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【摘要】 目的 研究长期高糖高脂饮食对新西兰兔肝、肾、心肌和胰腺纤维化进程的差异性影响。方法 雄性兔10只喂基础饲料为对照组，10只喂高糖高脂饲料为模型组。每月末测空腹血糖和甘油三酯(TG)。5个月后，分离肝、肾、心和胰，计算各脏器重量系数，测组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和羟脯氨酸(Hyp)水平，VG染色测组织中胶原纤维面积百分比以评价纤维化程度。结果 与对照组相比，模型组1个月后TG升高，3个月后血糖升高；5个月后肝的重量系数明显升高，而肾、心的差异不明显；肝、肾、心肌和胰腺组织匀浆中MDA含量增加，而SOD活性下降(P0.05)。结论 高糖高脂饮食对新西兰兔肝、肾、心肌和胰腺纤维化进程的影响具有差异性，以肝、肾纤维化为显著，心肌纤维化次之，胰腺纤维化不明显。
【关键词】 高糖高脂饮食；器官纤维化；新西兰兔
肝、肾、心肌、胰腺等主要器官的纤维化是进一步向器官硬化发展，甚至功能衰竭的重要中间环节和必经途径，严重威胁人类健康和生命。不同器官发生纤维化的病因与机制不同，但其主要病理改变为组织器官内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭[1]。研究证实，不同类型的高脂饮食可诱导动物发生肝纤维化[2]、肾小管间质纤维化[3]、心肌纤维化[4]和胰腺纤维化[5]。然而，饮食致肝、肾、心和胰腺等不同器官纤维化的横向比较，尚未有类似研究报道。因此，本实验拟观察高糖、高饱和脂肪饮食对兔肝、肾、心肌和胰腺纤维化的影响，为研究饮食与器官纤维化之间关系提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物分组 清洁级雄性新西兰兔，体重2 kg左右，购自南华大学实验动物学部。随机分为对照组和模型组，前者喂养基础饲料，后者喂养高糖高脂饲料（含37%蔗糖、10%猪油和53%基础饲料），每组10只。每天喂食饲料100 g，自由饮水。
1.2 血浆生化检测 每月末从禁食过夜的兔耳缘静脉取血，肝素抗凝，在BECKMAN LX20全自动生化分析仪上检测血糖(Glu)、甘油三酯(TG)。
1.3 器官重量系数 5个月后放血处死动物，分离肝、肾、心和胰腺，剔除表面的脂肪和筋膜，滤纸吸去血液后称重，计算各脏器系数，即（脏器重量/体重）×100%。
1.4 组织匀浆生化检测 取肝、肾、心肌和胰腺组织，冰浴下制备10%匀浆，离心后取上清用双缩脲法测蛋白含量，按试剂盒的方法测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(Hyp)的含量，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.5 VG染色 常规病理切片，Van Gieson（VG）染色，每张切片随机选10个低倍视野，Polaroid公司PIPS-2020病理图像系统测胶原纤维面积（即红染区域）百分比。
1.6 统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行统计分析，计量数据用t检验，胶原纤维面积用Mann-Whitney检验，以x±s表示，P0.05)。兔胰腺分布较散，不易准确收集，故未测其重量。结果见表1。
2.3 组织匀浆生化指标 如表1所示，与对照组相比，模型组肝、肾、心肌和胰腺组织匀浆中SOD活性明显降低，而MDA含量明显升高，差异均有统计学意义 (P0.05)。
2.4 VG染色 模型组肝细胞间、肝小叶间和汇管区有大量红染的胶原纤维增生，形成纤维间隔，胶原纤维面积为(13.23±2.61)%；而对照组仅在血管周围和小叶间隔可见少许红染的胶原纤维，面积为(7.57±1.48)% (P0.05)。
3 讨论
器官纤维化是组织器官对损伤因素的一种修复反应，藉以保持器官的相对完整性。但在过度失控的修复过程中，过量的细胞外基质（ECM）沉积在组织内，导致器官纤维化的发生[1]。器官纤维化的病理基础就是胶原纤维增多，降解不足而导致ECM的过度沉积[6]。本实验中，运用VG染色可特异性将胶原纤维染成红色，结果显示模型组肝、肾组织胶原纤维面积比对照组分别增加74.77%和83.36%（P0.05）。这说明高糖高脂饮食喂养新西兰兔5个月对肝、肾、心肌和胰腺纤维化进程的影响具有差异性，以肝、肾纤维化为显著，心肌纤维化次之，胰腺纤维化不明显。
