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[摘要] 目的:探讨几种绿茶中槲皮素的含量。方法:建立高效液相色谱(HPLC)法分别测定市售龙井、碧螺春、毛峰、毛尖茶叶中槲皮素的含量。结果:高效液相色谱测定系统可以分离得到龙井、碧螺春、毛峰、毛尖茶中的槲皮素,其中龙井的槲皮素含量最高。实验的精密度与重现性好。结论:通过对几种绿茶中槲皮素含量的测定和比较,得出较优者。为人体膳食调节提供理论依据,并为茶叶深加工提供信息。
[关键词] 绿茶;槲皮素;含量测定;高效液相色谱法
[中图分类号] R282.5 [文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2010)05(c)-029-03
The content determination comparison of quercetin in some green teas
DONG Yujing1, ZHANG Yuying2
(1.Department of Pharmaceutical Analysis,Pharmaceutical Sciences, Guangdong Pharmaceutical University,Guangdong,Province,Guangzhou, 510006,China;2.Foundation Institute,Guangdong Pharmaceutical University,Guangdong Province,Guangzhou510006,China)
[Abstract] Objective:To discuss the content of quercetin in some green teas. Methods: Establishing a high-performance liquid chromatography (HPLC) for determination the content of quercetin in the green tea as Longjing, Biluochun, Maofeng,Maojian. Results: The HPLC system may separate obtains the quercetin of green tea,and Longjing tea is highest. Conclusion: Through compares several kind of green teas" quercetin content, obtains superior. Provide the theory basis for the human body meals adjustment。
[Key words] Green tea; Quercetin; Content determination; HPLC
茶叶中的多酚物质[1]是由黄烷醇类、花色素类、花黄素类、缩酸、缩酚酸类和槲皮素组成,其中槲皮素可清除自由基[2],有抗癌,抑制促癌剂的作用,及抗血小板凝集和5-羟色胺(5-HT)的释放作用;可抵抗病毒,防感冒,并有较好的祛痰、止咳平喘作用,用于治疗慢性支气管炎;还可起到降低血压、增强毛细血管抵抗力、降血脂、增加冠状动脉血流量等作用,对出血性疾病、循环障碍、动脉粥样硬化等具有较高疗效,对冠心病及高血压患者有辅助治疗作用。本文应用高效液相色谱法测定龙井、碧螺春、毛峰、毛尖的槲皮素含量,实验流程简单,效果良好,可作为绿茶质控的一种参考。通过对几种绿茶中槲皮素含量的比较,得出较优者。为人体膳食调节提供理论依据,并为茶叶产品在生化方面的深加工提供信息。现报道如下:
1 材料与方法
1.1 供试材料、仪器与试剂
绿茶样品为市售的西湖龙井,洞庭碧螺春,黄山毛峰,信阳毛尖。高效液相色谱仪:岛津LC-10ATvp 液相色谱仪,包括LC-10AT 色谱泵、SPD-10Avp 紫外检测器、混合器;色谱柱:Phenomenex Gemini C18。超声清洗器。槲皮素对照品购自sigma公司。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件色谱柱:Phenomenex Gemini C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)。流动相,A相:乙腈-甲醇(9∶1),B相:0.15%醋酸铵溶液梯度洗脱。程序为:0～10 min,从10%A 线性梯度至15%A; 10～50 min,从15%A线性梯度至50%A;50～55 min,线性梯度从50%A至80%A。每次运行结束后以初始流动相平衡色谱柱20 min,以保证出峰情况稳定。检测波长为280 nm,流速为1.0 ml/min,进样量:20 μl,柱温为25℃ 。甲醇、乙腈为色谱纯。实验用水为双蒸馏水。
1.2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品10 mg置100 ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得浓度为100 μg/ml的槲皮素对照品溶液。
