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[摘要] 目的:建立测定骨刺宁胶囊中人参皂苷Rg1的含量测定方法。方法:采用AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水(20∶80)为流动相;流速:1.0 ml/min;柱温:25 ℃。检测波长:203 nm。结果:人参皂苷Rg1在3.765～10.040 μg范围内线性良好,回归方程为:Y=269 005X-5 893.7,r=0.999 6,平均回收率97.33%,RSD为1.19%。结论:该法简便、准确、重现性好,可用于本制剂质量控制。
[关键词] 骨刺宁胶囊;人参皂苷Rg1; HPLC
[中图分类号]R927.2[文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2009)07(a)-070-02
骨刺宁胶囊是由三七、土鳖虫等药材精制而成,具有活血化瘀,通络止痛的作用。为了更好的控制骨刺宁胶囊质量,选用君药中有效成分人参皂苷Rg1为含量测定指标,并摸索采用HPLC法测定其含量。经实验,方法可行,阴性无干扰。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪;AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱。试剂:甲醇和乙腈为色谱纯试剂,水为重蒸水。
1.2 试验用药
骨刺宁胶囊(自制,批号:060801);对照品:人参皂苷Rg1(含量测定用,批号0703-200120,中国药品生物制品检定所)。
2 色谱条件
AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以水-乙腈(20∶80)为流动相,检测波长:203 nm;柱温:25℃;流速:1.0 ml/min;在此条件下人参皂苷Rg1与其他组分均达到基线分离。
3 溶液的制备
3.1 对照品溶液制备
取人参皂苷Rg1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含0.6 mg溶液,即得。
3.2 供试品溶液制备
本品适量,取约1 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,称定重量,超声处理30 min(功率250 W,频率33 kHz),放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,用干燥滤纸滤过,精密量取续滤液25 ml,蒸干,残渣加水20 ml使溶解,移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇振摇提取3次(分别为20、20、10 ml),合并正丁醇液,用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次,每次15 ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5 ml使溶解,通过D101大孔树脂柱(内径1.7 cm,长18.0 cm),以30%乙醇50 ml洗脱,弃去洗脱液,再以70%乙醇50 ml洗脱,收集70%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得。
3.3 测定方法
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液10 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
3.4 阴性样品溶液制备
按处方比例称取除三七以外的药材,按制备工艺制成缺三七的阴性样品,按上述供试品制备方法制成缺三七的阴性样品溶液。
精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,测定。结果表明,供试品溶液色谱中,在与人参皂苷Rg1对照品色谱峰相应位置上有相应峰,而阴性样品溶液色谱中无此峰,说明阴性无干扰。
4 标准曲线绘制
精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(1.255 mg/ml)3、4、5、6、7、8 ml于10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得,分别精密量取10 μl,按拟定色谱条件测定,分别以峰面积积分值(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程。人参皂苷Rg1线性方程为:Y=269 005X-5 893.7,r=0.999 6。人参皂苷Rg1进样量在3.765～10.040 μg范围内呈良好的线性关系。
5 精密度试验
精密吸取同一份供试品溶液10 μl,重复进样5次,测定其峰面积积分值, RSD为0.87%。结果表明:本方法精密度良好。
6 稳定性试验
分别精密吸取同一份供试品溶液10 μl,隔2 h进样,测定其峰面积积分值,结果RSD为1.50%。结果表明,供试品溶液在12 h内基本稳定。
7 重现性试验
取同一批样品5份,按上述条件依法处理并测定含量,结果RSD为1.2%。结果表明:本方法重现性好。
8 加样回收率试验
取已知含量骨刺宁胶囊(060801)5份,每份约0.5 g,精密称定,置锥形瓶中,分别添加适量人参皂苷Rg1对照品,按供试品溶液制备方法制成供试品溶液,按拟定色谱条件测定。
9 讨论
笔者曾采用甲醇、乙醇超声或回流提取,综合比较,以本文选用方法最为理想。三七中主含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1等,曾探索用梯度洗脱法同时测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的含量,结果表明,梯度洗脱时人参皂苷Rg1与人参皂苷Re二者很难达到有效分离;三七皂苷R1、人参皂苷Rb1附近均有干扰成分存在,不能达到有效分离,故选择人参皂苷Rg1作为该制剂含量控制的指标成分。
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(收稿日期:2009-04-10)
