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【摘要】 目的 优选芩归地黄口服液的最佳提取工艺。方法 采用正交试验,以测定黄芩苷含量为考察目标,对芩归地黄口服液的提取条件进行优选。结果 影响因素为:加水量>药液含醇量>煎煮时间>煎煮次数。芩归地黄口服液的最佳提取工艺为:加10倍量的水煎煮两次,每次60 min,滤过,浓缩后加入适量的乙醇,使含醇量为65%～70%,放置24 h后取上清液、回收乙醇。结论 该制备工艺合理有效,成分提取率高。
【关键词】 芩归地黄口服液;黄芩苷;正交试验;高效液相色谱法
The optimition of preparation press of Qinguidihuang Oral Liquid by Orthogonal test method
TAO Jian.Pingdingshan Hospital of Traditional Chinese Medicine.Henan,Pingdingshan 467000,China
【Abstract】 Objective To select the optimal preparation process of optimum the extraction condition of baicalain from Qinguidihuang Oral Liquid. Methods Orthogonal test to determine baicalin content of the study objectives,optimum the extraction of baicalain was selected as the content index.Results Influencing factors : solid-liquid ratio> Solution containing methanol > Decoction time> decoction frequency.The money benefits the best mixture Extraction Process : tenfold increase in the volume of water decoction twice,each 60 minutes,filtration,after adding suitable concentration of ethanol,alcohol made with a capacity of 65% to 70%,placed 24 hours after filtration,recovery of ethanol.Conclusion Thisoptimumpreparingproceduresarerationaland theextractionrate of activecompenentsisgood.
【Key words】 Qinguidihuang Oral Liquid; Baicalin;Orthogonal test;HPLC
作者单位:467000河南省平顶山市中医医院
芩归地黄口服液是临床医师根据多年临床经验研制的颇有疗效的复方中草药制剂,具有清热解毒、利湿止痒的功效,临床主要用于治疗湿疹、皮炎等[1]。为保证临床疗效的稳定,更好地控制产品质量、优化制备工艺,本实验通过L9(34)正交试验法对制备工艺进行了研究。
1 仪器与试药
岛津LC-10A高效液相色谱仪, SPD-10A检测器,20μl定量进样阀;黄芩苷对照品(批号:715-200111,中国药品生物制品检定所);处方中所有药材均符合《中国药典》2005版一部标准;芩归地黄口服液为本院制剂;芩归地黄口服液阴性样品依据处方除去黄芩药材按相应制备工艺制成;甲醇为色谱纯,水为乐百氏纯净水,其余试剂均为分析纯。AG285电子分析天平。
2 制备工艺研究
2.1 正交试验设计 选取了对挥发油影响较大的加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)、药液含醇量(D)作为考察因素,以黄芩苷含量为评价指标,应用L�9(34)正交设计进行试验考察,因素水平见表1。
表1
因素水平表[1]
水平因素
加水量�(A)提取时间�(B)min提取次数�(C)药液含醇量�(D)
11:530260~65
21:1060365~70
31:1590470~75
2.2 试验方法 按芩归地黄口服液1/5处方量称取药材共9份,其中当归、金银花、陈皮提取挥发油,提取后的水溶液另器收集,药渣备用。合并其余药材与上述提取药渣,并按照正交试验表进行煎煮提取,合并煎煮提取液,醇沉,静置24 h,取上清液滤过,滤液回收乙醇,精密量取10 ml置50 ml量瓶中,加甲醇适量定容,摇匀。分别测定其中的黄芩苷的含量。正交试验结果见表2。方差分析见表3。
表2
L�9(34)正交试验结果
试验号ABCD黄芩苷含量(mg/ml)
111110.8206
212220.8951
313330.6003
421231.1052
522311.5028
623121.5459
731321.3035
832131.1035
933211.4011
K12.323.233.473.72
K2 4.153.53.43.74
K33.813.553.412.81
Sj0.640.0200.17
表3
方差分析表
方差来源离差平方和自由度均值F值显著性
A0.635980 2 0.317990 32.29 有
B0.000973 2 0.000486 0.05 无
