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[摘要] 目的:根据临床需要配制小儿复方甘草合剂,并进行质量控制。方法:采用紫外分光光度法测定小儿复方甘草合剂中愈创木酚甘油醚的含量。结果:建立的分析方法不受辅料干扰。愈创木酚甘油醚的线性范围为10～60 μg/ml,回归方程为:A=0.012 5C-7.667×10-3,r=0.999 9,平均回收率为 98.35%,RSD为1.12%(n=9)。结论:小儿复方甘草合剂制备工艺简单,质量控制方法可行。
[关键词] 小儿复方甘草合剂;制备方法;质量控制
[中图分类号] R943.1[文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)06(c)-123-03
Preparation and quality control of wean compound glycyrrhiae mixture
CAI Qing1, LI Jianhe2*, CAO Junhua2
(1.Department of Pharmacy, People"s Hospital of Hunan Province, Changsha 410005, China; 2.Department of Pharmacy,The Second XiangYa Hospital, Central South University, Hunan Province, Changsha 410011, China)
[Abstract] Objective: To prepare wean compound glycyrrhiae mixture and control its quality. Methods: Using UV spectrophotometry to determine the content of guaifenesine. Results: The content detective method was not be disturbed by the supplementary material. The linear range of guaifenesine was 10～60 μg/ml. The regression equation was A=0.012 5C-7.667×l0-3, r=0.999 9. The average recovery rate was 98.35% and the relative standard deviation was 1.12%(n=9). Conclusion: The preparation was simple and the method could be used to control its quality.
[Key words] Wean compound glycyrrhiae mixture; Preparation technics; Quality control
复方甘草合剂处方中含“酒石酸锑钾”[1-2]。鉴于酒石酸锑钾的毒性问题,20世纪90年代初酒石酸锑钾被取消了药用规格,同时中国药典1995年版已删除了该品种。为此,1999年国家食品药品监督管理局药品安全监管司组织开展了对复方甘草合剂的再评价工作。根据再评价结果,将复方甘草合剂更名为“复方甘草口服溶液”,并从2004年7月1日起复方甘草口服溶液执行新的质量标准及说明书。原处方中的“酒石酸锑钾”改为“愈创木酚甘油醚”,并采用高效液相色谱法测定其含量。为此,笔者将本院原小儿复方甘草合剂的处方进行修改,并在参考相关文献[3-5]的基础上,重新拟定了质量标准,以满足临床需要。现将其研究结果报道如下:
1 一般资料
UV-2201 紫外分光光度计(日本岛津);LC-10ATvp型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD-10Avp紫外检测器(日本岛津);CP225D 型电子天平(德国赛多利斯);868 型酸度计(美国奥立龙)。愈创木酚甘油醚(天津中新新口制药厂,批号:090406);愈创木酚甘油醚对照品(中国药品生物制品检定所, 090616);小儿复方甘草合剂(湖南省人民医院药剂科自制,批号:091117、091118、091119);其余试药均为药用原辅料或分析纯试剂。
2 方法与结果
2.1 处方与工艺
2.1.1 处方
甘草流浸膏120 ml,复方樟脑酊(不含鸦片酊)120 ml,单糖浆120 ml,愈创木酚甘油醚 50 g,乙醇30 ml,10%氨溶液适量,蒸馏水加至1 000 ml。
2.1.2 工艺
取甘草流浸膏加甘油混匀,加蒸馏水 500 ml稀释后,缓缓加浓氨溶液适量,调节药液pH值至 8～9,再加愈创木酚甘油醚的水溶液(取愈创木酚甘油醚加适量热蒸馏水溶解制成),边加边搅拌,最后加复方樟脑酊、乙醇,再加适量蒸馏水使之达到1 000 ml,摇匀,分装,即得。
2.2 质量控制
2.2.1 性状
本品为棕色或棕黑色液体;有香气,味甜,久置偶有沉淀。
2.2.2 鉴别
2.2.2.1 取本品在含量测定项中加无水乙醇溶解并加至刻度后的溶液10 ml,加甲醛2滴和硫酸0.5 ml混合,即显深紫红色。
2.2.2.2 取本品20 ml,置锥形瓶中,加水10 ml与盐酸6 ml,用带孔的软木塞密塞,软木塞的孔中插入一玻璃管,玻璃管上端复盖一小片苯胺试纸(取滤纸用新蒸馏的苯胺1 ml与10%醋酸9 ml的混合液湿润制成),摇匀,微沸2 min,苯胺试纸即显红色。
2.2.2.3 取本品1～2滴,加碱性酒石酸铜试液1～2滴,显草绿色。
2.2.2.4 取本品1瓶摇匀,量取3 ml,加盐酸5 ml,氯仿30 ml,在85℃回流1.5 h,取出,放冷。分取氯仿层,通过无水硫酸钠滤过,蒸干,残留物加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品适量,用甲醇制成每1毫升中约含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版二部附录VB)试验,吸取上述两种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶1)为展开剂,展开后,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点清晰,供试品所显甘草次酸斑点的位置和颜色应与对照品的主斑点相同。
