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【关键词】糖原染色；过碘酸-席夫反应；高碘酸-雪夫反应；雪夫试剂；PAS法糖原染色对鉴别诊断急性白血病、骨髓增生异常综合征等血液病具有重要价值[1]。糖原染色法的雪夫试剂配制方法有多种，包括标准法[2]、亚硫酰氯法[3]及陈啸梅法(冷配法)[4]等典型方法。遂对3种染色法的灵敏度进行比较，以避免选用不灵敏的方法。
1 材料与方法
1．1 实验方法 取同一患者的骨髓片3张，分别用标准法、亚硫酰氯法及陈啸梅法雪夫试剂进行糖原染色。为了确定特别重要的雪夫试剂(Schiff液)质量，必须统一反应条件以进行准确比较，即3种染色法骨髓片均选用95%乙醇固定15 min、10 g/L(44 mmol/L)过碘酸22℃氧化60 min[5]、入雪夫试剂(席夫染液)中22℃水浴染色60 min[5]等最关键步骤。
1．2 患者选择及计算积分 患者共20例。其中，慢粒(CML)、原发性血小板增多症(ET)、缺铁性贫血(IDA)及特发性血小板减少性紫癜(ITP)共5例，急性淋巴细胞白血病L1型(L1)、L2型(L2)共8例，急性早幼粒细胞白血病完全缓解(M3CR)仅1例，巨幼细胞贫血(MA)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、溶血性贫血(溶贫)共6例，均以中性杆状核粒细胞、中性分叶核粒细胞判断阳性程度[1]及计算积分(阳性指数)[1]。
1．3 统计学分析 对积分结果进行随机区组设计资料的Friedman秩和检验，以标准法为共同对照组进行多样本的两两比较。用PEMS 3．1统计软件分析。
2 结果
标准法(1组)、亚硫酰氯法(2组)及陈啸梅法(3组)积分均数及中位数依次降低(见表1)，随机区组设计资料的Friedman秩和检验示校正χ2=27．564 1，P=0．000 0，说明1～3组染色积分相比较差异具有极显著性；以1组为共同对照组进行多样本的两两比较(q’检验)，1组与2组q’值为1．976 4，P[2,3]优于冷配法[4]，并不像文献[4]所述热配法加热煮沸时碱性品红易分解。碱性品红微溶于冷水，故可推测加热煮沸有助于碱性品红的充分溶解而提高染色效果；也可能1组雪夫试剂中的碱性品红、盐酸、 偏重亚硫酸钠及活性炭用量比例优于3组；1～3组雪夫试剂的pH值分别为1．5、1．7及1．7，可能pH 1．5更有助于PAS反应；1组与2组染色效果差别不大(见表1)，说明用亚硫酰氯取代盐酸及偏重亚硫酸钠是可行的，两种方法均可选用。总之，应首选标准法，以减少糖原染色的假阴性。
参考文献
1 李家增,王鸿利,韩忠朝,等.血液实验学.上海科学技术出版社,1997：68-70.
2 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程.东南大学出版社,1997：79-80.
3 张淑波,康文喜.糖原染色PAS法的改良.海军医学杂志,2004,25(4):384-384.
4 胥维勇,杨群.4种Schiff试剂冷配法的应用和体会.诊断病理学杂志,2003,10(1):49-49.
5 Lyon HO,Schulte EK,Prento P,et al.Standardized staining methods:Feulgen-Rossenbeck reaction for desoxyribonucleic acid and periodic acid-Schiff(PAS)procedure.Biotech Histochem,2002,77(3):121-125.