D0.190411 2 0.095206 9.67 有
误差(C)0.019697 2 0.009848
注:F��1-0.1�(2,2)=9.00
由试验结果分析可知,各因素对药物有效成分含量的影响程度依次为A>D>B>C,即加水量>药液含醇量>提取时间>提取次数。最佳提取工艺为A2B3C1D2,即10倍量的水煎煮两次每次90 min。浓缩后加入乙醇使含醇量为65%～70%,放置24 h后滤过,回收乙醇。从方差分析可知A因素有极显著性意义,应取A2,B因素影响不大,从能源节约与成本考虑选取B2,D因素为显著因素,即药液含醇量对黄芩苷的提取也有显著影响,取D2。故最佳提取工艺条件修改为A2B2C1D2,即10倍量的水煎煮2次,每次60 min,浓缩后加入乙醇使含醇量为65%～70%,放置24 h后取上清液,回收乙醇。
2.3 优选工艺验证 根据正交试验结果,按此最佳工艺条件,分别制备3批芩归地黄口服液进行工艺验证,含量测定结果样品中黄芩苷的含量为1.584~1.586 mg/ml。结果表明该工艺稳定可行。
3 黄芩苷的含量测定
3.1 色谱条件 色谱柱: Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm); 流动相:甲醇-水-磷酸(45�∶�55�∶�0.2); 柱温30℃; 流速1.0 ml/min;检测波长:276 nm;进样量:20 μl。
3.2 溶液的制备[2]
3.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在60℃ 减压干燥至恒重的黄芩苷对照品20.4 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为初始溶液。再用移液管移取10 ml,置50 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
3.2.2 供试品溶液的制备 取正交试验下所得的药液,精密量取5 ml加甲醇超声处理20 min,定容至50 ml量瓶中,作为供试品溶液。
3.2.3 阴性对照溶液的制备 按样品除黄芩的处方及制备工艺配制不含黄芩的溶液,再按供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。
3.3 线性关系考察 精密吸取黄芩苷初始溶液(0.408 mg/ml)1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml分别置于10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,配成系列浓度的对照品溶液,按上述色谱条件,进样20 μl。以峰面积积分值Y为纵坐标,黄芩苷进样量X(μg)为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程Y=1761.533X+26.386,r=0.999 4,表明黄芩苷在0.8160～4.080 ug范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3.4 精密度试验 取同一水平的对照品溶液一份,重复进样5次,测定黄芩苷峰面积,RSD= 0.81%(n=5)。表明仪器精密度符合要求。
3.5 稳定性试验 取同一水平的供试品溶液一份,分别在制备后0,2,4,6,8,10 h进样,测定黄芩苷峰面积,RSD= 1.02%(n=6),表明供试品溶液在10 h内稳定。
3.6 复性试验 取同一水平的样品5份,按供试品溶液制备方法及测试条件测定,测得供试品黄芩苷的平均含量为1.3034 mg/ml,RSD= 0.93%(n=5),表明本法重现性良好。
3.7 干扰试验 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20ul,按上述色谱条件分别进行测定,黄芩苷与其他组分的分离度R>2,阴性对照无干扰,见图1。
图1 高效液相色谱图
A对照品溶液 B阴性对照溶液 C供试品溶液
3.8 加样回收率试验 精密吸取已知黄芩苷含量的某一水平下的样品溶液5份,另精密量取黄芩苷对照品初始液2 ml,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,吸取供试品溶液各20 ul,注入液相色谱仪,计算,平均回收率为100.2 %,RSD=0.47%(n=5)。
4 讨论
芩归地黄口服液处方是依据传统中医理论,结合目前药理研究的基础上化裁而来。为了使复方功效得到良好发挥,根据处方所含有效成分,在制定制备工艺路线时采取分步考察,以达到对本方中脂溶性和水溶性有效成分最大限度的提取目的。作为君药的黄芩具有清热燥湿,泻火解毒的功效,其主要有效成分黄芩苷具有抗菌、抗炎、降低转氨酶等作用[3、4]。本实验以该方的主要活性成分黄芩苷的提取量作为考察指标,通过正交试验,优选最佳制备工艺条件。结果显示所制定的制备工艺合理可行,药材的有效成分的提取更为完全,符合口服液质量要求,为保证该制剂稳定的临床疗效提供了基础理论依据。
参 考 文 献
[1] 袁继民,于连生.现代药物制剂技术.济南出版社,1992:105.
[2] 国家药典委员会.中国药典.中国医药科技出版社,2005:69,620.
[3] 田代华.实用中药词典.人民卫生出版社,2003:179.
[4] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.人民卫生出版社,1996:216.