羟脯氨酸（Hyp）是一种非必需氨基酸，为构成胶原蛋白的特有成分，而胶原是器官纤维化时细胞外基质的主要成分[7]，故检测组织中Hyp含量能客观反映胶原纤维的代谢情况和纤维化的程度。本实验中模型组肝、肾和心肌组织中Hyp含量明显增多（P0.05）。这说明肝、肾和心肌组织内胶原蛋白沉积增加，促进纤维化的形成，与VG染色结果相一致。
大量摄入葡萄糖和饱和脂肪引发的高血糖、高血脂具有细胞毒性，能产生过量的自由基，引发氧化应激[5, 8-9]。MDA是脂质过氧化的终产物，其含量可反映组织内氧化反应水平和细胞的损伤程度[8-9]；SOD是生物体内重要的清除自由基的抗氧化酶，能保护细胞免受氧化应激的损伤[8-9]。本实验中模型组兔各组织SOD活性降低，MDA含量增加，说明高糖高脂饮食可抑制肝、肾、心肌和胰腺组织中SOD活性，促进氧化应激，增强脂质过氧化作用。而胶原蛋白的表达和纤维化的形成与氧自由基、氧化应激密切相关[10]，故高糖高脂饮食诱导器官纤维化的发生与氧化应激的增强和抗氧化能力减弱有关。但为何饮食对不同器官纤维化的形成具有差异性，其原因和机制尚不清楚，可能与器官的生理与代谢差异、损伤的代偿能力和饮食的喂养时间较短有关，仍有待进一步研究。
总之，新西兰兔长期摄入高糖高脂饮食，可引发外源性高血糖、高血脂，促进脂质过氧化，对肝、肾、心肌和胰腺组织纤维化进程具有差异性影响。因此，合理膳食，适当限制富含糖和饱和脂肪的饮食对预防器官纤维化具有重要作用。
参考文献
[1] 李才. 器官纤维化基础与临床. 北京：人民卫生出版社，2003：1-15.
[2] 罗洁，许辉，刘毅. 高糖高脂诱导新西兰兔肝纤维化的实验研究. 实用预防医学，2007，14(2)：311-315.
[3] 李宏光，蔡元菊，邹锦慧，等. 高糖高脂饮食对兔肾小管间质纤维化的影响. 动物学杂志，2010，45(1)：145-150.
[4] 谢晓华，刘宁，刘秀华，等. 高胆固醇饮食诱导的心肌纤维化及其发生机制. 解放军医学杂志，2003，28(12)：1096-1097.
[5] Yan MX, Li YQ, Meng M, et al. Long-term high-fat diet induces pancreatic injuries via pancreatic microcirculatory disturbances and oxidative stress in rats with hyperlipidemia. Biochem Biophys Res Commun, 2006, 347(1): 192-199.
[6] 李健，李或，牛建昭. 胶原纤维与器官纤维化. 解剖学报，2003，34(6)：662-664.
[7] 李文才，张锦生，李华，等. 肝组织羟脯氨酸含量测定方法的优化. 上海医科大学学报，2000，27(4)：295-297.
[8] Tessari P, Coracina A, Cosma A, et al. Hepatic lipid metabolism and non-alcoholic fatty liver disease. Nutr Metab Cardiovasc Dis, 2009, 19(4): 291-302.
[9] Ling PR, Mueller C, Smith RJ, et al. Hyperglycemia induced by glucose infusion causes hepatic oxidative stress and systemic inflammation, but not STAT3 or MAP kinase activation in liver in rats. Metabolism, 2003, 52(7): 868-874.
[10] Greenwel P, Domínguez-Rosales JA, Mavi G, et al. Hydrogen peroxide: a link between acetaldehyde-elicited alpha1(I) collagen gene up-regulation and oxidative stress in mouse hepatic stellate cells. Hepatology, 2000, 31(1):109-116.
基金项目：广东省医学科研基金（A2009692），韶关市科技计划项目（2009-42）
通讯作者：李宏光
