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摘 要：目的：评价花椒微米粉末、防风微米粉末对肛肠病术后疼痛的镇痛效果及安全性，并对其镇痛作用机理进行初探。方法：分别采用小鼠热板法及小鼠醋酸扭体法实验来观察实验药物的整体镇痛效果；建立小鼠肛肠病术后疼痛模型，采取酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该模型小鼠血清中前列腺素E�2（PGE�2）和β-内啡肽（β-EP）水平，初探微米粉末的镇痛机制；以急性皮肤粘膜刺激实验观察药物外用的毒性与不良反应。结果与结论：先秦及秦汉时期原创性单味中药微米粉末―花椒微米粉末及防风微米粉末对肛肠病术后镇痛是安全有效的，其镇痛机制可能与降低血清中PGE�2含量，提高β-EP含量有关。
关键词：先秦；秦汉；原创性；单味；镇痛；微米粉末；肛肠病术后；实验研究
中图分类号：R243.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0029-03
清•孙星衍《神农本草经•卷三•下经•蜀椒》：“蜀菽，味辛，温，主……痹痛……”。清•孙星衍《神农本草经•卷一•上经•防风》：“防风，味苦，温，无毒，主大……疼痹（《御览》作痛）……”。
1 材料与方法
（1）清洁级昆明种小白鼠，雌雄不限，体重为18~22g(由湖南中医药大学动物实验中心提供)，动物合格证：scxk（湘）2004-0005。
（2）实验器材包括三用恒温水箱（浙江省余姚市检测仪表厂生产，浙制02810175），高速离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司生产，TG16-Ⅱ），AO-820组织切片机（美国生产，湖南中医药大学病理教研室提供），400倍奥林巴斯光学显微镜（日本生产，湖南中医药大学病理教研室提供），Thermo multiskanink3酶标仪（美国热电-芬兰雷勃酶标仪MK3）。
（3）实验药物包括花椒微米粉末（D50=16.89μm，D90=57.94μm），防风微米粉末（D50=7.71μm，D90=32.79μm），由湖南中医药大学教育部工程技术研究中心提供。
（4）实验试剂包括阿司匹林原料药（山东新华制药股份有限公司生产，国药准字号：H37020354，批号：07200），盐酸曲马多原料药（中国科学院分装，标准：EP 5.0，批号：070227），PGE�2 ELISA试剂盒 （上海森雄科技实业有限公司进口分装，批号：0711111），β-内啡肽 ELISA试剂盒（BPB Biomedicals，Inc.USA，湖南晶科生物试剂有限公司原装进口，批号：70621S），冰醋酸溶液（上海试剂一厂生产，批号：AR500mL 050906），分析纯，临用时以蒸馏水配成0.6％浓度。
（5）实验用药计算参照《中华人民共和国药典》（2005版），花椒临床常用量为5g，防风临床常用量为10g，所有实验药物剂量均以其临床常用量为基准，参照文献［1］方法计算。
（6）小鼠热板法实验：按文献［1］方法取合格小鼠（雌性）180只，随机分为空白组、花椒低剂量组、花椒中剂量组、花椒高剂量组、防风低剂量组、防风中剂量组、防风高剂量组、阿司匹林组、盐酸曲马多组，观测指标及给药方法同文献［2］所述。各组用药量：空白组：生理盐水（1mL/只）；花椒低剂量组：0.015g/只；花椒中剂量组：0.03g/只；花椒高剂量组：0.06g/只；防风低剂量组：0.03g/只；防风中剂量组：0.06g/只；防风高剂量组 0.12g/只；阿司匹林组：0.0016g/只；盐酸曲马多组：0.0002g/只。
（7）小鼠扭体法实验：按文献［1］方法将小鼠162只随机分为9组，各组分组及用药量同小鼠热板法实验，主要观察指标为扭体次数、扭体抑制率，给药方法同文献［1］所述。
（8）肛肠病术后疼痛模型实验：参考Milligan-Morgan痔手术操作方法［4］ 造模，在尾底近端皮肤与粘膜交界处，作尖端向外的倒V字形切口，保持创面约0.5cm×0.5cm大小。随机选取90只造模成功小鼠，分为模型对照组、花椒高剂量组、防风高剂量组、阿司匹林组、盐酸曲马多组与未造模的正常对照组，共6组，分别给药如下：正常对照组：适量面粉；模型对照组：适量面粉；花椒高剂量组：0.06g/只；防风高剂量组：0.12g/只；阿司匹林组：0.0016g/只；盐酸曲马多组：0.0002g/只。给药方式均为用无菌棉签粘取各药粉均匀涂于创面，以纱布覆盖，胶布固定，连续给药3天，每天两次。