1.2.3 供试品溶液的制备取龙井、碧螺春、毛峰、毛尖各200 g茶样,100℃水浴浸提,抽滤,再用氯仿、乙酸乙酯分别萃取酯层和水层,浓缩,减压干燥,得到粗粉,研细,待用。
精密称取细粉约1.0 g置具塞锥形瓶中,精密加入50%(体积分数)的甲醇20 ml,密塞,称定重量,超声处理20 min,放冷,再称定重量,用50%(体积分数)的甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,精取续滤液5 ml,置10 ml容量瓶中,并用甲醇定容至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜过滤, 取续滤液作为供试品溶液。
2 结果与分析
2.1高效液相法分离绿茶槲皮素
见图1～5,峰1为槲皮素,2为表没食子儿茶素(EGC)。 2.2系统适用性试验
分别取对照品溶液、供试品溶液各20 μl进样测定,理论塔板数大于50 000,供试品溶液中槲皮素峰与相邻杂质峰的分离度大于1。
2.3线性关系考察
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品20.0 mg置100 ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6、7 ml置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释于刻度,摇匀,制成标准系列。分别精密吸取各溶液20 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。以槲皮素峰面积(Y)为纵坐标,以槲皮素进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程为:Y=1.714 2+16 224 X,r=0.947 1,结果表明槲皮素在0.4～2.8 μg范围内与峰面积的线性关系良好。
2.4稳定性试验
精密吸取龙井茶供试品溶液,依上述色谱条件,分别在0、12、24、48、72、96 h进样20 μl,测得槲皮素的峰面积为37 316, 37 321,37 325,37 312,37 321,37 319,RSD值为0.05%,表明供试品在96 h内稳定。
2.5精密度与重复性试验
取槲皮素对照品溶液,在上述色谱条件下进行分析,连续进样6次,测定其峰面积,槲皮素峰面积为32 450,32 391, 32 355,32 570,32 390,32 246,结果计算RSD值为0.738% (n=6),结果表明精密度高。取龙井茶细粉5份,每份1.0 g,按“1.2.3项”方法制备样品溶液,后按上述色谱条件进行分析,槲皮素峰面积为37 317,37 113,37 642,37 504,37 214,RSD值为1.15%,结果表明重复性良好。
2.6加样回收率试验
精密称取已知含量的龙井茶细粉5份,每份1.0 g,分别加入槲皮素对照品适量,按“1.2.3项”方法制备样液,后按上述色谱条件下,注入色谱仪,测得槲皮素的含量,结果平均回收率为99.83%,RSD值为0.96%.
2.7含量测定
每种绿茶样品,每种精取细粉1.0 g,按“1.2.3项”下方法制备供试液,在上述色谱条件下,分别精密吸取按“1.2.2项”和“1.2.3项”方法制备好的对照品溶液及供试品溶液各20 μl,进样,测定各自峰面积,按外标峰面积法计算龙井、碧螺春、毛峰、毛尖中槲皮素的含量。结果见表1。
3 讨论
绿茶是我国特有的茶类,历史悠久,近年来有研究绿茶中槲皮素的综合提取工艺技术,主要考察了绿茶多酚的浸提条件,茶多酚浸提液的超滤条件,大孔吸附-树脂纯化茶多酚的层析技术,高效液相色谱分析槲皮素含量。目前有关绿茶加工技术及理论的研究主要集中在工艺优化、品种与工艺的关系、加工中在制品香气、滋味成分的组成与变化等方面[3],而对于绿茶品质化学的深入研究,还有待进一步加强。
高效液相色谱法已应用到绿茶中槲皮素的分离,溶剂体系的选择是高效液相色谱法分离的关键环节。本实验考察了不同比例的流动相,最后确定流动相乙腈和甲醇的比例,从而使样品中槲皮素达到良好的分离。检测波长选取 280 nm,因为槲皮素是从茶多酚中提取的,茶多酚中的儿茶素类物质与槲皮素在280 nm 都有较高吸收[4],而且通过实验结果发现测得结果理想,所以选取该波长。
4种茶分离得到的槲皮素,以龙井的槲皮素含量最高;4种茶的EGC都较高,说明绿茶中含大量的EGC,其中碧螺春的EGC含量最高。
[参考文献]
[1]李萌,王华燕,胡文祥,等.HPLC法快速测定茶多酚中儿茶素类及咖啡因含量[J].中国医药导刊,2007,9(6):506-507.
[2]郭素枝,张育松,陈洪德.浅述茶叶中几种成分对清除人体自由基的作用[J].农业考古,1998,18(4):276-277.
[3]王欢,张泽民.影响茶叶香气的几种因素[J].福建茶叶,1997,19(3):40-42.
[4]姜廷福,师彦平.天然产物黄酮类化合物的高效液相色谱分析[J].分析测试技术与仪器,2002,8(4):199-207.
(收稿日期:2010-04-19)
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