2.3 检查
2.3.1 外观性状
本品不得有发霉、酸败、变色、异臭、产气或存在其他变质现象。
2.3.2 pH值
依法检查(中国药典2005年版二部附录ⅥH),应为6.0～9.0。
2.3.3 微生物限度
依法检查(中国药典2005年版二部附录XI J),应符合规定。
2.3.4 其他
应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版二部附录IO)。
2.4 含量测定
2.4.1 方法
精密量取本品10 ml于50 ml烧杯中,加 0.1 mol/L盐酸溶液约8 ml,调节 pH值为2,摇匀,放置 15 min,过滤。滤渣用少量水洗3次,合并滤液并水浴蒸干至约8 ml,加氢氧化钠溶液(1→10)2 ml,搅匀后用氯仿15、10、10 ml在分液漏斗中提取3次,合并提取液于 50 ml容量瓶中,置水浴上蒸干,加无水乙醇溶解并加至刻度,摇匀,使每1毫升中含愈创木酚甘油醚40 μg的溶液。以无水乙醇为空白溶液照分光光度法在(275±1) nm波长处测定吸收度,并计算其含量,含量应为标示量的90%～110%。
2.4.2 测定条件的选择
精密称取干燥至恒重的愈创木酚甘油醚对照品 0.5 g,用无水乙醇配制成 40 μg/ml 溶液作为A液。按处方比例精密量取甘草流浸膏、复方樟脑酊、单糖浆、乙醇等适量,于100 ml量瓶中,配制成不含愈创木酚甘油醚的辅料溶液,按“3.4.1”项下方法操作至“加无水乙醇溶解并加至刻度”,作为 B 液。A、B 两液均采用紫外分光光度法,在(275±1)nm波长处测定吸收度。结果表明:A液在该波长处有最大吸收,而B液在该波长处几乎无吸收,故选择275 nm 作为愈创木酚甘油醚的测定波长。
2.4.3 标准曲线的绘制
取干燥至恒重的愈创木酚甘油醚对照品约0.5 g,置50 ml量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。分别精密量取 1、2、3、4、5、6 ml,再进一步用无水乙醇稀释成10、20、30、40、50、60 μg/ml梯度溶液。以无水乙醇为空白,在(275±1) nm 波长处测定吸收度,求得浓度(C)与吸收度(A)的回归方程:A=0.012 5C-7.666 7×l0-3,r=0.999 9。愈创木酚甘油醚在10～60 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.4.4 回收率试验
精密称取愈创木酚甘油醚对照品约 0.4、0.5、0.6 g,并取其他药物,按处方比例分别配成 100 ml样品,按“3.4.1”项下方法操作,每个浓度的样品各测定3次,代入回归方程计算回收率,结果见表1。
2.4.5 精密度试验
采用本法对同一样品平行测定 9 次,测得吸收度,代入回归方程,求得其含量分别为:0.499 6%、 0.487 7%、0.486 7%、0.498 7%、0.497 7%、0.486 7%、0.498 8%、0.488 0%、0.489 0%,其平均值为0.492 5%,RSD=1.20%(n=9)。
2.4.6 稳定性试验
取回收率项下的待测溶液,密封后分别置室温条件下放置0、1、3、6、 8 h后测定吸收度,结果几乎无变化。
2.4.7 样品含量测定
按“3.4.1”项下方法操作,分别对3批样品的含量进行测定,并与高效液相色谱法进行比较。高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验:用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂,用0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液-0.002 5 mol/L庚烷磺酸钠水溶液-乙睛(18∶18∶10)为流动相,检测波长220 nm,理论板数按愈创木酚甘油醚峰计算应不低于2 000。测定法:取以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的固相小柱1支,依次用甲醇-水(3∶1)混合溶液15 ml及水5 ml冲洗,再用pH值约为9的氨水溶液冲洗至流出液pH值约为9,待用。取本品1瓶,超声处理10 min,取出,摇匀;精密量取1.0 ml,置50 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀;精密量取0.5 ml置上述固相小柱上,收集流出液于5 ml量瓶中,待溶剂滴尽后,加含30%甲醇的5%醋酸溶液洗脱,收集洗脱液于上述5 ml量瓶中,至刻度,摇匀,精密量取20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图。另精密称取经减压干燥12 h的愈创木酚甘油醚对照品适量,用含有30%甲醇的5%醋酸溶液配制成每1毫升中约含0.01 mg溶液,同法测定。按外标法以愈创木酚甘油醚峰面积计算,即得。测定结果见表2。经t检验得t=2.388,查表得知:t0.05,4=2.776,t0.05,表明两法差异无统计学意义。
3讨论
样品提取时加入0.1 mol/ml盐酸调pH值至2以下,并需放置片刻,有利于除去样品中的甘草次酸等杂质。加氢氧化钠溶液(1→10)搅匀后需尽快用氯仿分次充分提取。
水浴蒸干时可考虑用电磁炉加热更安全、快捷。
采用紫外分光光度对照品比较法测定小儿复方甘草合剂中愈创木酚甘油醚的含量,其操作简便易行、快速,线性和重现性等良好,测定结果与高效液相色谱法基本一致,且准确可靠,符合医院制剂生产实际。
[参考文献]
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[3]李莉,杨文远. HPLC测定复方甘草口服溶液中的愈创木酚甘油醚[J].中医药学报,2005,33(6):29-30.
[4]秦庆芳,林华,廖艺.31批复方甘草口服溶液的质量考察[J].中国药房,2008,19(9):689-691.
[5]贺国芳,林芳,闵敏.SPE-HPLC法测定复方甘草口服溶液中愈创甘油醚的含量[J].中国药师,2006,9(8):741-743.
(收稿日期:2010-05-19)