（9）小鼠血清中PGE�2和β-EP测定：分别采集肛肠病术后疼痛模型实验中各组小鼠眼眶静脉血，分离血清，测定PGE�2和β-EP值（采用ELISA法）。
（10）急性皮肤粘膜刺激性实验：按文献［3］方法将昆明种小鼠64只随机分为花椒高剂量组（0.06g/只）、防风高剂量组（0.12g/只）。每组中随机选取一半小鼠保持皮肤完好不受损伤，另外一半小鼠实验时用75%酒精消毒皮肤，无菌16号针头将完好皮肤划#号，渗血为度，用药方法及观察方法同文献［5］所述。
（11）统计学分析：计量资料以±S表示，统计分析采用SPSS15.0统计软件包进行。
2 结果
2.1 小鼠热板法
从表1可知，花椒、防风各组与空白组比较，痛阈提高率有明显差异（P
2.2 小鼠扭体法
从表2可知，花椒、防风各组与空白组比较，抑制率有明显差异（P2和β-EP（OD值）有明显差异（P2和β-EP（OD值）有明显差异（P2和β-EP（OD值）无差异（P＞0.05）；防风组与阿司匹林组比较，PGE2和β-EP（OD值）无差异（P＞0.05）。
2.4 急性皮肤粘膜刺激性实验
由表4、表5可知，用药前后小鼠体重相当，前后比较，差异无统计学意义（P>0.05），肉眼观察小鼠皮肤毛发、眼、粘膜、呼吸状况、中枢神经系统、四肢活动等动物的全身情况均未见中毒表现，可认为花椒微米粉末与防风微米粉末用于皮肤粘膜外用是安全的。
3 讨论
花椒在临床上多入煎剂使用，但也有通过粘膜吸收的报道，历史上就有通过口腔粘膜及牙周组织吸收治疗牙痛的记载。现代研究有通过鼻粘膜吸收花椒粉末，治疗变态反应性鼻炎的报道［4］，治疗时直接经鼻孔吸入少许药粉或用消毒棉签蘸取药粉少许供鼻孔吸入，收到明显效果。临床还有通过皮肤、粘膜，甚至组织溃疡面吸收的报道，如李真、周书平［5］等用花椒、食盐水熏洗坐浴治疗肛管疾患术后，其研究认为，花椒、食盐熏蒸，能使局部血管扩张而减轻充血，麻木感觉神经而减轻疼痛，取得了良好的临床效果；周正山［6］用花椒水浸泡治疗下肢静脉曲张溃疡56例，其中轻度者10天治愈，中度一般7天好转，重度10天好转，有效率100％。以上报道均与本次实验在用药方式上有类似之处，为本次实验提供了有力的证据。
臧林泉等［7］试验分析证实，花椒种籽油由棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸及在该种籽油中未见报道的十七碳烯酸组成，主要成分油酸、亚油酸、亚麻酸，混合含量高达57.549%~87.907%。王军、梁颖［8］等研究表明α-亚麻酸能显著抑制大鼠PGE2的产生，从而产生镇痛作用；本次实验研究表明，花椒能明显提高小鼠血清中β-EP的含量，从而产生镇痛作用。
花椒的主要镇痛成分有花椒酰胺［9］、香豆素类单体化合物香柑内酯［10］、hydroxy-α-，β-，γ-sanshool、hydroxy α- sanshool、hydroxy-γ-sanshool［11］，其主要镇痛机制与中枢去甲肾上腺素能α-受体有关。王东吉［12］等为了探讨花椒的镇痛作用机制，应用电生理学方法观察了不同浓度的花椒浸液对蟾蜍离体神经干C类纤维动作电位幅度和传导速度的影响，结果表明不同浓度的花椒浸液对蟾蜍离体神经干C类纤维动作电位幅度和传导速度均有明显的抑制作用，且随着花椒浸液浓度的增高，动作电位消失增快，两者之间呈显著负相关。
防风的主要镇痛成分有色酮类、香豆素、聚乙炔和1-甘油酯类化合物，divarieatol(8)和(3’s)-hydroxydeltoin(12)等，作用最强的是色酮类，其镇痛机理包括抗炎、中枢神经系统作用和对肝脏代谢酶的抑制作用(延长戊巴比妥诱导的催眠反应)等［13］。升麻甙(prim-o-glucosylcimifugin)和5-O-甲基维斯阿米醇甙(4，-o-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol)是从防风中提取的2种色原酮甙类成分，两者的作用与强痛定50mg.kg-1组相似。
应用小鼠甩尾法(温浴法)研究结果表明，升麻甙50mg.kg-1和100mg•kg-1及52O2甲基维斯阿米醇甙25mg•kg-1给小鼠肌肉注射，均有明显的镇痛作用。口服防风水煎液40g/kg-1，亦可降低由醋酸致小鼠扭体反应次数，升高用热板法测定的痛阈［14］。因此，防风有非常明确的镇痛作用。
防风挥发油对多种炎症有显著的抑制作用，并能减少炎症介质PGE2的含量；防风在多个复方中能提高β-EP的含量，在本次实验研究中亦表明有此作用。
总之，本次实验研究证明，花椒、防风微米粉末确有明显的镇痛作用，且花椒的镇痛作用强于防风。
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（责任编辑：陈涌涛）
