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【摘要】目的:通过对乙型肝炎病毒酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)二者的分析解释和相互比较,提示二者的相关性。方法:分别对我院用酶联免疫吸附法(ELISA)检出的血清标本HBsAg阳性和阴性两组标本进行荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)HBV-DNA的检测。结果: HBsAg(+)和抗-HBc(+)检出率100%;HBsAg(+)、抗-HBe(+)和抗-HBc(+)检出率60%;HBsAg(+)和抗-HBc(+)检出率54%;46例(46%) HBV-DNA阴性。结论: 两种方法在试验中各有优势,互为补充,在临床检验中应该两者结果综合分析。
【关键词】酶联免疫吸附法;荧光定量聚合酶链反应法;比较与意义
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】1006-1959(2009)08-0217-01
我国属乙型肝炎高地方性流行区。据1992年全国病毒性肝炎血清流行病学调查结果,慢性乙型肝炎病毒感染者约1.2亿,其中慢性乙型肝炎患者约3000万例,每年死于肝硬化和肝癌等乙型肝炎相关疾病人数达30余万例。乙型肝炎是我国当前和今后相当长时期内危害人民健康、阻碍社会经济发展、影响社会和谐和稳定的重要因素,已成为严重危害我国人民健康的公共卫生问题[1]。针对这种严峻的局面,如何做到及时预防,诊断和有效的治疗已经成为解决问题的关键[2]。特别是对于乙肝病毒的检测,为了满足临床的需要,现将乙型肝炎病毒检测的酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)的应用比较与临床意义进行探讨。
1材料
1.1 研究对象:
我县自2009年1月~2009年5月,健康体检者864例血清标本(男489例,女375例)用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测,检出HBsAg阳性48例,阴性816例。其中阳性48例(男26例,女22例)全部选出标为A组HBsAg阳性组,从816例阴性标本中也随机选出48例(男23例,女25例)标为B组HBsAg阴性组。
1.2 方法和仪器:
酶联免疫吸附法(ELISA):试剂由上海科华实业科技有限公司提供,仪器e-STAR全自动酶标仪由台湾合富公司提供。
荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR):试剂(≥10�3拷贝数�ml)由中山大学达安基因有限公司提供,仪器DA620微量荧光检测器由上海凌光技术有限公司提供。
2 结果
2.1 A组(HBsAg阳性组)实验结果
2.1.1 在10例HBsAg(+)、 HBeAg(+)和抗-HBc(+)的标本中,经荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测结果10例(100%)HBV-DNA阳性。
2.1.2 在25例HBsAg(+)、抗-HBe(+)和抗-HBc(+)的标本中,经荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测结果15例(60%)HBV-DNA阳性。
2.1.3 在13例HBsAg(+)和抗-HBc(+)的标本中,经荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测结果7例(54%)HBV-DNA阳性。
2.2 B组(HBsAg阴性组)试验结果
在48例 HBsAg(―)标本中经荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测结果2例(4%) HBV-DNA阳性,46例(46%) HBV-DNA阴性。
3 讨论
从表1中可以看出:对HBsAg(+)、 HBeAg(+)和抗-HBc(+)即大三阳10例中经荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测,HBV-DNA≥10�3拷贝�ml10例,阳性率高达100%,反应了乙型肝炎病毒酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)二者高度相关,反应乙肝病毒复制活跃、传染性强,应予特别重视[3]。从表2可以看出:对48例HBsAg(―)经荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测,仍查出HBV-DNA阳性说明酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒检测中有一定缺陷,比如HBsAg的滴度过低,注射了乙肝疫苗等原因导致常规ELISA试剂检测不出来。
参考文献
[1] 程钢,何蕴韶,周新宇.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒[J].中华医学检验杂志,1999,22(3):135-138
[2] Livak KJ,Floos SJA,Marmaro J,et al. Oligonucletides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization [J]. PCR Methods Applic, 1995,4 (3): 357-362
[3] 蔡卫平,唐小平,陈劲峰,等.慢性乙型肝炎HBV DNA定量检测与病原学标志和肝脏损害程度的关系[J].中国实用内科杂志,1998,18(2):149-150
作者单位:6444000 四川省兴文县疾病预防控制中心�1
6444000 四川省兴文县人民医院�2
