘑菇品相不好或产量偏低,造成经济效益低下。
   对蘑菇而言,除要求培养的菌类以外的微生物都统称为杂菌,在蘑菇生长过程中一旦感染杂菌,杂菌就会迅速繁殖,与蘑菇争夺养料和空间,甚至分泌毒素或寄生在蘑菇上,影响蘑菇的正常生长发育,从而给生产上造成经济损失。因此,在蘑菇的制种和栽培中,应保证菌种优良纯正无杂,并且在接种过程中要树立严格的无菌观念,掌握和运用消毒、灭菌技术,严防杂菌污染,以此降低微生物对蘑菇正常生长发育的影响。
   由于蘑菇种类的不同,对培养基质、工具、环境中的无菌程度要求也不同。因此,可以根据生产情况选用不同的方法,如灭菌、消毒、防腐等。
   灭菌是指在一定范围内用物理或化学的方法,彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的一切微生物,包括微生物的营养体和休眠体,使物料成为无菌状态。消毒是采用物理或化学的方法,杀灭或清除基质中、物体表面及环境中的部分微生物。除菌是一种机械方法(如过滤、离心分离、动态杀菌技术等),除去液体或气体中微生物的方法。防腐是用来防止或抑制微生物生长繁殖的技术,是一个抑菌过程。杀菌泛指杀死微生物菌体,通常不包括芽孢,有这种作用的药剂称为杀菌剂。
   消毒灭菌是排除杂菌干扰,为蘑菇创造洁净生长环境的重要保证,也是蘑菇生产中的一项基本技术,是蘑菇生产成败的关键环节。
   1.无菌操作环节
   接种室应保持清洁,用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁,定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前,均应用紫外灯灭菌;使用过程中,采用动态杀菌机,此机器在工人上班时开机,过程中持续杀菌不允许关机,工人下班后同步关机,对人体无害处的同时,时时在线灭杀空气中的霉菌、枯草杆菌、沙门氏菌等杂菌。
   进入接种室前,应先做好个人卫生工作。在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用,不应穿到其他地方去,并要定期更换、消毒。
   接种的试管、三角瓶等应做好标记,注明培养基、菌种的名称、日期。移入接种室内的所有物品,均须在缓冲室用70%酒精擦试干净。
   接种前,双手采用自动感应消毒器对手部消毒,建议采用75%医用酒精作为消毒介质。流程为:“感应给皂机洗手→水龙头冲洗→感应式烘干→感应式手消毒”;以首次杀菌后时间计算,以后每隔60~90分钟对手部重新消毒一次,阻隔手部细菌的滋生及繁衍。
   培养箱及接种工具应经常清洁消毒;操作过程不离开酒精灯火焰;棉塞不乱放;接种工具使用前后均需火焰灭菌。
   2.接种室的空气消毒方法
   2.1紫外线消毒法 其杀菌机理是当其作用于生物体时,可导致细胞内核酸和酶发生光化学反应,而使细胞死亡。另外,紫外线还可使空气中的氧气产生臭氧,臭氧具有杀菌作用。但对真菌效果差,只起辅助消毒作用,还需配合药物使用。由于紫外线对人体有伤害作用,不应在开启紫外灯的情况下工作。
   2.2臭氧发生器消毒法 能高效、快速杀灭空气中和物体表面的各种微生物,接种成功率可达97%以上。同时具有性能稳定、操作简单、耗电小的特点,但对人体有伤害,不应在有人的情况下工作。
   2.3动态空气消毒机 对车间内的空气进行消毒,保证食品安全。该消毒技术对车间消毒时,人可同时在车间内工作,对人体没有任何危害,同时使受控环境保持在“无菌无尘”标准。
   2.4甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒法 使用方法是每m3空间用8~10mL 40%甲醛和5~7g高锰酸钾,先将高锰酸钾倒入陶瓷或玻璃容器内,再加入甲醛。加入甲醛后人立即离开,密闭房间消毒时20~30分钟。
   3.接种室无菌程度检查方法
   取无菌的营养琼脂平板,在接种室内台上和台下各放一套,把皿盖打开15分钟,然后盖好,倒置37℃恒温培养24~28小时,如果每个皿内菌落不超过4个,则可以认为无菌程度良好,若菌落很多,则应对接种室进一步灭菌。
  

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