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摘要 目的：以去卵巢大鼠建立更年期动物模型，探讨维生素E(VE)对心肌细胞保护作用机制。方法：正常成年大鼠和注射植物油的去卵巢大鼠为对照组；腹腔注射VE的去卵巢大鼠为实验组，分别为：5mg／kg(小剂量组)、15mg／kg(中剂量组)、60mg／kg(大剂量组)，连续注射9周。采用黄嘌呤氧化酶比色法、硫代巴比妥酸法测定血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和血清丙二醛(MDA)含量水平，免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax蛋白袁迭。结果：各VE剂量组血清T-SOD活力均高于去卵巢大鼠对照组，MDA含量低于去卵巢大鼠对照组，且Bcl-2／Bax比值有随剂量增加呈递减趋势。结论：VE可增强血清T-SOD活力，下调Bax蛋白表达，上调Bcl-2蛋白表达，抑制更年期大鼠心肌细胞凋亡。这可能是维生素E对绝经后妇女心血管保护作用的机制之一。
关键词：维生素E；TSOD；心肌细胞
中图分类号：R332 文献标识码：B 文献编号：1671-4954(2010)08-602-02
绝经后女性身体各器官出现明显的衰老加速，发病率逐渐上升，研究表明雌激素水平下降是中老年女性患心血管疾病增加的主要原因。使用雌激素替代疗法(ERT)后许多生理功能保持相对稳定，延缓了衰老，特别是使心血管系统疾病的发生减少，程度减轻。但其引起阴道出血、乳房胀痛等不良反应及中远期致子宫内膜癌、乳腺癌等副作用无法排除，使其应用受到一定的限制。资料表明，VE作为有效的抗氧化剂可起到保护细胞、延缓衰老的作用。本研究用去卵巢大鼠，给予不同剂量的VE，观察和研究VE对老年大鼠心血管系统的影响，进一步寻求和探讨对心血管细胞的保护作用的途径和机制。
1 材料与方法
1.1试剂及样品
维生素E注射液购于上海通用药业股份有限公司；植物油为食用色拉油；兔多克隆抗bax抗体、鼠单克隆抗bcl-2抗体及DAB染色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.2动物分组与模型制备
Wistar成年雌性大鼠40只，10月龄，体重(230±20)g，由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供。大鼠随机分成5组：正常对照组、去卵巢对照组、去卵巢小剂量组、去卵巢中剂量组、去卵巢大剂量组。
大鼠适应性喂养普通饲料1周后，除正常对照组外，各组大鼠以1％戊巴比妥钠(30mg／kg)腹腔注射麻醉，背位固定，无菌状态下，做腹正中切口，找到双角子宫，分别沿每侧子宫找到卵巢，分离后结扎切除，分层缝合关闭腹腔。大鼠去卵巢1周后，阴道涂片，已无性周期变化。各组大鼠继续喂养普通饲料，对照组大鼠腹腔注射植物油，实验组大鼠按5mg／kg、15mg／kg、60mg／kg腹腔注射维生素E，每日1次，持续9周。
1.3血清学指标的测定
实验结束时，实验动物均眼底静脉取血，血清置－20℃冰箱保存待测。采用黄嘌呤酶法测定血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力。每毫升反应液中SOD抑制率达50％时所对应的SOD最为一个活力单位。测定时每份血清样品取20μl，按试剂盒说明书操作，结果以活力单位／毫升(U／ml)表示；采用硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛(MDA)含量，操作按说明书进行，样品取0.1ml，结果以nmol／ml表示。
1.4免疫组织化学法检测bcl-2、bax蛋白表达
取心肌相关组织切片，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水后，采用免疫组织化学法检测大鼠心肌细胞bcl-2、bax蛋白表达。DAB显色，细胞浆染成棕黄色的即为阳性细胞。
1.5统计学分析
实验数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS11.0统计软件包，先进行方差齐性检验，再行One Way ANOVA和Student Newman Keuls(SNK)检验。
2 结果
通过实验可知，去卵巢对照组SOD活力水平低于正常对照组(P
