【www.zhangdahai.com--爱岗敬业演讲稿】
【摘要】 目的 了解SLE患者骨髓间质干细胞(MSC)的生物学特性。方法 采用密度梯度离心和贴壁筛选法对9例SLE患者和5例正常人骨髓MSC进行分离培养，观察MSC形态，流式细胞术检测MSC表面分子CD29、CD44、CD34、CD45的表达及MTT法检测MSC的生长情况。 结果 SLE患者MSC传代率(55.6%)低于正常(100%)(P0.05)，细胞呈长梭形旋涡样生长；传代后细胞生长较旺盛，平均传代时间(5.8±0.44)d，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。消化传代的细胞于24 h内完全贴壁，形态与健康对照组相似。�
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2.1.2 体外扩增不成功者 MSC生长情况与健康对照组相比较：同等骨髓量分离得到的单个核细胞数量与健康对照组相比明显减少，且贴壁的纺锤形、梭形细胞的出现时间明显较晚，一般于6~7 d，且仅零星分布，不成集落生长，随着培养时间的延长，其中2例可见细胞少量扩增，培养至第15天，约见20％~30％融合的短梭形细胞生长(图3)，至第30天，细胞基本自行凋亡；另2例至第18天，见部分长梭形细胞零星分布，融合少于10％，至第30天细胞基本自行凋亡。�
2.2 MSC表面分子的表达
流式细胞术检测BM�MSC细胞表面抗原，结果显示体外扩增成功的SLE患者BM�MSC均高表达CD29、CD44，而不表达CD34、CD45，第3代BM�MSC纯度达95%以上，且各表面标志的表达与健康对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。�
2.3 MSC的生长情况
SLE患者第2代MSC生长趋势与健康对照组相似，第3~4天生长活跃，第4天后生长渐缓，第5�6进入生长平台期。�
3 讨论�
MSC是骨髓中具有高度自我更新和多向分化潜能的一群干细胞，体外培养易纯化、扩增迅速，具有支持造血、免疫调节和诱导免疫耐受的作用。本实验进行了9例SLE患者和5例健康对照者MSC的体外培养。健康对照者MSC 均能成功体外扩增。9例SLE患者中，5例可以传代扩增，传代率为55.6%。有4例SLE患者MSC不能成功传代扩增，说明部分SLE患者MSC存在缺陷。另一方面，我们发现能成功传代的5例SLE患者MSC无论是从细胞形态、原代培养所需时间、平均传代时间及表面特异性分子表达均与健康对照组无明显差异，所培养、扩增的细胞能达到临床应用的要求。提示这部分SLE患者MSC生物学特性基本正常。�
对两组扩增情况不同的SLE患者的临床资料进行比较，我们发现未能成功体外扩增的SLE患者具有如下的临床特征：①年龄较大。②病程较长。③合并有较严重的血液系统损害。④长期大剂量应用免疫抑制剂。�
大量实验发现，MSC的生物学特性与年龄密切相关。骨髓中MSC的含量、质量以及细胞活性随着年龄的增长而下降［4,5］。骨髓中MSC的克隆数随着年龄的增长而逐渐减少，且BM�MSC分泌SCF、FLT�3L、IL�6、TGF�β1及SDF�1等与自我更新密切相关的细胞因子的能力逐渐下降，导致BM�MSC的增殖能力逐渐减弱。另外，也有研究者指出［6］，病情较重的SLE患者，从骨髓中可提取的单个核细胞数原本就较少，所含MSC就更少。然而SLE病情轻重、病程长短及不同药物治疗是否会影响SLE患者MSC的体外扩增、生物学特性及功能，目前尚未能明确。�
我们实验说明SLE患者MSC存在一定的异质性，因此应用MSC治疗SLE前，了解患者自身MSC是否存在缺陷是必需的。如果患者MSC本身存在缺陷，为避免治疗失败或复发，异体MSC输注为首选；如果MSC本身基本正常，自体MSC输注将是有效的。SLE患者MSC的体外扩增及其生长特性是协助我们评价SLE患者MSC是否存在缺陷的重要方面，为SLE患者MSC移植的治疗方法提供了理论依据。�
参 考 文 献�
［1］ Haynesworth SE. Baber MA Caplan. Al Surface antigen on human marrow�derived mesenchymal stem cells are detected by monoclonal antibodies. Bone，1992，13:69�80.�
［2］ Tse WT， Pendleton JD， Beyer, et al. Suppression of allogeneic T�cell proliferation by human marrow stromal cells: implications in transplantation. Transplantation, 2003，(75):389�397.�
［3］ Tse WT， Pendleton JD， Beyer et al. Suppression of allogeneic T�cell proliferation by human marrow stromal cells: implications in transplantation. Transplantation, 2003，(75):389�397.�
［4］ Kotev Emeth S， Savion N， Pri2 chen S， et al. Effect of maturation on the osteogonic response of cultured stromal bone marrow cells to basic fibroblast grow th factor. B one， 2000，27:777�783.�
［5］ Service RF. Tissue engineering build new bone. Science， 2000，289(5484): 1498�1500.�
［6］ 孙凌云,侯业义,范乐明,等.骨髓间质干细胞的初步研究.中华风湿病学杂志,2005,9(10):586�589.
